銀杏葉及其提取物中銀杏黃酮的HPLC測(cè)定方法研究

王亞，楊清山，2，*，徐猛，胡燕金，桑少陽(yáng)

（1.晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司，河北邯鄲057250；2.河北省植物天然色素產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，河北邯鄲057250）

銀杏（Ginkgo biloba L.）為銀杏科屬植物，化學(xué)成分為黃酮醇苷、雙黃酮、原花青素、銀杏內(nèi)酯、聚戊烯醇、有機(jī)酸等[1-2]。其中黃酮醇苷類化合物具有降低血清膽固醇、抑制血栓形成、改善血液循環(huán)、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、改善心腦等功效[3-5]，具有很高的藥用價(jià)值。因此，對(duì)銀杏葉的藥用、保健、化妝品等綜合價(jià)值的研究日益受到國(guó)內(nèi)外的重視。

目前，銀杏葉及其提取物（Ginkgobilobaextract，EGB）中總黃酮含量的測(cè)定方法主要包括分光光度法、比色法、衍生法-氣相色譜法、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）等[6-8]。采用分光光度法測(cè)定時(shí)由于樣品未經(jīng)分離純化，樣品中總黃酮含量的測(cè)定會(huì)受到樣品中原花青素等酚類物質(zhì)的干擾，造成檢測(cè)不準(zhǔn)確；比色法僅能粗略測(cè)定總黃酮含量，且由于受到原花青苷元類化合物的影響，導(dǎo)致該法的重現(xiàn)性較差；衍生法-氣相色譜法由于裝置較貴，操作繁瑣，應(yīng)用不普遍；高效液相色譜法（HPLC）[9-12]由于其操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)成為國(guó)內(nèi)外使用最為廣泛的方法。

本研究以中國(guó)藥典（CP）和美國(guó)藥典（USP）中銀杏葉提取物和銀杏葉總黃酮含量的HPLC測(cè)定方法為基礎(chǔ)，通過(guò)對(duì)檢測(cè)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，建立一種能同時(shí)使用中國(guó)藥典和美國(guó)藥典方法檢測(cè)樣品中各成分及總黃酮含量的方法，并對(duì)兩種方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

槲皮素、山奈酚、異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司，純度分別為96%、98.6%和95.7%；銀杏葉粉末3批（用FW100型萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目篩備用）分別為原料1、原料2、原料3；銀杏葉提取物3批，分別為提取物1、提取物2、提取物3。甲醇、磷酸，色譜純；其余試劑均為分析純。

Waters E2695型高效液相色譜儀（配備Waters2489紫外檢測(cè)器）：美國(guó)沃特世公司；DK-98-IIA型電熱恒溫水浴鍋（配備冷凝回流系統(tǒng)）、FW100型萬(wàn)能粉碎機(jī)：天津市泰斯特儀器有限公司；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵、RW12型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海申生科技有限公司；TH-600型超聲清洗機(jī)：濟(jì)寧天華超聲電子儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 美國(guó)藥典方法

1.2.1.1 色譜條件

流動(dòng)相為甲醇：0.5%磷酸水=1∶1，波長(zhǎng)為370 nm，流速為1.5mL/min，進(jìn)樣量為20μL。

1.2.1.2 樣品前處理

銀杏葉提取物：稱取0.30 g（精確至0.000 1 g）樣品，放入帶有冷凝管的250mL長(zhǎng)頸燒瓶中。加入78mL的酸解液 A（乙醇 ∶鹽酸 ∶水=25∶4∶10，體積比），在熱水浴（85℃）中回流135min。冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容，混勻。

銀杏葉粉末：稱取1.00 g樣品，放入帶有冷凝管的250mL燒瓶中。加入78mL的酸解液A，在熱水中回流135min。冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中。添加20mL甲醇至250mL燒瓶中，超聲30min。過(guò)濾，用100mL容量瓶收集濾液，用甲醇洗去濾紙上殘留物，用同一100mL容量瓶收集濾液，定容，混勻。

1.2.1.3 總黃酮醇苷含量的計(jì)算

黃酮醇苷元的含量按公式（1）計(jì)算：

式中：fi分別對(duì)應(yīng)于槲皮素、山奈素和異鼠李素3種黃酮醇苷元的含量（i=1、2、3），%；rv為樣品溶液中相關(guān)化合物的峰面積；rs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中相關(guān)化合物的峰面積；Cs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中相關(guān)化合物的濃度，mg/mL；W為樣品溶液中銀杏葉提取物樣品的稱樣質(zhì)量，g。

總黃酮醇苷的含量按公式（2）計(jì)算：

式中：X為總黃酮醇苷的含量，%；f1為槲皮素黃酮醇苷元含量，%；f2為山奈素黃酮醇苷元含量，%；f3為異鼠李素黃酮醇苷元含量，%；2.504、2.437、2.588為分別為槲皮素、山奈素、異鼠李素對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)化系數(shù)。

1.2.2 中國(guó)藥典方法

1.2.2.1 色譜條件

流動(dòng)相為甲醇：0.4%磷酸水=1∶1，波長(zhǎng)為360 nm，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL。

1.2.2.2 樣品前處理

銀杏葉提取物：稱樣0.03 g，使用25mL酸解液B（甲醇-25%鹽酸=4∶1）水回流30min，最后轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。

銀杏葉粉末：稱樣1.00 g，先用三氯甲烷索氏抽提2 h，揮干后再用甲醇回流4 h，蒸干后加入25mL酸解液B在熱水浴（80℃）中回流30min，最后轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。

1.2.2.3 總黃酮醇苷的計(jì)算

該方法以槲皮素作為對(duì)照品，分別按照相對(duì)應(yīng)的校正因子計(jì)算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，黃酮醇苷元的含量按公式（3）計(jì)算：

式中：mi分別對(duì)應(yīng)于槲皮素、山奈素和異鼠李素3種黃酮醇苷元的含量（i=1、2、3），%；rv為樣品溶液中相關(guān)化合物的峰面積；rs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素的峰面積；Cs為標(biāo)準(zhǔn)溶液中槲皮素的濃度，mg/mL；W為樣品溶液中銀杏葉提取物樣品的稱樣質(zhì)量，g；φi為對(duì)應(yīng)于槲皮素、山奈素和異鼠李素的校正因子（i=1、2、3），分別為 1.000 0、1.002 0 和 1.089 0。

總黃酮醇苷的含量按公式（4）計(jì)算：

式中：Y為總黃酮醇苷的含量，%；m1為槲皮素黃酮醇苷元含量，%；m2為山奈素黃酮醇苷元含量，%；m3為異鼠李素黃酮醇苷元含量，%；2.51為各個(gè)化合物的平均轉(zhuǎn)化系數(shù)。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

分別稱取槲皮素、山奈素、異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)品10、10、2mg（精確到 0.000 1）于同一 25mL 容量瓶中，用色譜甲醇定容，充分搖勻保證其完全溶解后，作為儲(chǔ)備液，4℃冰箱保存，有效期1年。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果均采用兩次平行試驗(yàn)的“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”表示，采用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行分析，P＜0.05表示具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 液相檢測(cè)條件的選擇

考慮到美國(guó)藥典和中國(guó)藥典方法條件的差異性，優(yōu)化后的液相檢測(cè)色譜條件可合并為一個(gè)，設(shè)置雙波長(zhǎng)檢測(cè)（美國(guó)藥典370 nm，中國(guó)藥典360 nm），滿足同時(shí)進(jìn)行兩種檢測(cè)方法的需求。

2.1.1 流速的選擇

流速為1.5 L/min時(shí)，系統(tǒng)壓力較大，不利于色譜柱的維護(hù)，故調(diào)整流速為1.0mL/min。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

由于兩種方法的流動(dòng)相中磷酸水的濃度有微小的差異，理論上流動(dòng)相的極性發(fā)生細(xì)微的變化僅會(huì)影響目標(biāo)物質(zhì)的出峰時(shí)間，而對(duì)其含量的測(cè)定影響不大，因此將流動(dòng)相條件選為甲醇：0.4%磷酸水=1∶1。流動(dòng)相為甲醇：0.4%磷酸水=1∶1時(shí)，樣品液中各成分出峰時(shí)間均在5min以內(nèi)，出峰時(shí)間較早，不能滿足試驗(yàn)要求，把流動(dòng)相調(diào)整為甲醇：0.4%磷酸水=2∶3，能夠滿足試驗(yàn)要求。

2.1.3 色譜柱的選擇

采用甲醇：0.4%磷酸水=2∶3為流動(dòng)相，等度洗脫，考察了1#色譜柱：型號(hào)為MG IIC18，規(guī)格為4.6mm×150 mm，5 μm；2#色譜柱：型號(hào)為 LP-C18，規(guī)格為4.6 mm×250mm，5μm；3#色譜柱：型號(hào)為 Eclipse Plus C18，規(guī)格為 4.6mm×100mm，3.5μm；4#色譜柱：型號(hào)為ZORBAXSB-C18，規(guī)格為 4.6mm×150mm，5μm。綜合樣品液中各目標(biāo)成分的出峰時(shí)間、峰形、分離度等情況，發(fā)現(xiàn)3#色譜柱檢測(cè)3種成分的峰形和分離度均較好，并且可將檢測(cè)時(shí)間控制在20min以內(nèi)，保證了檢測(cè)效率。

2.1.4 進(jìn)樣量的選擇

考察進(jìn)樣量分別在10μL和20μL條件下（如圖1所示）儀器檢測(cè)的精密度時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)進(jìn)樣量為20μL時(shí)，由于進(jìn)樣量過(guò)大，會(huì)在色譜柱中產(chǎn)生溶劑效應(yīng)，導(dǎo)致各成分的分離度和峰形較差，因此進(jìn)樣量應(yīng)選為10μL。

圖1 樣品液分別在10μL和20μL下的疊加HPLC色譜圖Fig.1 The HPLC chromatogram sof samplesolution at10μL and 20μL

2.1.5 柱溫的選擇

在確定流動(dòng)相、色譜柱及進(jìn)樣量的情況下，分別考察了25、35、40℃柱溫，發(fā)現(xiàn)柱溫為40℃時(shí)3種成分的峰形和分離度均較好。

2.2 檢測(cè)方法的方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將儲(chǔ)備液使用色譜甲醇進(jìn)行等倍稀釋，稀釋成6個(gè)濃度水平，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定各成分的線性范圍（如表1所示）。

表1 3種成分在不同測(cè)定方法下的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍情況Table1 Thestandard curvesand the linear rangesof threecom ponentsin differentdeterm inationmethods

由表1中數(shù)據(jù)可知，中國(guó)藥典和美國(guó)藥典測(cè)定方法所得銀杏黃銅中各成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線均滿足R2＞0.999 9，因此3種成分在各自范圍內(nèi)均線性良好。兩種測(cè)定方法下各成分的線性范圍均為：槲皮素6.11μg/mL～391.23μg/mL，山奈素 6.15μg/mL～393.61μg/mL，異鼠李素1.18μg/mL～75.70μg/mL。按S/N=3確定各成分的檢出限，分別為：槲皮素0.07μg/mL，山奈素0.06μg/mL，異鼠李素0.06μg/mL。

2.2.2 測(cè)定方法的回收率試驗(yàn)

吸取己知含量的槲皮素、山奈素和異鼠李素混標(biāo)儲(chǔ)備液分析方法的回收率試驗(yàn)，結(jié)果表明兩種測(cè)定方法對(duì)3種成分的平均回收率分別是100.34%、96.17%和98.39%，說(shuō)明該方法的回收率較好。

2.2.3 中國(guó)藥典方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.3.1 精密度驗(yàn)證

分別選取1批銀杏葉提取物和1批銀杏葉粉末，采用中國(guó)藥典前處理方法，每天做3個(gè)平行樣，連續(xù)檢測(cè)3 d，以考察樣品中各成分及總黃酮的日間精密度情況，如表2和表3所示。

表2 銀杏葉提取物中國(guó)藥典方法檢測(cè)精密度試驗(yàn)Table2 Thep recision testof EGB by CPm ethod

由表2和表3中數(shù)據(jù)可知，銀杏葉提取物中槲皮素、山奈素、異鼠李素及總黃酮含量的RSD分別是0.75%、1.40%、5.27%和1.04%。銀杏葉粉末槲皮素、山奈素、異鼠李素及總黃酮含量的RSD分別是1.83%、2.22%、3.97%、2.20%，說(shuō)明銀杏葉提取物和銀杏葉原料中各成分及總黃酮含量的中國(guó)藥典方法的日間穩(wěn)定性較好，儀器檢測(cè)的日間精密度較高。

表3 銀杏葉粉末中國(guó)藥典方法檢測(cè)精密度試驗(yàn)Table3 The precision testof ginkgo leavesby CPm ethod

2.2.3.2 不同酸解時(shí)間的驗(yàn)證

分別選取1批銀杏葉提取物和1批銀杏葉粉末，使用中國(guó)藥典方法（溫度 80 ℃）進(jìn)行 10、20、30、60、90min酸解時(shí)間驗(yàn)證，如表4所示。

表4 樣品中總黃酮含量隨中國(guó)藥典方法中酸解時(shí)間的變化情況Table4 The contentof total flavonoids in sam plesvaried with the hydrolysis tim eof CP

由表4中數(shù)據(jù)可知，銀杏葉提取物和銀杏葉粉末中總黃酮含量會(huì)隨著酸解時(shí)間的延長(zhǎng)呈先增大后穩(wěn)定的趨勢(shì)。酸解時(shí)間10min～30min時(shí)，銀杏葉提取物和銀杏葉粉末中總黃酮含量顯著增大（P＜0.05），分別從27.08%增大至27.55%和從0.93%增大至1.08%。樣品量一定時(shí)，隨著酸解時(shí)間的延長(zhǎng)，樣品的酸解程度會(huì)越來(lái)越大，所測(cè)得總黃酮的量增加。酸解時(shí)間30min～90min時(shí)，樣品中總黃酮的量無(wú)顯著性變化（P＞0.05）。該結(jié)論與杜安全等[13]報(bào)道的銀杏葉提取物中總黃酮的含量隨水解時(shí)間的變化規(guī)律一致。綜上，最佳的酸解時(shí)間為30min，即中國(guó)藥典方法的酸解時(shí)間30min參數(shù)設(shè)置是準(zhǔn)確的。

2.2.4 美國(guó)藥典方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.4.1 精密度驗(yàn)證

分別選取1批銀杏葉提取物和1批銀杏葉粉末，采用美國(guó)藥典前處理方法，每天做3個(gè)平行樣，連續(xù)檢測(cè)3 d，以考察樣品中各成分及總黃酮的日間精密度情況，如表5和表6所示。

表5 銀杏葉提取物美國(guó)藥典方法檢測(cè)精密度試驗(yàn)Table5 The precision testof EGB by USPmethod

表6 銀杏葉粉末美國(guó)藥典方法檢測(cè)精密度試驗(yàn)Table6 The precision testof ginkgo leavesby USPm ethod

續(xù)表6 銀杏葉粉末美國(guó)藥典方法檢測(cè)精密度試驗(yàn)Continue table6 Thep recision testof ginkgo leavesby USP m ethod

由表5和表6中數(shù)據(jù)可知，銀杏葉提取物中槲皮素、山奈素、異鼠李素及總黃酮含量的RSD分別是0.90%、1.04%、1.16%和0.93%，銀杏葉粉末中槲皮素、山奈素、異鼠李素及總黃酮含量的RSD分別是2.02%、1.43%、1.68%和1.71%，說(shuō)明銀杏葉提取物和銀杏葉原料中各成分及總黃酮含量的美國(guó)藥典方法的日間穩(wěn)定性較好，儀器檢測(cè)的日間精密度較高。

2.2.4.2 不同酸解時(shí)間的驗(yàn)證

分別選取1批銀杏葉提取物和1批銀杏葉粉末，使用美國(guó)藥典方法（溫度 85℃）進(jìn)行 30、60、90、120、135、150min酸解時(shí)間驗(yàn)證，如表7所示。

表7 樣品中總黃酮含量隨美國(guó)藥典方法中酸解時(shí)間的變化情況Table7 The contentof total flavonoids in samp lesvaried w ith the hydrolysis timeof USP

由表7中數(shù)據(jù)可知，銀杏葉提取物和銀杏葉粉末中總黃酮含量會(huì)隨著酸解時(shí)間的延長(zhǎng)呈先增大后穩(wěn)定的趨勢(shì)。銀杏葉提取物的酸解時(shí)間為30min～60min時(shí)，銀杏葉粉末的酸解時(shí)間為30min～90min時(shí)，銀杏葉提取物和銀杏葉粉末中總黃酮含量顯著增大（P＜0.05），分別從23.67%增大至24.36%和從0.87%增大至1.05%。與中國(guó)藥典方法所得規(guī)律一致，即樣品量一定時(shí)，隨著酸解時(shí)間的延長(zhǎng)，樣品的酸解程度會(huì)越來(lái)越大，所測(cè)得總黃酮的量增加。銀杏葉提取物的酸解時(shí)間為60min～150min時(shí)，銀杏葉粉末的酸解時(shí)間為90min～150min時(shí)，樣品中總黃酮的量無(wú)顯著性變化（P＞0.05）。綜上，美國(guó)藥典的酸解時(shí)間135min參數(shù)設(shè)置是準(zhǔn)確的，但從檢測(cè)效率考慮，最佳酸解時(shí)間為90min。

2.3 不同檢測(cè)方法的對(duì)比

分別使用美國(guó)藥典和中國(guó)藥典檢測(cè)方法對(duì)3批銀杏葉提取物和3批銀杏葉粉末進(jìn)行檢測(cè)，以考察兩種檢測(cè)方法的差異情況，如表8和表9所示。

表8 不同檢測(cè)方法下3批銀杏葉提取物中各成分及總黃酮含量Table8 The contentsof each componentand total flavonoids in EGB under different detectionmethods

表9 不同檢測(cè)方法下3批銀杏葉粉末中各成分及總黃酮含量Table9 The contentsof each componentand total flavonoids in ginkgo leavesunder different detectionmethods

由表8和表9中數(shù)據(jù)可知，同一銀杏葉提取物采用不同檢測(cè)方法時(shí)，樣品中各成分及其總黃酮含量間均存在顯著性差異（P＜0.05），且中國(guó)藥典的檢測(cè)值＞美國(guó)藥典的檢測(cè)值。例如，提取物1使用中國(guó)藥典和美國(guó)藥典方法檢測(cè)時(shí)，其各成分及總黃酮的含量分別為13.77%、1.85%、1.51%、27.30%和 12.03%、10.32%、1.45%、23.80%。同一原料采用不同檢測(cè)方法時(shí)，樣品中各成分及其總黃酮含量間均存在顯著性差異（P＜0.05），且美國(guó)藥典的檢測(cè)值＞中國(guó)藥典的檢測(cè)值。例如，原料1使用中國(guó)藥典和美國(guó)藥典方法檢測(cè)時(shí)，其各成分及總黃酮的含量分別為0.48%、0.40%、0.11%、0.99%和0.50%、0.41%、0.13%、1.04%。造成銀杏提取物和原料中各成分及總黃酮含量使用不同方法檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)差異性的原因可能是由于樣品本身的性質(zhì)和樣品酸解的條件（包括酸解劑、酸解時(shí)間、酸解溫度等）。

3 結(jié)論

本研究通過(guò)對(duì)HPLC檢測(cè)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了同時(shí)使用中國(guó)藥典和美國(guó)藥典方法測(cè)定銀杏葉及其提取物中各成分、總黃酮含量的方法，可較為全面的評(píng)價(jià)不同測(cè)定方法下樣品中黃酮類各成分的信息，能有效的減少工作量、指導(dǎo)生產(chǎn)。試驗(yàn)結(jié)果表明優(yōu)化后色譜條件為雙波長(zhǎng)檢測(cè)：370 nm和360 nm；流速：1.0mL/min；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸水=2 ∶3；色譜柱：Eclipse Plus C18（4.6mm×100mm，3.5μm）；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：40℃。對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，考察了測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和回收率，結(jié)果顯示銀杏黃酮中各成分在各自線性范圍內(nèi)均線性良好，各成分的檢出限分別為槲皮素0.07μg/mL、山奈素0.06μg/mL、異鼠李素0.06μg/mL，平均回收率分別為槲皮素100.34%、山奈素96.17%、異鼠李素98.39%；研究了測(cè)定方法的精密度，可將銀杏葉提取物和銀杏葉原料中總黃酮含量的RSD分別控制在1.0%和2.2%水平以內(nèi)；驗(yàn)證了測(cè)定方法酸解時(shí)間設(shè)定的準(zhǔn)確性，并得出了最佳的酸解時(shí)間為中國(guó)藥典30 min，美國(guó)藥典90min。對(duì)兩種測(cè)定方法進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物中總黃酮含量的檢測(cè)值：中國(guó)藥典＞美國(guó)藥典；銀杏葉粉末中總黃酮含量的檢測(cè)值：美國(guó)藥典＞中國(guó)藥典。

參考文獻(xiàn)：

[1]Beek T A,Montoro P.Chemical analysis and quality control of Ginkgobiloba leaves,extracts,and phytopharmaceuticals[J].Journal ofChromatography A,2009,1216(11):2002-2032

[2]Maitra I,Marcocci L,Droy-Lefaix M T,etal.Peroxyl radical scavenging activity of Ginkgo biloba extract EGb 761[J].Biochemical Pharmacology,1995,49(11):1649

[3]陳維洲,張培智.銀杏葉提取物的藥理和臨床研究進(jìn)展(下)[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,1999,18(5):315-317

[4]Singh B,Kaur P,Gopichand,etal.Biology and chemistry of Ginkgo biloba[J].Fitoterapia,2008,79(6):401-418

[5]汪素娟,康安,狄留慶,等.銀杏葉提取物主要活性成分藥動(dòng)學(xué)研究進(jìn)展[J].中草藥,2013,44(5):626-631

[6]熊冬梅,鄧澤元,劉蓉,等.高效液相色譜法測(cè)定銀杏保健品中總黃酮[J].食品科學(xué),2009,30(22):256-259

[7]Mesbah M K,Khalifa SI,El-Gindy A,etal.HPLC determination of certain flavonoidsand terpene lactones in selected Ginkgo biloba L.phytopharmaceuticals[J]ILFarmaco,2005,60(6/7):583-590

[8]田紫平,喻微,何貴州,等.HPLC測(cè)定銀杏葉中總銀杏酸的含量[J].微量元素與健康研究,2015,32(2):36-37

[9]LiW,Fitzloff JF.HPLC determination of flavonoids and terpene lactones in commercial ginkgo biloba products[J].Journalof Liquid Chromatography&Related Technologies,2002,25(16):2501-2514[10]王靖,鄒雨佳,唐華澄,等.高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定銀杏黃酮含量[J].食品工業(yè)科技,2006(3):184-185

[11]秦燕,何新英,莊慧娣,等.HPLC測(cè)定銀杏提取物中主要黃酮和萜內(nèi)酯含量的優(yōu)化方法[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2003,23(3):234-236

[12]祝連彩,王伯初,劉火安,等.高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉提取物中黃酮含量[J].重慶大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,29(1):117-119

[13]杜安全,王先榮,周正華,等.銀杏葉總黃酮苷的HPLC法分析水解條件[J].安徽醫(yī)藥,2001,5(3):164-165