TOP2Α與乳腺癌臨床特征及新輔助化療效果的關系研究

喬江華，焦得闖，王麗娜，朱久俊，盧振鐸，劉真真

河南省腫瘤醫院（鄭州大學附屬腫瘤醫院）乳腺科，鄭州 450008

隨著臨床研究的深入，新輔助化療的價值及其對患者獲得病理完全緩解（pathological complete response，PCR）的價值越來越被臨床醫師認可。新輔助化療的適應證不局限于局部晚期乳腺癌患者，早、中期乳腺癌患者也開始接受新輔助化療，希望可以從中獲得生存獲益。因此，如何更好地預測新輔助化療的效果并篩選更容易獲得PCR的患者，成為臨床研究的熱門問題。目前研究已經證實雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progestogen receptor，PR）陰性及細胞核相關抗原Ki-67高表達的患者獲得PCR的概率更高[1-6]。也有研究顯示，拓撲異構酶Ⅱα（topoisomeraseⅡα，TOP2Α）表達陽性，提示細胞處于增殖狀態，可反映細胞的增殖活性，對新輔助化療效果有預測價值[7]。本研究通過分析349例乳腺癌患者的病歷資料，探討TOP2Α與乳腺癌患者臨床特征的關系及其對新輔助化療效果的預測價值，旨在尋找新輔助化療效果的預測指標，更好地實現精準化治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2009年6月1日至2009年12月31日河南省腫瘤醫院收治的349例乳腺癌手術患者的病歷資料。納入標準：常規石蠟病理檢查確診為浸潤性乳腺癌。排除標準：導管原位癌、炎性乳腺癌、轉移性乳腺癌和不能耐受化療的患者。采用第7版AJCC標準對患者進行臨床分期：T1，腫瘤最大直徑≤2.0 cm；T2，2.0 cm＜腫瘤最大直徑≤5.0 cm；T3，腫瘤最大直徑﹥5.0 cm；T4，任何體積的腫瘤侵犯胸壁和（或）皮膚。349例乳腺癌患者均為女性，年齡為27～83歲，中位年齡為48歲；T1～2284例，T3～465例；無淋巴結轉移170例，有淋巴結轉移179例；256例直接行手術治療，93例術前接受了4～6個周期的新輔助化療。新輔助化療的納入標準：①臨床分期為Ⅱ～Ⅲ期的乳腺癌患者；②行空芯針活檢并常規石蠟切片檢查，確診為浸潤性乳腺癌；③術前全身檢查評估，無化療禁忌證。排除標準：炎性乳腺癌，伴有遠處轉移，不能耐受化療。93例接受新輔助化療患者的年齡為27～63歲，中位年齡為42歲；氟尿嘧啶（fluorouracil）+表柔比星（epirubicin）+環磷酰胺（cyclophosphamide）化療方案（簡稱FEC方案）64例，多西他賽（docetaxel）+表柔比星（epirubicin）+環磷酰胺（cyclophosphamide）化療方案（簡稱DEC方案）29例，化療后均行乳腺癌改良根治術，伴鎖骨上淋巴結轉移的患者行鎖骨上淋巴結清掃術，術后繼續完成既定的化療方案，同時有放療指征的患者接受放療，激素受體陽性的患者接受內分泌治療，但人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）擴增型患者因受治療條件的限制未接受靶向治療。

1.2 檢測方法

采用免疫組化法檢測ER、PR、HER2、TOP2Α、Ki-67的表達情況。收集349例乳腺癌患者的癌組織石蠟標本，重新切片，由本院兩位病理科高級職稱醫師重新閱片、判定。ER或PR陽性為超過1%的腫瘤細胞染色。HER2蛋白表達水平被劃分為0～+++，其中0、+為HER2蛋白無擴增，+++為HER2蛋白擴增，而++為HER2狀態不確定，未進一步行熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）檢測明確HER2水平。Ki-67指數：以陽性細胞數量占全部腫瘤細胞數量的平均比例作為量化指標，Ki-67指數≤14%為Ki-67低表達，﹥14%為Ki-67高表達[8]。TOP2Α的CUTOFF值，目前尚無一致的結論，本文暫定：陽性細胞比例＞10%為TOP2Α蛋白表達陽性，≤10%為TOP2Α蛋白表達陰性。PCR：新輔助化療后乳腺原發病灶內術后標本檢測無腫瘤細胞殘留。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件分析數據，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；多因素分析采用Logistic回歸分析（enter法），P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TOP2Α表達與臨床特征的關系

349例乳腺癌患者中，222例（63.61%）為TOP2Α表達陽性，ER陰性、Ki-67高表達患者的TOP2Α表達陽性率分別明顯高于ER陽性、Ki-67低表達患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01）；而不同年齡、不同月經狀態、不同臨床分期、有無淋巴結轉移、不同PR表達情況及有無HER2蛋白擴增情況下TOP2Α表達陽性率比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）。（表1）

表1 349例乳腺癌患者中TOP2Α表達與臨床特征的關系

2.2 不同ER、PR、HER2、TOP2Α、Ki-67表達患者PCR比較

93例術前接受了4～6個周期新輔助化療的患者中，ER陰性、PR陰性、TOP2Α陽性、Ki-67高表達患者的PCR比例分別高于ER陽性、PR陽性、TOP2Α陰性、Ki-67低表達患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05）；而有無HER2蛋白擴增患者的PCR比例比較，差異無統計學意義（P﹥0.05）。（表2）

表2 93例新輔助化療乳腺癌手術患者不同免疫組化指標表達情況對PCR的影響

表2 93例新輔助化療乳腺癌手術患者不同免疫組化指標表達情況對PCR的影響

注：*通過免疫組化法檢測，93例患者中1例患者HER2蛋白表達水平為++，未進一步行FISH檢測，未明確有無HER2蛋白擴增，故未納入此項分析

指標ER陰性陽性PR陰性陽性HER2蛋白擴增例數PCR[n（%）]χ2值4.398 P值0.036 35 58 12（34.29）9（15.52）7.4760.006 38 55 14（36.84）7（12.73）0.1570.692無有75 17 1 16（21.33）5（29.41）－不確定*TOP2Α陰性陽性Ki-67低表達高表達4.8690.027 37 56 4（10.81）17（30.36）5.3240.021 33 60 3（9.09）18（30.00）

2.3 PCR多因素Logistic回歸分析

單因素分析顯示ER、PR、TOP2Α、Ki-67表達與PCR相關（P﹤0.05）。將上述4個因素納入多因素非條件Logistic回歸分析（enter法），結果顯示ER、PR、TOP2Α、Ki-67均不是新輔助化療+乳腺癌手術患者PCR的獨立預測因素（P﹥0.05）。（表3）

表3 93例新輔助化療乳腺癌手術患者PCR的多因素Logistic回歸分析

表3 93例新輔助化療乳腺癌手術患者PCR的多因素Logistic回歸分析

因素ER PR TOP2Α Ki-67常數β 0.544-1.912 1.194 1.270-2.315 SE 1.308 1.307 0.646 0.702 0.789 Wald 0.173 2.141 3.417 3.274 8.614 P值0.678 0.143 0.065 0.070 0.003 OR值1.722 0.148 3.301 3.560 0.099 95%CI 0.133～22.344 0.011～1.914 0.931～11.713 0.900～14.083

3 討論

TOP2Α是DNA拓撲結構在DNA主鏈上發生瞬間雙鏈斷裂的關鍵酶，在DNA復制、轉錄與染色體結構的形成、濃縮和分離中發揮著重要的作用[9]。有研究顯示，TOP2Α蛋白表達陽性提示腫瘤細胞處于增殖狀態，可反映細胞的增殖活性[10]。但其臨床價值存在爭議，目前已證實TOP2Α蛋白表達與Ki-67以及乳腺癌分子分型相關[11-12]。大部分研究也證實TOP2Α可以作為蒽環類藥物化療的靶點[12-14]，但其對新輔助化療效果的預測價值并不明確。本研究重點探討了TOP2Α與臨床特征的關系及其對新輔助化療效果的預測價值。

患者的年齡、月經狀態、臨床分期、有無淋巴結轉移、ER、PR、HER2、和Ki-67表達水平均可以影響乳腺癌患者的預后。本研究顯示，TOP2Α表達的陽性率與ER、Ki-67表達有關（P﹤0.01）；而與患者年齡、月經狀態、臨床分期、有無淋巴結轉移、PR表達及有無HER2蛋白擴增無關（P﹥0.05）。Yunxiang等[15]的報道與本研究結果相似，其結果顯示TOP2Α蛋白表達水平與乳腺癌患者的月經狀況、腫瘤大小、臨床分期、腋下淋巴結轉移狀況、組織學分級、病理類型等臨床特征均無關。TOP2Α作為細胞增殖的指標，其表達的陽性率與ER、Ki-67表達相關的結論沒有爭議。多項研究顯示，ER表達陰性、Ki-67指數高的乳腺癌患者，TOP2Α表達的陽性率更高[16-18]。

在乳腺癌的治療中，新輔助化療的價值已經得到臨床醫師的認可，而且在新輔助化療中獲得PCR的患者預后更好，尤其是三陰性和HER2擴增型乳腺癌[19]，因此如何在新輔助化療前預測患者的化療效果，是否有更大的概率獲得PCR，成為人們研究的熱點。目前有研究已經證實，ER、PR表達陰性和有HER2蛋白擴增的患者采用抗HER2治療，獲得PCR的概率更高[20]。也有研究顯示，TOP2Α作為腫瘤細胞增殖的指標，可以預測新輔助化療的效果[7]。本研究顯示，ER陰性、PR陰性、TOP2Α陽性、Ki-67高表達的患者在新輔助化療中有更高的概率獲得PCR，但在多因素分析中發現這些臨床常用的生物學指標均不是新輔助化療+乳腺癌手術患者PCR的獨立預測因素，不過在預測強度上TOP2Α和Ki-67優于其他因素，其P值已接近0.05。

綜上所述，本研究中TOP2Α表達與ER、Ki-67表達相關，且ER陰性、Ki-67高表達患者的TOP2A表達陽性率分別明顯高于ER陽性、Ki-67低表達患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01），均是乳腺癌的預測因素，這也間接證實了TOP2Α作為腫瘤細胞的增殖指標在乳腺癌中的價值。雖然在多因素分析中未證實TOP2Α是新輔助化療+乳腺癌手術患者PCR的獨立預測因素，但不能否認其預測價值，這也奠定了進一步研究乳腺癌中TOP2Α價值的重要意義。

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