柴胡皂苷A對內毒素誘導子癇前期大鼠模型的影響

楊永康，張淼芳，楊 靜，張 婷

(陜西中醫藥大學第二附屬醫院，陜西 咸陽 712000)

子癇前期是一種妊娠期特發疾病，雖然發病率不高，卻嚴重影響孕婦及胎兒的健康。母體、胎盤及胎兒等諸多因素都有可能參與子癇前期的發生，而氧化應激以及炎癥反應作為子癇前期發病的重要潛在因素近年來受到學者的廣泛關注，如何通過抑制氧化應激以及炎癥反應減少子癇前期的發生是目前研究的熱點[1-3]。柴胡皂苷A(SSA)是中藥柴胡的主要提取物，其能夠抑制氧化應激反應，抑制內毒素(LPS)誘導的炎癥反應，降低LPS的動物毒性作用[4-6]；能夠調節機體的免疫功能，而對免疫細胞功能的調節是其潛在的機制[7-8]。本研究觀察了SSA對LPS誘導子癇前期大鼠模型的影響，旨在為子癇前期的預防治療提供更多依據。

1 實驗資料

1.1實驗動物 40只10周齡雌性SD大鼠，購買并飼養于西安交通大學醫學部動物中心，動物合格證號：SCXK2007-001。

1.2實驗方法 試驗方案通過陜西中醫藥大學及西安交通大學動物倫理委員會審核并批準。待雌性大鼠處于發情期時，與同處發情期健壯雄性SD大鼠1∶1配對過夜。次日檢測雌鼠陰道精子作為受孕成功的標志，記錄為受孕第1天。40只雌性大鼠中共計受孕33只，將33只受孕大鼠按完全隨機法分成空白組、LPS組和LPS+SSA組，每組11只。受孕第5天，測每只受孕鼠體質量與血壓。自受孕第5天始，空白組尾靜脈注射2 mL生理鹽水，LPS組尾靜脈注射0.5 mg/kg LPS(購自美國Sigma公司)溶液2 mL，LPS+SSA組尾靜脈注射0.5 mg/kg LPS和20 mg/kg SSA(購自美國Sigma公司)混合溶液2 mL，均1次/d，至受孕第18天。

1.3檢測指標 ①注射結束后，使用尾套法測量各組孕鼠8:00—10:00收縮壓和舒張壓，測血壓前先將孕鼠置于38 ℃環境中，待大鼠適應環境后每只孕鼠連續監測血壓15次，連續3次血壓值差異在6 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)內記錄為有效血壓。②收集干預最后一天20:00—10:00每只孕鼠的總尿液，收集前將孕鼠置于獨立的代謝籠中，期間禁食。③測量每只孕鼠體質量，之后腹腔注射10%水合氯醛3 mL/kg麻醉孕鼠，手術分離子鼠并測量每只子鼠體質量。孕鼠體質量變化計算公式：體質量變化=受孕第18天體質量-子鼠體質量-受孕第5天體質量。

1.4統計學方法 所有實驗數據使用Photoshop 5.0作圖，采用SPSS 22.0統計軟件、以單因素方差法對實驗結果進行統計分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組孕鼠血壓比較 LPS組收縮壓和舒張壓均明顯高于空白組(P均<0.05)，提示子癇前期模型建立成功；LPS+SSA組收縮壓和舒張壓均明顯低于LPS組(P均<0.05)，與空白組比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見圖1及圖2。

圖1 各組孕鼠收縮壓比較

2.2各組孕鼠尿蛋白量比較 LPS組尿蛋白量明顯高于空白組(P<0.05)，而LPS+SSA組尿蛋白量明顯低于LPS組(P<0.05)，與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見圖3。

圖2 各組孕鼠舒張壓比較

圖3 各組孕鼠尿蛋白量比較

2.3各組孕鼠及子鼠體質量比較 3組間孕鼠體質量變化比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，見圖4；LPS組子鼠體質量明顯低于空白組(P<0.05)，LPS+SSA組子鼠體質量明顯高于LPS組(P<0.05)，與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)，見圖5。

圖4 各組孕鼠體質量變化比較

圖5 各組子鼠體質量比較

3 討 論

LPS誘導的子癇前期大鼠模型因為操作簡便，造模成功率高而廣泛用于子癇前期的研究。雖然炎癥并不是子癇前期發生的唯一原因，而且LPS誘導的子癇前期模型僅能夠表現出部分子癇前期表型，但此模型對于研究子癇前期中異常炎癥反應與炎癥信號的傳導與轉化機制具有重要意義[9-10]。本研究發現LPS誘導后孕鼠收縮壓、舒張壓、尿蛋白量均明顯升高，子鼠體質量明顯降低，提示子癇前期模型建立成功。

中藥柴胡具有抗炎、止痛及清熱的藥效，廣泛用于臨床。SSA作為柴胡的主要提取物，其能夠通過抑制ERK/NF-κB信號通路，顯著下調IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性因子的表達，抑制炎癥反應[11-13]；其還能夠調節煙酸、煙酰胺以及花生四烯酸代謝，具有明確的抑制炎癥的潛在分子基礎[14]。但SSA是否能夠通過抑制炎癥抑制子癇前期的發生目前并不清楚。

本研究結果發現，LPS+SSA組孕鼠血壓及尿蛋白量均明顯低于LPS組，而子鼠體質量明顯高于LPS組，且均與空白組相近； 3組間孕鼠體質量變化比較差異均無統計學意義。提示LPS造模對母體無明顯影響，但顯著影響胎鼠的生長與發育，而SSA能夠抑制LPS誘導的血壓及尿蛋白升高，抑制子癇前期的發生，為將來SSA應用于臨床預防或治療子癇前期提供了理論基礎。但SSA是如何抑制LPS所誘導的子癇前期的發生尚不清楚，有待后續進一步研究。

[參考文獻]

[1] Gathiram P,Moodley J. Pre-eclampsia: its pathogenesis and pa-thophysiolgy[J]. Cardiovasc J Afr,2016,27(2):71-78

[2] Phipps E,Prasanna D,Brima W,et al. Preeclampsia: Updates in Pathogenesis, Definitions, and Guidelines[J]. Clin J Am Soc Nephrol,2016,11(6):1102-1113

[3] Alijotas-Reig J,Esteve-Valverde E,Ferrer-Oliveras R,et al. Tumor necrosis factor-alpha and pregnancy:focus on biologics. An updated and comprehensive review[J]. Clin Rev Allergy Immunol,2017,4(1):1-14

[4] 于俊林. 柴胡藥用部位的研究進展[J]. 中藥材,1999,22(6):315-317

[5] Chao Z,Cui Q,Tian E,et al. Ultrasensitive time-resolved fluoroimmunoassay for saikosaponin a in chaihu (bupleuri radix)[J]. PLoS One,2016,11(3):e151032

[6] Wei Z,Wang J,Shi M,et al. Saikosaponin a inhibits LPS-induced inflammatory response by inducing liver X receptor alpha activation in primary mouse macrophages[J]. Oncotarget,2016,7(31):48995-49007

[7] Park WH,Kang S,Piao Y,et al. Ethanol extract of Bupleurum falcatum and saikosaponins inhibit neuroinflammation via inhibition of NF-kappaB[J]. J Ethnopharmacol,2015,174(1):37-44

[8] Zhu J,Luo C,Wang P,et al. Saikosaponin a mediates the inflammatory response by inhibiting the MAPK and NF-kappaB pathways in LPS-stimulated RAW 264.7 cells[J]. Exp Ther Med,2013,5(5):1345-1350

[9] Ding X,Yang Z,Han Y,et al. Correlation of long-chain fatty acid oxidation with oxidative stress and inflammation in pre-eclampsia-like mouse models[J]. Placenta,2015,36(12):1442-1449

[10] 肖仲琳，楊青，張鍵，等. 子癇前期動物模型的研究進展[J]. 生物化學與生物物理進展,2016,43(6):563-569

[11] 呂曉慧，孫宗喜，蘇瑞強，等. 柴胡及其活性成分藥理研究進展[J]. 中國中醫藥信息雜志,2012,19(12):105-107

[12] 牛向榮. 柴胡藥理作用研究概述[J]. 中國藥師,2009,12(9):1310-1312

[13] Kim SO,Park JY,Jeon SY,et al. Saikosaponin a, an active compound of Radix Bupleuri, attenuates inflammation in hypertrophied 3T3-L1 adipocytes via ERK/NF-kappaB signaling pathways[J]. Int J Mol Med,2015,35(4):1126-1132

[14] Ma Y,Bao Y,Wang S,et al. Anti-inflammation effects and potential mechanism of saikosaponins by regulating nicotinate and nicotinamide metabolism and arachidonic acid metabolism[J]. Inflammation,2016,39(4):1453-1461