安徽石蒜組培快繁體系的建立

姜自紅

摘要 [目的]建立安徽石蒜組織培養體系。[方法]將直徑3～4 cm的鱗莖切成數塊帶鱗莖盤的雙鱗片作為外植體，通過消毒、誘導生芽、增殖、生根過程建立組織培養體系。[結果]鱗莖外植體用0.1%氯化汞溶液進行二次滅菌后接種效果最好。最適宜的芽誘導培養基為MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+白糖 30 g/L，最適增殖培養基為MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+白糖30 g/L，最適生根培養基為1/2MS+NAA 0.5 mg/L+白糖30 g/L，生根小鱗莖在泥炭∶蛭石=7∶3的介質中成活率達93.3%。[結論]該研究可為提供大量的安徽石蒜組培苗提供技術基礎。

關鍵詞 安徽石蒜；鱗莖；組織培養

中圖分類號 S604+.3文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2018）31-0085-03

Abstract [Objective]To establish a tissue culture system of Lycoris anhuiensis. [Method]The bulbs with a diameter of 3-4 cm were cut into several scales with bulbs as explants， and the tissue culture system was established by disinfection， induction of sprouting， proliferation and rooting. [Result]Bulb explants were best inoculated with 0.1% mercuric chloride solution after secondary sterilization. The most suitable bud induction medium was MS+6BA 3 mg/L + NAA 0.5 mg/L + white sugar 30 g/L. The optimal proliferation medium was MS+6BA 3 mg/L+ NAA 0.5 mg /L + white sugar 30 g/L， the most suitable medium for rooting was 1/2MS + NAA 0.5 mg/L + white sugar 30 g/L. The domesticated seedlings had a survival rate of 93.3% in a medium with peat∶vermiculite=7∶3. [Conclusion]The research could provide a technical basis for providing a large number of L. anhuiensis tissue culture seedlings.

Key words Lycoris anhuiensis；Bulb；Tissue culture

石蒜屬（Lycoris Herb）隸屬石蒜科（Amaryllidaceae），具有豐富的花型[1]，如大花型和小花型；皺瓣、平瓣、寬瓣和窄瓣；百合型和長筒型等，花后冬春季又可觀葉，有著極高的觀賞價值[2]，很早以前就受到人們的喜愛，目前石蒜、乳白石蒜、忽地笑、愛斯石蒜、香石蒜等11種已實現商品化生產[3]。李淑順等[4]以灰色關聯度對14種石蒜屬花卉的觀賞性狀進行了評價，結果表明安徽石蒜（Lycoris anhuiensis）排在第 觀賞效果好。但目前安徽石蒜多處于野生狀態[5]，資源稀缺，以自然分球法繁殖的繁殖速度慢，繁殖系數相當低；種子難以正常成熟，自然結實率不高[6]，種子成熟度差，限制了其在園林中的推廣應用，解決種球快速繁殖問題是安徽石蒜產業化開發的關鍵[7]。筆者以鱗莖為外植體，對安徽石蒜的組培快繁技術進行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料

安徽石蒜鱗莖，取材于安徽瑯琊山。

1.2 方法

1.2.1 不同預處理及消毒方法對石蒜鱗莖外植體成活率的影響。選取生長健壯、直徑3～4 cm、大小基本一致的鱗莖，剝除外層褐色皮膜，在流水下沖洗 1～2 h，將沖洗干凈的鱗莖切去頂端。

預處理方法：選取冷藏0（對照）、7、21、35、49 d處理方式。

消毒方法：先用0.1%氯化汞消毒10 min，再根據切球后是否進行0.1%氯化汞二次消毒1 min設置2種處理，接種21 d后記錄每種處理的接種數及污染數。接種培養基為MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+白糖30 g/L。

1.2.2 不同激素及濃度配比對不定芽誘導的影響。將經預處理后的安徽石蒜鱗莖切成帶基盤的雙層或三層鱗片，消毒后接種在MS培養基上，對不同植物生長調節劑 6-BA 和 NAA 的不同濃度配比進行篩選。每個處理接種10個外植體，重復3次，將鱗片接種后，每隔3 d觀察1次，50 d后統計不定芽誘導率，不定芽誘導率=分化不定芽的外植體數/接種的外植體數×100%。

1.2.3 不同激素及濃度配比對小鱗莖擴繁增殖的影響。經過初代培養，以篩選出的最佳培養基為基礎，對6-BA、NAA、 4-D進行不同濃度組合試驗，35 d后分別記錄每組處理小鱗莖的增殖情況。重復3次，以篩選出最佳增殖培養基，增殖倍數=誘導不定芽總數/接種不定芽總數。

1.2.4 不同培養基對小鱗莖生根的影響。將長勢較好的小鱗莖轉入含不同激素及濃度的生根培養基中進行生根培養，對小鱗莖的最佳生根條件進行研究。

1.2.5 不同土壤條件對生根苗移栽成活率的影響。按朱景存等[8]的方法，將經過處理的生根幼苗分別移植于營養土和摻蛭石10%、30%、50%、70%的營養土中，每個處理5盆，每盆3株，常規管理，30 d后統計成活率，成活率=成活數/馴化株數×100%。

2 結果與分析

2.1 鱗莖不同預處理方法比較

有研究認為石蒜鱗莖為內生菌[9]，徹底滅菌較為困難，試驗設計了預處理及二次滅菌。從表1可以看出，石蒜鱗莖經過預處理后，明顯降低了污染率，尤其是經二次消毒后，污染率為0，效果非常顯著，但同時也出現了外植體干褐的現象。該試驗鱗莖球冷藏效果比較好的是冷藏21 d的處理。綜合分析得出石蒜鱗莖的最佳滅菌方式為冷藏21 d后，用0.1%氯化汞溶液處理10 min，無菌水沖洗4～5次，切成雙鱗片后再用0.1%氯化汞溶液處理1 min，無菌水沖洗4～5次。

2.2 不同濃度組合對雙鱗片出芽影響的雙因素試驗

將雙鱗片接種到A1～A8培養基中，發現鱗片于28 d開始出現向內側卷曲發綠的情況（圖1）。不同部位的外植體，其卷曲程度亦有所差別，隨后長出白色的生長點，側芽由白變綠（圖2），誘導過程中沒有愈傷組織出現。由表2可知，雙鱗片外植體的誘導率總體偏低，最高A4培養基中也僅33.3%，其中A1培養基的不定芽誘導率最低，其長出的側芽量也最少，不定芽長勢最差，其次是A2和A3培養基。因此，MS+6-BA 30 mg/L+NAA 0.5 mg/L+白糖30 g/L為不定芽誘導的最佳培養基。

2.3 鱗莖不定芽的增殖情況

將誘導形成的帶不定芽的石蒜鱗莖切割轉至增殖培養基，經觀察發現，20 d后各培養基上乳白色的不定芽陸續開始形成，同時，部分雙鱗片間還有石蒜葉長出（圖3）。由表3可知，增殖倍數均較低，其中B1和B3培養基的平均增殖倍數最低，其芽的長勢也較差，增殖倍數相對最高的是B6培養基，其增殖倍數為1.83。確定B6培養基為最優不定芽增殖培養基，即MS+6-BA 3 mg/L+NAA 1.0 mg/L+白糖30 g/L。

2.4 不同培養基對小鱗莖生根的影響

從表4可以看出，C6培養基即1/2MS+NAA 2.0 mg/L+白糖30 g/L為最佳生根培養基。在一定濃度范圍內，不定根的誘導率會隨著NAA含量的增加而增加，且不定根的長勢也較好。

2.5 煉苗與移栽 石蒜屬植物多耐旱、耐貧瘠、易管理[10]，馴化時保持基質濕潤即可。一般移入基質中幾天后，外層葉片會逐漸變黃、枯萎，呈現出與休眠期葉片變化相似的現象，同時從鱗莖中心處又抽出新的葉子。馴化30 d后記錄的成活結果見表5，經過煉苗的組培苗移栽后最高成活率為933%。

3 結論與討論

此次研究完成了安徽石蒜植物組培體系的構建，鱗莖球冷藏處理可以降低污染率，其中21 d冷藏污染率低。最適合的消毒方法為0.1%氯化汞消毒10 min，無菌水沖洗4～5次，鱗片處理好后再用0.1%氯化汞處理1 min，無菌水沖洗4～5次。初代培養中，最佳誘導不定芽的培養基為MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+白糖30 g/L，卡拉膠 5.5 g/L，pH 58，與劉志高等[11]研究報道的乳白石蒜帶基盤雙鱗片誘導不定芽的最佳培養基一致。繼代培養中，不定芽增殖倍數最高的培養基為MS+6-BA 3 mg/L+NAA 1.0 mg/L+白糖30 g/L，卡拉膠5.5 g/L，pH 5.8；最佳生根培養基為1/2MS +NAA 2 mg/L+白糖30 g/L，卡拉膠5.5 g/L，pH5.8。出瓶苗在泥炭∶蛭石=7∶3的介質中成活率達93.3%。在鱗莖不定芽誘導過程中發現，較高的6-BA含量有利于促進不定芽的形成，6-BA含量超過3 mg/L后啟動較容易。該研究為安徽石蒜組培苗規模化、工廠化生產提供了理論依據和基礎數據支撐。

參考文獻

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