400 g/L二噻農·肟菌酯懸浮劑的高效液相色譜分析

馮宇杰，俞霖潔，王晨茜，吳航俊

（浙江省化工研究院有限公司，浙江 杭州 310023）

0 前言

二噻農，又稱二氰蒽醌，是德國Merck公司于20世紀60年代開發的殺菌劑品種，可防治多種真菌性病害，特別是對炭疽病效果顯著。肟菌酯，又名肟草酯，是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，對真菌綱病害如白粉病、銹病、潁枯病、稻瘟病等均有良好的活性[1]。目前，有關二噻農的檢測方法主要有高效液相色譜法和液相色譜-串聯質譜法[2-3]，有關肟菌酯的檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜法和超高效液相色譜-電噴霧串聯質譜法[4-6]，關于二噻農和肟菌酯復配制劑的分析方法未見報道。

本文采用Inertsil ODS-3色譜柱和二極管陣列檢測器，建立了二噻農和肟菌酯同柱分離測定的高效液相色譜方法。該方法操作簡便、快速準確，可作為企業產品質量控制和質檢機構質量檢測的參考方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Dionex U3000高效液相色譜儀：具二極管陣列檢測器、自動進樣器和Chromeleon 7.0色譜處理工作站； 色譜柱：Inertsil ODS-35 μm， 4.6×250 mm不銹鋼柱；乙腈：色譜純，臨海市浙東特種試劑有限公司；水：二次蒸餾水；二噻農標樣：99.0%，德國 Dr.Ehrenstorfer；肟菌酯標樣：99.0%，國家農藥質檢中心 （定值）；400 g/L二噻農·肟菌酯懸浮劑：由某企業提供。

1.2 溶液配制

標準溶液：分別稱取二噻農、肟菌酯標樣約0.018 g（準確至0.0002 g），置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

樣品溶液：稱取約0.1 g（準確至0.0002 g）400 g/L二噻農·肟菌酯懸浮劑樣品，置于50 mL容量瓶中，先用約3 mL水將樣品分散，再用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾后待用。

1.3 色譜條件

流動相：φ（乙腈+水）=70+30；進樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：254 nm。

1.4 測定步驟

1.4.1 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標準溶液。計算各針相對響應值，待相鄰兩針的相對響應值小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.2 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣溶液前后2針標樣溶液中二噻農（或肟菌酯）的峰面積分別進行平均。試樣中二噻農（或肟菌酯）的質量分數X/%按下式計算：

式中：A1——2針標樣溶液中二噻農（或肟菌酯）峰面積的平均值；

A2——2針試樣溶液中二噻農（或肟菌酯）峰面積的平均值；

m1——標樣的質量，g；

m2——試樣的質量，g；

p——標樣中二噻農（或肟菌酯）的質量分數，%。

2 結果和討論

2.1 色譜條件的選擇

通過Dionex U3000液相色譜儀配置的二極管陣列檢測器的光譜數據采集功能，獲得的二噻農與肟菌酯紫外吸收譜圖見圖1。從圖1可知，二噻農在200 nm和236 nm處均有較大吸收，肟菌酯在190 nm、253 nm處有較大吸收。經過實驗比對，選擇254 nm作為最佳檢測波長，在此波長下峰形良好，二噻農和肟菌酯紫外吸收比例合適，無雜質干擾。

圖1 二噻農（a）和肟菌酯（b）的紫外吸收光譜圖

根據二噻農與肟菌酯的性質，選擇乙腈溶解樣品，以不同比例的乙腈和水，對其進行有效分離。當φ （乙腈+水）=70+30，流速為1.0 mL/min時，兩組分能得到很好的分離，峰形尖銳，對稱，基線平穩，保留時間適中，分別為二噻農約6.3 min，肟菌酯約11.5 min，見圖2。

圖2 肟菌酯（a）和二噻農（b）的標樣溶液液相色譜圖

2.2 方法線性關系

分別稱取二噻農和肟菌酯標準品0.15 g（準確至0.0002 g），置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管分別準確移取2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL 上述溶液于5個50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。按照1.3色譜操作條件，分別進樣進行測定。以二噻農（肟菌酯）質量濃度為橫坐標，二噻農（肟菌酯）峰面積為縱坐標，繪制線性相關曲線（見圖3）。計算得二噻農線性回歸方程為y=215.62x-0.6477（R2=1.0000），肟菌酯線性回歸方程為y=146.2x-0.029（R2=1.0000）。

圖3 二噻農（a）和肟菌酯（b）的線性關系圖

2.3 方法準確度

取400 g/L二噻農·肟菌酯懸浮劑樣品，準確測定其中二噻農與肟菌酯質量分數。再稱取5份樣品，分別準確加入一定量的標樣，根據稱取樣品量和加入標樣量計算出二噻農和肟菌酯的理論含量。按照1.3色譜操作條件，進樣分析，獲得二噻農和的肟菌酯實測含量。測得二噻農回收率在98.9%～100.3%之間，平均回收率為99.5%，肟菌酯回收率在99.1%～100.6%之間，平均回收率為99.8%，結果見表1。

表1 方法準確度

2.4 方法精密度

在上述方法下對同一批次400 g/L二噻農·肟菌酯懸浮劑樣品重復測定6次，分別獲得二噻農和肟菌酯的標準偏差和變異系數，結果見表2。

3 結論

建立了一種可同時對400 g/L肟菌酯·二噻農懸浮劑中兩個有效成分進行定量檢測的高效液相色譜方法。試驗結果表明，該方法具有線性關系良好、定量準確、操作簡便、分析速度快等特點，能滿足產品的質量分析要求。

表2 方法精密度

參考文獻：

[1] 解維星，王春修，韓先正.30%肟菌酯·苯醚甲環唑水乳劑配方研發及應用[J].中國農藥，2017，（8）：63-66.

[2] 赫秀萍，畢瑞鋒.液相色譜-串聯質譜法測定草莓中二噻農殘留[J].化學分析計量，2014，23（4）：48-50.

[3] 顧保權.二噻農原藥和制劑液相色譜測定的協作研究[J].農藥譯叢，1997，19（2）：60-62.

[4]吳進龍，季穎，傅桂平，等.75%肟菌酯·戊唑醇WG氣相色譜分析[J].農藥，2009，48（7）： 498-499.

[5] 萬宏劍，葉淑芳，譚波.肟菌酯原藥高效液相色譜分析[J].農藥，2011，50（11）： 820-821.

[6] 陳莉，賈春虹，朱曉丹，等.超高效液相色譜-電噴霧串聯質譜法測定戊唑醇、肟菌酯及代謝物肟菌酸在西瓜和土壤中的殘留[J].農藥，2013，52（2）：119-121.