基于調補心腎理論對益心氣補腎精法改善認知功能作用機制的研究※

馬琳孫莉項顆

（吉林省中醫藥科學院老年病科，吉林 長春 130021）

輕度認知功能損害 (MCI)是癡呆的早期階段，積極防治MCI對防治老年癡呆具有重要意義。我科室多年來致力于MCI及老年癡呆方面的研究，調補心腎法是我們治療MCI的根本大法，其核心是通過益心氣、補腎精改善認知功能，預防老年癡呆，代表方劑為臨床經驗方“益氣補腎活血方”。我們對該方進行了大量研究，證實臨床療效確切，并已從微觀角度初步探討了其作用機理。為了更好地揭示益心氣、補腎精法改善認知功能的本質，我們近年來又運用蛋白組學技術進一步探討了其作用機理，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院門診及療區就診的MCI患者180例，隨機分為治療組、對照組各90例。1.2診斷標準參照Petersen提出的MCI診斷標準。（1） 主訴有記憶下降；（2）精神量表評價：臨床癡呆評定量表 (CDR)評分為0.5分，簡易精神狀態量表（MMSE） 評分大于或等于24分。

1.3 納入標準 （1） 年齡40～75歲；（2） 患者的視力聽力能夠完成測試，MMSE評分不低于24分。（3）CDR評分等于0.5分。

1.4 排除標準 按照NINCDS-ADRDA和DSM-IV診斷標準診斷為癡呆者。（1）排除癡呆及其他可引起腦功能損害的內科疾病或精神心理狀態；（2）患有可導致認知功能損害的其他疾病者；（3）合并其他嚴重內科疾病者；（4）有精神疾病史者。

1.5 治療方法

1.5.1 治療組 治療既往存在疾病的同時，給予益氣補腎活血方（人參10 g，鹿茸5 g，生地黃20 g，三七5 g，牡丹皮15 g，石菖蒲10 g，遠志10 g）水煎，取汁300 mL，每次150 mL，日2次口服。療程12周。

1.5.2 對照組 只給予治療既往存在疾病的藥物。療程12周。

1.6 觀察指標 蒙特利爾認知評估量表 (MOCA)、MMSE、CDR、日常生活能力量表（ADL）、蛋白分析。1.7統計學方法 用SPSS 12.0軟件進行數據統計學分析。

2 結果

2.1 MOCA和MMSE量表積分比較 見表1。治療組治療前后的MOCA及MMSE分值均有較大的改善，差異有顯著性。對照組治療前后療效不明顯。

表1 MOCA和MMSE量表評分比較表 ±s）

表1 MOCA和MMSE量表評分比較表 ±s）

注：組內比較：*P＜0.05，**P＜0.05；組間比較：ΔP＜0.05

組別 時間 MOCA治療組 治療前 24.26±3.25 MMSE 25.33±1.09治療后 26.18±3.41**ΔΔ 28.45±1.62*Δ對照組 治療前 25.13±3.85 25.84±0.50治療后 26.60±4.06 26.53±1.28

2.2 蛋白質譜分析結果 在2組樣品的二維電泳圖譜中，選取17個有差異的蛋白點進行質譜分析。用Mascot軟件對所獲得的樣品進行數據庫查詢，將查詢結果與相應二維凝膠電泳上的等電點、分子量及匹配得分進行綜合分析。質譜分析結果如下（表2），根據質譜結果利用Venny 2.1軟件制作韋恩圖顯示2組蛋白差異（圖1），結果中有2個蛋白（Notch和Tau蛋白） 得分較高，認為是陽性結果，顯示與治療組相比，對照組中兩個蛋白含量均較高，需進一步鑒定。

表2 17個差異蛋白點的鑒定結果

圖1 2組數據差異蛋白點的韋恩熱圖分析結果

RT-PCR驗證。根據質譜分析結果，我們從中選取了5個差異蛋白點進行研究。APP、Notch、Presenilin 1、E-cadherin和Tau protein，用Real-time PCR加以驗證。RT-PCR結果顯示給藥組中Notch（圖2）和Tau蛋白（圖3）的基因表達均低于對照組，而其余3個選取的差異蛋白點的基因表達并無明顯差別。

圖2 RT-PCR檢測Notch基因表達含量

圖3 RT-PCR檢測Tau基因表達含量

3 討論

目前醫學界公認MCI是介于正常老化和癡呆之間的一種認知缺損狀態，是阿爾茨海默病的早期階段。我們認為，心腎虧虛是老年智力減退的基本病機，治療當在調補心腎的基礎上佐以活血、化痰、開竅等治標之法，以達到標本兼顧，氣血同調，補散并行的目的，使陰陽平、氣血和、腦竅利，神識清。益氣補腎活血方系我科室應用多年的治療老年智力障礙的經驗方，由人參、鹿茸、生地黃、三七、牡丹皮、石菖蒲、遠志等藥物組成，用于臨床多年，證實療效肯定。本研究用益氣補腎活血方對腎精虧虛型輕度認知功能障礙患者進行干預，通過雙向電泳分離等方法得到各組總蛋白質分子解剖圖譜，用圖像分析軟件分析各組件差異蛋白質點，MAD/TOF/MS質譜分析，結合蛋白質生物信息庫，鑒定出差異蛋白，進一步探索益心氣、補腎精法改善認知功能的作用機理。

蛋白質組 (proteome)的概念是1994年由Wilkins首先提出[1]，它是指“一種基因組、一種生物、一種組織或細胞所表達的全套蛋白質。采用對整個細胞甚至整個組織的全套蛋白質的蛋白組學研究方法，對證候研究有著重要意義[2]。蛋白質組學的建立為研究蛋白質水平的生命活動開辟了更為廣闊的前景，提供了新型有效的研究手段[3]。蛋白質組學的核心技術雙向電泳（2-DE）是目前分析蛋白質分辨率和重復性最高的技術，能夠連續在一塊膠分離數千種蛋白質。蛋白組學的研究可從遺傳學角度和基因水平做出疾病發生發展、療效和遺傳學概率性評估，為老年疾病的早期診斷和防治提供研究思路和依據，為中醫證候診斷客觀化提供遺傳病理基因方面的依據。蛋白質組學研究基因的最終表達產物——具有活性的蛋白質，以蛋白質雙向電泳和新型質譜分析為技術平臺，研究不同條件和狀態下蛋白質組的性質和變化規律，是后基因組時代的研究重點。

[1]Wilkins M.Government backs proteome proposal[J].Nature，1995（378）:653.

[2]劉為民.中醫證候學研究與證候蛋白質組學[J].中醫藥學報，2003，31(3):1.

[3]梅武軒.蛋白質組學與中醫證本質的研究[J].中華中醫藥學刊，2008，2（7）：1551-1553.