黃芩經不同方式處理黃芩苷保留量的差異

陳 茜

（遼寧省錦州市婦嬰醫院藥劑科，遼寧 錦州 121000）

黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。春秋二季采挖，除去須根及泥沙，曬后撞去粗皮，曬干。味苦性寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎功效。主要用于濕溫、暑溫、胸悶、嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，臃腫瘡毒，胎動不安。在中成藥生產中，常以黃芩的提取物入藥。主產于河北、陜西、遼寧、內蒙古、山東、黑龍江等地，其主要成分是黃酮類化合物，其中黃芩苷的含量最高，有很好的提取利用價值[1]。它的抗菌譜較廣，能抑制多種細菌、皮膚真菌、鉤端螺旋體等，對青霉素等抗生素產生抗藥性的金黃色葡萄球菌，黃芩仍對其具有抑制的作用；黃芩還具有降血壓、利尿、保肝、利膽、鎮靜、解除平滑肌痙攣、抗過敏等作用。在臨床上，黃芩對小兒急性呼吸道感染、急性菌痢、傳染性肝炎、腎盂腎炎、慢性氣管炎等均具有良好的治療效果。黃芩苷產品不但應用于天然純植物藥領域，還應用于人體及動物病的防治，惡性疾病防治以及化妝品等眾多領域，其應用領域非常廣泛，市場前景廣闊，目前已成為國內外研究的熱點，并且，黃芩藥材在應用到制劑的過程中有很多不同的提取工藝，所以，本實驗以黃芩中最重要的成分黃芩苷的保留量為指標，比較這些提取工藝的差異。本實驗對黃芩資源的綜合利用具有一定的參考意義。

1 儀器和試藥

1.1 材料和試劑 黃芩藥材（批號：110508，廠家：亳州市貢藥飲片廠，產地：河北承德)、黃芩對照品（批號：110715-201117，中國食品藥品鑒定研究院）、甲醇（色譜醇，天津化學試劑公司）、純化水，磷酸（沈北化學試劑廠）、濃鹽酸 (天津化學試劑公司)、無水乙醇（天津永晟精細化工有限公司）、及10%氫氧化鈉（北京化工廠）均為分析純、活性炭、PH試紙。

1.2主要儀器 L-2000型高效液相色譜儀、微量進樣器（?=0.7，針長5.1）、旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠RE-52A）、恒溫干燥箱 (精宏XMTD-8222)、水浴鍋 (諾藝HH-6)、直型冷凝管、圓底燒瓶、調溫生熱套（ZDHW）、電子萬用爐（220 V.AC/2000 W）、電子分析天平（AL204）、超聲波清洗器 (KQ-250DE型)、10 mL、50 mL、100 mL量瓶、燒杯、蒸發皿、玻璃棒。

2 方法

2.1 提取工藝

2.1.1 煎煮法 取黃芩藥材20 g，水煎煮2次，每次2 h，合并2次煎液，過濾，濃縮干燥，備用[2]916。

2.1.2 溫浸法 稱取黃芩粗粉20 g，溶媒采用蒸餾水，80℃水浴加熱，提取2次。第1次加入溶媒10倍量，提取1 h；第2次加入溶媒8倍量，提取0.5 h。合并2次濾液，將濾液加熱到40℃，加濃鹽酸調pH值至1.5左右，保溫60 min，取出再靜置12 h。沉淀物用蒸餾水洗滌2次，于55℃干燥，備用[3]。

2.1.3 水提酸沉法 取黃芩藥材20 g，加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并3次煎液，濾過，濾液濃縮至密度為1.03～1.08(80℃)的浸膏，于80℃用2 mol/L的鹽酸調節pH值至1.0～2.0，保溫1 h，靜置24 h，濾過，沉淀用水洗至pH值至5.0，再用70%乙醇洗至pH值為7.0，低溫干燥，備用[2]612。

2.1.4 水提醇沉法 取黃芩藥材20 g，水煎煮2次，每次1.5小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22（80℃） 的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量達60%～70%，靜置12 h以上，取上清液濾過，濾液回收乙醇，濃縮，干燥，備用[2]495。

2.1.5 乙醇提取法 取黃芩藥材20 g，粉碎成最粗粉，用90%乙醇提取3次，第1次2 h，第2、3次各1.5 h，合并提取液，回收乙醇，濃縮，干燥，備用[2]690。

2.1.6 乙醇加熱回流法 取黃芩藥材20 g，粉碎成粗粉，加75%乙醇浸泡16 h后，加熱回流3次，每次2 h，濾過，濾液合并，回收乙醇并減壓濃縮，干燥，備用[2]857。2.1.7活性炭吸附法 取黃芩20 g，加水煎煮2次，每次1 h，濾過，合并濾液，用2 mol/L鹽酸溶液調節pH值至1.0～2.0，在80℃保溫30 min，靜置12 h；濾過，沉淀加8倍量的水，攪拌，用10%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0，加入等量乙醇，攪拌使沉淀溶解，濾過，濾液用2 mol/L鹽酸溶液調節pH值至2.0，在60℃保溫30 min，靜置12 h；濾過，沉淀用乙醇洗至pH值至4.0，加10倍量的水，攪拌，用10%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0，每1000 mL中加入5 g活性炭，充分攪拌，在50℃保溫30分鐘，加入等量乙醇，攪拌均勻，濾過，濾液用2 mol/L鹽酸溶液調節pH值至2.0，在60℃保溫30 min，靜置12 h；濾過，沉淀用少量乙醇洗滌，于60℃下干燥，備用[2]846。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取黃芩苷對照品適量，加70%甲醇制成60 μg/mL的溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取黃芩粗粉樣品0.1 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入70%乙醇40 mL，超聲10 min，冷卻，定溶至刻度，精密量取1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定波長選擇 采用紫外分光光度計對黃芩苷對照品溶液在200～400 nm波長范圍內進行掃描，在278 nm波長處有較強的吸收，結合 《中國藥典》 (2010版一部)黃芩質量標準，選定280 nm為檢測波長。

2.5 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。以甲醇-水-磷酸溶液 (47∶53∶0.2)為流動相；流速為0.8 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：25℃；理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2000[4]。2.6測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得黃芩苷含量。

3 結果

3.1 線性關系考察 取黃芩苷對照品適量。分別配制成每1 mL為10 μg、20 μg、40 μg、60 μg、120 μg，進樣量為10 μL，樣品按上述色譜條件測定各峰面積。以峰面積積分值為縱坐標，各對照品的濃度為橫坐標，繪制標準曲線；得回歸方程：Y=34630X+22327，r=0.9998；黃芩苷濃度在10～120 μg/mL之間時與峰面積呈良好的線性關系，見圖1。

圖2 黃芩苷標準曲線

3.2 樣品測定 分別精密稱取不同提取工藝的黃芩浸膏粉，按2.3項下操作，在上述色譜條件下對《藥典》中黃芩原藥材及4批不同提取工藝下的黃芩浸膏粉進行HPLC分析，結果顯示提取率分別為：水煎煮法為34.75%、溫浸法為3.70%、水提酸沉法為8.55%、水提醇沉法為35.45%、乙醇提取法為24.10%、乙醇加熱回流法為51.30%、活性炭吸附提取法為0.85%；轉移率分別為：水煎煮法為51.98%、溫浸法為6.90%、水提酸沉法為50.59%、水提醇沉法為37.66%、乙醇提取法為2.84%、乙醇加熱回流法為63.56%、活性炭吸附提取法為4.68%。見表1。

表1 樣品測定結果

4 討論

不同乙醇濃度提取的黃芩苷含量不同，75%乙醇條件下黃芩苷含量最高，故選擇75%乙醇做提取溶劑為適宜的溶劑[2]495。隨溫度的提高，提取率增加，達85℃時提取率最高，故乙醇加熱回流提取時以乙醇微微沸騰為提取溫度，不宜過高浪費乙醇和能源[2]690。本文采用HPLC法測定黃芩藥材中黃芩苷的含量，黃芩苷與其他成分能夠很好分離，專屬性及重現性好，結果準確可靠，可用于該制劑的質量控制和分析[6]。

以上結果表明乙醇加熱回流法提取黃芩苷的提取率最高，轉移率也最高，水提酸沉法提取黃芩苷的純度最高，活性炭吸附提取法提取黃芩苷的提取率最低，醇提法提取黃芩苷的純度最低，轉移率也最低。

[1]汪霞，張雪，廖嘵嘉.不同提取工藝下黃芩浸膏粉中黃芩苷含量的測定研究[J].中國現代藥物應用，2010，2(9):10-11.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·中藥制劑[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[3]Han Lujia ，Yan Qiaojuan ，Wang Zhengqiang.Study on extraction technque and separation method ofBalcalin[J].Transaction ofthe CSAE，2011，6(8):6-7.

[4]汪霞，張雪，廖嘵嘉.不同提取工藝下黃芩浸膏粉中黃芩苷含量的測定研究[J].中國現代藥物應用，2010，2(9):10-11.