TTF- 1、EGFR腫瘤浸潤性樹突狀細胞在肺腺癌中的表達情況及其臨床意義

姜明明，邸慶國，買智濤，萬善志，孫寶華

滄州市中心醫院呼吸內科，河北 滄州0610140

肺腺癌是最常見的惡性腫瘤之一，多好發于女性，在發病早期即可通過血液、淋巴結等方式擴散，腫瘤細胞的快速生長和轉移是導致患者預后不良的主要危險因素[1-2]。研究顯示，每年有182萬例新發肺癌患者，5年生存率僅為2%～30%[3]。腺癌是肺癌較為常見的一種類型，其惡性程度較高，主要原因是腫瘤細胞生長轉移較快，對化療藥物耐藥率高，因此5年生存率非常低。據報道，免疫抑制在腫瘤細胞的生長和轉移中具有重要作用[4-5]。樹突狀細胞是機體的一種抗原呈遞細胞，其功能最大，在腫瘤患者中，主要將腫瘤細胞表面分子標志物和代謝產物等呈遞給細胞毒性T細胞等，進而殺傷腫瘤細胞[6-7]，尤其是腫瘤組織中浸潤的樹突狀細胞，臨床意義更大，這種細胞被稱為腫瘤浸潤性樹突狀細胞（tumor infiltrating dendritic cell，TIDC）。另外，研究顯示表皮生長因子受體（epithelial growth fac-tor receptor，EGFR）、甲狀腺轉錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）與腫瘤細胞對化療藥物的耐受有關。因此本研究旨在探討TIDC、EGFR、TTF-1表達情況，進一步探討肺腺癌發生和發展過程中的分子機制，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集滄州市中心醫院2015年1月至2017年6月收治的肺腺癌患者的臨床資料。納入標準：①均病理確診為肺腺癌；②在滄州市中心醫院接受手術切除，可獲得腫瘤組織和癌旁組織；③年齡為18～75歲；④臨床病歷資料齊全。排除標準：①其他類型肺癌或其他腫瘤；②復發性肺癌；③術前曾接受放化療等特殊治療；④12個月內曾接受免疫調節劑治療；⑤系統性紅斑狼瘡等免疫系統疾病；⑥感染；⑦心肝腎等臟器功能不全。共納入肺腺癌患者100例，其中男性44例，女性56例；年齡43～75歲，平均（35.82±5.12）歲；平均體重指數（23.58±2.99）kg/m2；平均腫瘤直徑（4.38±1.08）cm；臨床TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期43例，Ⅲ期41例，Ⅳ期4例；腫瘤細胞分化程度：高分化41例，中分化34例，低分化25例。

1.2 觀察指標

主要觀察指標包括TIDC、EGFR和TTF-1的表達水平；次要觀察指標為臨床TNM分期、腫瘤細胞分化程度，分析TIDC、EGFR和TTF-1與肺腺癌患者TNM分期、分化程度的關系。

1.3 檢測方法

所有患者入院后行“肺腺癌切除術”，術中取腫瘤組織（腫瘤組織中心部位）和癌旁組織（距腫瘤邊緣30 mm以上的健康組織），行免疫組化法檢測腫瘤組織和癌旁組織中TIDC和TTF-1的表達情況，400倍鏡下對TIDC細胞計數，隨機抽取5個視野，取其均值作為該患者的TIDC數密度。取組織使用RPMI 1640培養基消化后形成細胞懸液，使用流式細胞儀檢測DC細胞的MHC-Ⅱ和CD54表型。同時根據染色陽性細胞百分比、染色強度兩個方面對TTF-1情況進行評分：染色強度為無色、淺黃色、黃色和棕黃色分別為0～3分，陽性細胞百分比為＜10%、10%～49%、50%～79%和≥80%分別為1～4分，兩者得分相乘為最終評分，最終評分≥4分為陽性。EGFR表達情況采用熒光定量PCR法檢測。相關試劑均購自廈門艾德公司。

1.4 統計學分析

采用SPSS 18.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗或配對t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腫瘤組織、癌旁組織中TIDC、TTF- 1和EGFR的表達情況

腫瘤組織中TIDC數密度、MHC-Ⅱ陽性DC、CD54陽性DC均明顯低于癌旁組織，TTF-1陽性率、EGFR突變率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

2.2 TIDC、TTF- 1和EGFR與腫瘤細胞分化程度的關系

腫瘤細胞為中低分化的患者TIDC數密度、MHC-Ⅱ陽性DC、CD54陽性DC均低于高分化患者，TTF-1陽性率、EGFR突變率均高于高分化患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

2.3 TIDC、TTF- 1和EGFR與腫瘤TNM分期的關系

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者TIDC數密度、MHC-Ⅱ陽性DC、CD54陽性DC均低于Ⅰ～Ⅱ期患者，TTF-1陽性率、EGFR突變率均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3）

表1 腫瘤組織和癌旁組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達水平的比較

表2 肺腺癌腫瘤組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達水平與腫瘤細胞分化程度的關系

表3 肺腺癌腫瘤組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達水平與臨床TNM分期的關系

3 討論

肺腺癌是肺癌常見的一種組織類型，其惡性較高，多起源于黏膜上皮，多見于不吸煙者和女性，雖發病率較鱗癌低，但其惡性程度高于鱗癌，早期即可通過血液轉移。導致肺腺癌惡性程度高的原因尚不清楚，目前研究顯示可能與TIDC[8]、EGFR[9]和TTF-1[10]的表達有關。但相關研究缺乏，為進一步證實，本研究進行了相關探討，結果顯示肺腺癌組織中TIDC、MHC-Ⅱ陽性DC和CD54陽性DC明顯降低，而TTF-1陽性率、EGFR突變率則明顯增高（P＜0.01），且這種現象與腫瘤細胞分化程度、臨床TNM分期有關。

DC細胞在特定環境下可以表現為免疫抑制作用，稱為不成熟DC細胞，其MHC-Ⅱ和CD54陽性率低[11-13]。結合本研究表明TIDC在腫瘤組織中表達水平較低，且多為不成熟的調節性DC細胞。作為機體中功能最強大的抗原呈遞細胞，腫瘤細胞中DC水平下降不利于腫瘤特異性細胞毒性T細胞的增殖和活化，因此機體對腫瘤細胞的殺傷作用可明顯降低[14-15]。且MHC-Ⅱ和CD54陽性率低下的DC細胞（即不成熟DC細胞）能夠通過分泌抑炎因子促進Th1/Th2免疫向Th2免疫漂移，從而增加腫瘤細胞對機體免疫系統的耐受力[16-17]。因此肺腺癌患者組織中TIDC低表達，且不成熟比例增高可以通過介導腫瘤細胞對機體的免疫耐受而導致肺腺癌患者惡性程度增強。Wojas-Krawczyk等[18]的一項個案報道顯示，使用DC細胞治療肺腺癌，具有較好療效。近些年在肺腺癌患者中關于TIDC的研究極為缺乏，但是在其他癌癥中的研究證實了TIDC在腫瘤組織中低表達，不成熟比例增高，可導致患者臨床預后惡化[19-20]。

TTF-1相對分子質量為40 kD，是一種核蛋白，其水平在癌癥患者中的高表達與EGFR突變有關，TTF-1表達水平、EGFR突變目前被證實與肺腺癌組織學亞型有關，還可能與腫瘤細胞對化療藥物的耐受有關。姚娟等[21]證實了隨著肺腺癌組織中TTF-1表達的增高，EGFR突變率提高，因此建議對于肺腺癌患者應常規檢測TTF-1和EGFR以指導治療。萬善志等[22]研究則表明TTF-1在組織中高表達和EGFR突變率增高是肺腺癌遠處轉移的危險因素。目前研究已證實靶向突變的表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑治療EGFR突變的肺癌患者具有明顯療效[23]。上述研究支持本研究，均表明TTF-1在組織中高表達和EGFR突變率增高是肺癌患者預后不良的危險因素。

綜上所述，TIDC在腫瘤組織中低表達，且多為不成熟的調節性DC細胞，TTF-1在肺腺癌中高表達，EGFR突變率增高。EGFR、TTF-1、TIDC均與臨床分期和腫瘤細胞分化程度有關。

[1]Zhang Y,Breitling LP,Balavarca Y,et al.Comparison and combination of blood DNA methylation at smoking-associated genes and at lung cancer-related genes in prediction of lung cancer mortality[J].Int J Cancer,2016,139(11):2482-2492.

[2]Oelsner EC,Carr JJ,Enright PL,et al.Per cent emphysema is associated with respiratory and lung cancer mortality in the general population:a cohort study[J].Thorax,2016,71(7):624-632.

[3]Cheng TY,Cramb SM,Baade PD,et al.The international epidemiology of lung cancer:latest trends,disparities,and tumor characteristics[J].J Thorac Oncol,2016,11(10):1653-1671.

[4]Chen YM.Immune checkpoint inhibitors for nonsmall cell lungcancertreatment[J].JChinMedAssoc,2017,80(1):7-14.

[5]Schneider T,Hoffmann H,Dienemann H,et al.Immune response after radiofrequency ablation and surgical resection in non small cell lung cancer[J].Semin Thorac Cardiovasc Surg,2016,28(2):585-592.

[6]Shurin GV,Ma Y,Shurin MR.Immunosuppressive mechanisms of regulatory dendritic cells in cancer[J].Cancer Microenviron,2013,6(2):159-167.

[7]Huang XM,Liu XS,Lin XK,et al.Role of plasmacytoid dendritic cells and inducible costimulator-positive regulatory T cells in the immunosuppression microenvironment of gastric cancer[J].Cancer Sci,2014,105(2):150-158.

[8]龔選舉,閻玉虎,吳建平.肺癌組織中腫瘤浸潤樹突狀細胞對預后的影響[J].中華腫瘤雜志,2000,22(2):135-137.

[9]趙妍.晚期肺腺癌EGFR基因不同突變類型的EGFR-TKI療效與AEG-1蛋白表達關系的研究[D].石家莊:河北醫科大學,2016.

[10]王寧.NapsinA、TTF-1、alpha-B-crystallin在原發性肺腺癌中的表達研究[D].杭州:浙江大學,2015.

[11]Smith LE,Olszewski MA,Georgoudaki AM,et al.Sensitivity of dendritic cells to NK-mediated lysis depends on the inflammatory environment and is modulated by CD54/CD226-driven interactions[J].J Leukoc Biol,2016,100(4):781-789.

[12]Yan J,Liu B,Shi Y,et al.Class II MHC-independent suppressive adhesion of dendritic cells by regulatory T cells in vivo[J].J Exp Med,2017,214(2):319-326.

[13]Spallanzani RG,Torres NI,Avila DE,et al.Regulatory dendritic cells restrain NK cell IFN-γ production through mechanisms involving NKp46,IL-10,and MHC class I-specific inhibitory receptors[J].J Immunol,2015,195(5):2141-2148.

[14]Chen J,Guo XZ,Li HY,et al.Dendritic cells engineered to secrete anti-DcR3 antibody augment cytotoxic T lymphocyte response against pancreatic cancer in vitro[J].World J Gastroenterol,2017,23(5):817-829.

[15]Zhou J,Ma P,Li J,et al.Comparative analysis of cytotoxic T lymphocyte response induced by dendritic cells pulsed with recombinant adeno-associated virus carrying α-fetoprotein gene or cancer cell lysate[J].Mol Med Rep,2015,11(4):3174-3180.

[16]Lin CL,Hsiao G,Wang CC,et al.Imperatorin exerts antiallergic effects in Th2-mediated allergic asthma via induction of IL-10-producing regulatory T cells by modulating the function of dendritic cells[J].Pharmacol Res,2016,110:111-121.

[17]Gueguen C,Bouley J,Moussu H,et al.Changes in markers associated with dendritic cells driving the differentiation of either TH2 cells or regulatory T cells correlate with clinical benefit during allergen immunotherapy[J].J Allergy Clin Immunol,2016,137(2):545-558.

[18]Wojas-Krawczyk K,Krawczyk P,Buczkowski J,et al.Immunotherapy of lung adenocarcinoma patient with peptidepulsed dendritic cells:a case report[J].Arch Immunol Ther Exp(Warsz),2012,60(1):69-77.

[19]王敏學,劉守躍,金永民,等.CD1a與CD83標記腫瘤浸潤性樹突狀細胞在乳腺癌中的表達及相關性研究[J].臨床腫瘤學雜志,2016,21(9):775-779.

[20]王敏學,劉守躍,金永民,等.CD1a與CD83標記腫瘤浸潤性樹突狀細胞在乳腺癌中的表達及相關性研究[J].臨床腫瘤學雜志,2016,21(9):775-779.

[21]姚娟,王建軍,王海燕,等.肺腺癌組織TTF-1和EGFR表達及與EGFR第19、21號外顯子突變的關系?[J].臨床腫瘤學雜志,2015,22(4):338-342.

[22]萬善志,韓一平,黃玲,等.肺腺癌患者EGFR突變與TTF-1的關系及意義研究[J].臨床肺科雜志,2015,22(2):224-227.

[23]Lindeman NI,Cagle PT,Beasley MB,et al.Molecular testing guideline for selection of lung cancer patients for EGFR and ALK tyrosine kinase inhibitors:guideline from the College of American Pathologists,International Association for the Study of Lung Cancer,and Association for Molecular Pathology[J].J Mol Diagn,2013,15(4):415-453.