《病原生物學》實驗教學探索

鄒秀月

[摘 要] 通過病原生物學系列實驗，樹立護士生有菌、無菌觀念，培養無菌操作技術。實現課程內容與職業標準對接，以職業需求為導向、以實踐能力培養為重點，培養技術技能型護士。

[關 鍵 詞] 無菌觀念；有菌觀念；無菌技術

[中圖分類號] G712 [文獻標志碼] A [文章編號] 2096-0603（2018）05-0123-01

一、樹立有菌觀念

微生物是肉眼看不見，經顯微鏡或電子顯微鏡放大后才可見的微小生物。病原生物中最常見的微生物是細菌，雖然單個細菌肉眼看不見，但群體的細菌是肉眼可見的，如菌落。根據這個特點，開設系列實驗，樹立學生的有菌意識。

（一）空氣中細菌的檢查

將已滅菌好的瓊脂平板開蓋，讓無菌的瓊脂培養基暴露于空氣中10分鐘，然后放入培養箱培養。次日，觀察實驗結果。

次日，學生肉眼觀察到培養基表面有菌落生長，這些菌落就是空氣中的細菌掉落進去繁殖出來的，一個細菌繁殖成為一個菌落，記錄細菌菌落數，菌落數的多少說明空氣的清潔度。該實驗證明空氣中確實有細菌存在。

（二）皮膚上細菌的檢查

用一根手指在已滅菌好的瓊脂平板的培養基表面輕輕劃線，然后放入培養箱培養。次日，觀察實驗結果。

次日，學生肉眼觀察到培養基表面有菌落生長，這些菌落就是手指上的細菌繁殖出來的，一個細菌繁殖成為一個菌落，記錄細菌菌落數，菌落數的多少說明手指皮膚的清潔度。該實驗證明手指上確實有細菌存在。

（三）咽喉部細菌的檢查

用咳碟法進行試驗。取一皿血瓊脂平板，打開皿蓋，距離培養基5～10 cm處對著無菌的培養基咳嗽3～5次，蓋好皿蓋后放入培養箱培養。次日觀察實驗結果。

次日，學生肉眼觀察到培養基表面有菌落生長，這些菌落就是咳嗽時噴出的咽喉部細菌繁殖出來的，一個細菌繁殖成為一個菌落。該實驗證明咽喉部確實有細菌存在。

取以上這些實驗培養出來的細菌經革蘭染色后，在顯微鏡油鏡下觀察。學生觀察到革蘭染色陽性和陰性的各種形態的細菌。

通過這樣一系列實驗，學生從肉眼看不到細菌個體到肉眼看到細菌群體，有菌觀念從感性認識上升到理性認識，認識得到升華。人們看不見細菌不等于它不存在，環境中和人體上都有大量細菌存在的，護士生必須牢固樹立有菌觀念。

二、樹立無菌觀念

滅菌是指殺滅所有微生物包括細菌的芽孢。無菌是無任何活的微生物，滅菌后的物體就是無菌的，無菌需要滅菌來實現。

（一）瓊脂培養基的制備

人工培養細菌需要制備培養基。培養目的菌必須培養在無菌的培養基上，因此要想培養細菌得從制備無菌的培養基開始。

（二）培養細菌

1.滅菌實驗

按需要量稱量各種物質配制好培養基，然后進行高壓蒸汽法滅菌，以無菌操作分裝好培養基做好備用。取兩皿培養基，甲皿中轉種上細菌，乙皿不種，放入培養箱培養。次日觀察甲、乙兩皿培養基上細菌生長情況。

次日，觀察到甲皿中出現細菌菌落，乙皿無細菌菌落，說明高壓蒸汽法確實殺滅了培養基中的所有細菌。

2.滅菌對照實驗

配制普通瓊脂培養基，甲份進行高壓蒸汽法滅菌，乙份不滅菌。將兩份培養基放入培養箱培養。次日，觀察細菌生長情況。

物品要實現有菌變無菌需要滅菌，滅菌后的物品才是無菌的物品。滅菌的方法有多種，病原生物實驗室常用高壓蒸汽滅菌法、燒灼法、煮沸法對實驗用品進行滅菌。臨床用的注射器、輸液器等都是滅菌后獨立包裝的無菌包。當包裝破損時，由于環境中微生物的污染，它們將變成有菌的。因此，使用前必須檢查包裝是否完好。

通過以上的實驗，提高學生對有菌和無菌的認識，樹立起有菌和無菌觀念。在將來的工作中，能區分有菌物品及有菌區域和無菌物品及無菌區域，避免交叉污染和感染的發生。

三、學會無菌操作

無菌操作是指防止微生物進入人體或其他物品的操作技術。在進行醫療技術操作和微生物實驗時均需要嚴格執行無菌操作，防止微生物感染和污染的發生。

微生物實驗中細菌轉種實驗需要多次進行無菌操作，特別能訓練學生的無菌操作能力，形成無菌操作技術。細菌轉種實驗是學生樹立“有菌和無菌觀念”，練習“無菌操作”最好的實驗。“有菌、無菌、無菌操作”反復出現，多次練習，有利于“有菌、無菌”觀念的樹立，同時培養“無菌操作能力。下面以普通瓊脂培養基上轉種葡萄球菌為例來說明，具體的實驗操作過程見下表。

葡萄球菌轉種實驗結束后，將待種培養皿放入培養箱培養，次日觀察實驗結果，可能出現兩種情況：一種是待種培養皿中有菌落生長，說明轉種成功；另一種是待種培養皿中無菌落生長，說明無細菌生長繁殖。分析原因，一種是接種環燒灼后未待其完全冷卻就去取菌種，將菌種燙死；另一種是取菌種時未取到菌種，從而導致沒有細菌生長繁殖。

在實踐教學中樹立學生的有菌、無菌意識，形成無菌技術，對詮釋抽象理論教學不僅有驗證作用，而且能讓學生刻骨銘心地掌握無菌技術，并在將來的醫療技術操作中嚴格執行無菌操作技術，對防止醫源性感染有極其深遠的意義。

參考文獻：

訾自強，楊秀珍.病原生物與免疫學[M].北京：人民衛生出版社，2009.