不同煙齡的健康人群免疫功能的對比性研究＊

郭玲玲，涂紅纓，熊美麗，溫孝如，何艷玲，鄒國明

(江西省人民醫院呼吸科，南昌 330008)

煙草中含有大量對人體有害的化學物質，包括尼古丁、一氧化碳、氮氧化合物等。吸煙（包括主動及被動吸煙）已經證實與慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、腫瘤性疾病(如肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等)、冠心病、自身免疫性疾病（如類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、克羅恩病等）等多種疾病密切相關。且可能通過影響細胞及體液免疫、改變各種炎癥介質的釋放等機制導致或者參與了這些疾病的發生和發展。這在吸煙導致COPD中已經得到證實。在吸煙的健康人群中是否也存在細胞免疫及體液免疫的異常呢？本研究通過檢測非吸煙人群和不同嚴重程度的吸煙人群的T細胞亞群及免疫球蛋白水平，以期分析吸煙對人體細胞免疫及體液免疫的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入2014年1月至2016年12月在我院體檢的400例男性健康體檢者（排除任何急性及慢性疾病，尤其需要除外呼吸系統、心血管系統、風濕免疫系統、腫瘤、慢性肝炎等疾病），年齡均在45-60歲之間，根據吸煙指數分為：⑴非吸煙組：既往及目前均不吸煙者100例；⑵吸煙指數＜300組 （吸煙指數=吸煙年數×每天吸煙支數）：100例；⑶吸煙指數300-400組：100例；⑷吸煙指數＞400組：100例。

1.2 實驗方法 在充分告知并知情同意下，400例研究對象均在清晨空腹狀態下抽取靜脈血兩管（各為3ml，1管抗凝血，1管非抗凝血）分別進行T細胞亞群、免疫球蛋白測定。流式細胞儀為Beckman-coulter公司生產，型號為EPICS-XL。所用 CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體均為 Beckman 公司生產。實驗步驟為：取新鮮抗凝血100μl分別加入 6μl CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體，振蕩混勻后室溫避光溫育20min，每管加入300μl溶血素，振蕩混勻，室溫下溫育15min。加入700μl磷酸鈉緩沖液 （PBS），震蕩后上機檢測。免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用美國 Beckman-coulter公司生產的IMMAGE 800型雙光徑免疫濁度分析儀檢測。按照說明書操作規程進行。

1.3 統計分析 采用SPSS 19.0進行統計分析，所用數據以±s）表示，兩組之間的比較采用多因素方差分析，P＜0．05 為差異有統計學意義，P＜0.01 為差異有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料 400例研究對象均為男性，年齡在45-60歲之間，中位年齡51歲。四組研究人群在年齡方面具有可比性。

2.2 4組研究人群的T細胞亞群及免疫球蛋白資料見表1。

吸煙指數300-400組、吸煙指數＞400組與非吸煙組相比，CD3+%、CD4+%均明顯降低，差異具有顯著的統計學意義(P值＜0.01)。吸煙指數＜300組與非吸煙組相比，T淋巴細胞亞群差異無統計學意義。3個吸煙組之間相比隨著吸煙年支的增加CD3+%有下降趨勢，差異有統計學意義。吸煙指數＜300組、吸煙指數300-400組、吸煙指數＞400組與非吸煙組相比，CD8+%有下降趨勢，但差異沒有統計學意義。吸煙指數＜300組、吸煙指數300-400組、吸煙指數＞400組與非吸煙組相比IgA、IgM有減少趨勢，但差異均無統計學意義。吸煙組與非吸煙組相比，CD4+/CD8+、IgG差別無統計學意義。

表1 4組研究人群T細胞亞群及免疫球蛋白結果

3 討論

T淋巴細胞源于骨髓的淋巴樣干細胞，在胸腺中發育成熟，是機體細胞免疫的效應細胞和免疫調節細胞。外周血中CD3+T細胞代表成熟的T淋巴細胞，根據其功能分為CD4+T細胞（T輔助淋巴細胞，Th） 和CD8+T細胞 （細胞毒T細胞，CTL）。CD4+T細胞主要發揮細胞免疫功能及分泌細胞因子促進B細胞增殖及產生抗體，進一步影響體液免疫。而CD8+T細胞主要對靶細胞發揮細胞介導的細胞毒作用，同時分泌細胞因子抑制B細胞產生抗體。CD4+T/CD8+T細胞維持一定的比例是保證機體正常免疫穩態的前提。

煙草中含有數千種對人體有害的化學物質。目前已經證明在呼吸系統吸煙可以導致COPD、肺癌等疾病。吸煙可能通過影響人體的免疫功能導致這些疾病的發生[1]。如Forssund等[2]研究發現，吸煙組及吸煙合并COPD組的支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的CD4+T細胞均低于非吸煙組，而CD8+T細胞高于非吸煙組。同時吸煙者無論是否合并COPD其外周血CD4+T細胞均低于非吸煙組。國內研究[3，4]也發現COPD患者的外周血中CD4+T細胞低于健康對照組，而CD8+T細胞高于健康對照組，CD4+T/CD8+T細胞比例存在失衡，提示COPD患者存在細胞免疫受損。同時國內學者還發現吸煙COPD患者存在外周血免疫球蛋白的降低，提示存在體液免疫受損[5]。

目前關于吸煙對免疫功能影響的研究大多集中在COPD人群。在吸煙非COPD患者中細胞及體液免疫是否受影響，及不同程度的吸煙對免疫功能的影響如何，目前研究較少。為排除性別、年齡對研究的影響，本研究全部選擇健康體檢的男性患者，年齡45-60歲。研究發現吸煙組CD3+%、CD4+%較非吸煙組明顯下降，且隨著吸煙嚴重程度的提高，下降更明顯。這與之前在COPD人群的研究結果相同。但是本研究未在吸煙人群中發現CD8+T細胞的提高，與孫雯雯等[3]在COPD人群中的研究結果不同。分析原因可能為本研究納入人群年齡較輕，且均為健康人群有關。或者由于背后的遺傳易感性因素，這些人群雖然煙草暴露時間足夠長，但并未發展為COPD。Maeno T等[6]在吸煙誘導的小鼠肺氣腫模型中發現CD8+T細胞在肺組織炎癥細胞的招募及肺彈性組織的破壞中發揮重要的作用。進一步研究發現CD8+T細胞通過分泌干擾素誘導蛋白10(IFN-γ--inducibleprotein-10)，誘導基質金屬蛋白酶12的產生，導致肺彈性蛋白的降解，從而導致肺組織的破壞及肺氣腫的發生。而CD8+T細胞缺陷的小鼠在長期煙草暴露下僅發現微弱的炎癥反應，且不能發展為肺氣腫，再次證實CD8+T細胞在吸煙所致肺氣腫中的不可缺少的重要作用。另外從9例吸煙合并COPD患者和7例健康吸煙者的肺組織標本中也發現，吸煙合并COPD患者外周氣道的CD8+T細胞明顯高于健康吸煙者[7]。這也許能解釋本研究納入人群為何外周血CD8+T細胞沒有明顯升高，為何吸煙這么長時間沒有發生COPD。

關于吸煙對體液免疫的影響，國內外研究結果不完全相同，國內研究多發現吸煙可以導致免疫球蛋白 IgA、IgG、IgM 的下降[5，8，9]。推測其可能機制為吸煙導致CD4+T細胞數量減少，導致其分泌細胞因子減少，從而影響了B細胞增殖及產生抗體，進一步影響體液免疫。但國外有些不同的研究結果，如有研究發現健康吸煙人群的血清IgG水平低于非吸煙人群，但IgM，IgA無明顯降低[10]。本研究未發現吸煙對健康男性免疫球蛋白的影響，與之前研究不同。推測原因可能可能跟本研究納入人群均為健康男性患者，且年齡較輕有關。

總之，吸煙可以損害人體的細胞免疫系統，表現為CD3+%、CD4+%的下降，且隨著吸煙嚴重程度的提高，這種下降可能更明顯。

參考文獻

[1]劉乾中，周海鳳，徐曉君，等.COPD和哮喘患者細胞免疫與內源性皮質醇臨床意義研究[J].江西醫藥，2014，49（3）：191-194.

[2]Forsslund H，Mikko M，Karimi R，et al.Distribution of T-cell subsets in BAL fluid of patients with mild to moderate COPD depends on current smoking status and not airway obstruction[J].Chest，2014， 145(4)：711-722.

[3]孫雯雯，李燕芹，劉斌，等.慢性阻塞性肺疾病患者的細胞免疫劑細胞因子水平變化 [J].中國老年學雜志，2010，8（30）：2124-2126.

[4]Zhang MQ，Wan Y，Jin Y，et al.Cigarette smoking promotes inflammation in patients with COPD by affecting the polarization and survival of Th/Tregs through up-regulation of muscarinic receptor 3 and 5 expression[J].PLOS One，2014，9：e112350.

[5]陳立文，李崇文.不同病程COPD患者免疫功能的臨床分析[J].中國實驗診斷學，2017，21（1）：32-34.

[6]Maeno T，Houghton AM，Quintero PA，et al.CD8+T Cells are required for in?ammation and destruction in cigarette smokeinduced emphysema in mice[J].J Immunol，2007，178(12)：8090-8096.

[7]Saetta M，Di Stefano A，Turato G，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].Am J Respir Crit Care Med，1998，157(3)：822-826.

[8]朱娜，徐國正，王蜀湘.吸煙對免疫球蛋白的影響[J].中國醫藥科學，2012，2(6)：146.

[9]薛紅，趙輝，張蕊.吸煙對體內免疫球蛋白及補體的影響[J].中國公共衛生，2014，30(12)：1616.

[10]A Gonzalez-Quintela，R Alende，F Gude，et al.Serum levels of immunoglobulins(IgG，IgA，IgM)in a general adult population and their relationship with alcohol consumption，smoking and common metabolic abnormalities[J].Clin Exp Immunol，2008，151(1)：42-50.