奶牛大腸桿菌性乳腺炎耐藥性試驗

郭海濤,牟瑞營,王 哲

(1.吉林大學動物醫學學院,吉林 長春 130062;2.山東省臨朐縣畜牧局,山東 臨朐 262600)

奶牛乳腺炎在全世界均為高發疾病,患病奶牛的乳產量和乳品質會嚴重下降,嚴重者可導致敗血癥的發生,不僅給奶牛養殖業帶來巨大的經濟損失,還會危害人類的健康。引起奶牛發生乳腺炎的病因復雜,病原菌感染是導致該病發生的最主要原因,其中大腸桿菌是導致奶牛乳腺炎發生重要常見的病原菌之一。目前,對于奶牛乳腺炎的防治還是以抗生素為主,不合理的使用抗生素會導致耐藥菌株的出現,以及藥物殘留等副作用,使該病的防治更加困難,也是近年來臨床上奶牛乳腺炎的發病率居高不下的主要原因。筆者所在山東省臨朐縣是奶牛養殖大縣,奶牛乳腺炎的防病率近年來均無下降趨勢,本試驗主要的目的為分離培養臨朐縣奶牛養殖場患有臨床型乳腺炎奶牛乳內的大腸桿菌,并且對其耐藥性進行檢測,旨在為奶牛乳腺炎防治藥物選擇上提供參考。

1 試驗與材料

1.1 試驗動物 選自山東濰坊臨朐縣5個規模化奶牛場。

1.2 試劑 藥敏試紙、水解酪蛋白瓊脂(杭州微生物試劑有限公司);細菌微量生化鑒定管、營養肉湯、血瓊脂培養基、伊紅—美藍培養基、高鹽甘露醇、麥康凱瓊脂、綿羊鮮血瓊脂、血清瓊脂(青島海博生物技術有限公司)。

1.3 臨床型乳腺炎診斷方法 檢查局部是否有紅腫熱痛特征,乳汁的顏色是否異常,是否有硬塊、凝塊、絮狀物,甚至化膿或出現水樣乳汁。

1.4 采樣方法 提前將滅菌的離心管準備好,標注日期、奶牛區號、奶牛耳標號。用溫水清洗奶牛乳房后,用干凈的紙巾擦干,再用消過毒的毛巾進行擦拭,用鑷子夾取酒精棉球按螺旋方式由乳頭開始擦拭乳房周圍,在棄去前3次奶后,將患牛奶樣擠入備好的離心管中,封好,冷凍保存。

1.5 主要致病菌分離鑒定 將患牛奶樣放置室溫,自然融化后,振蕩混勻。用200 μL移液槍吸取奶樣滴在含有培養基的平皿上,用接種環均勻涂抹在各個培養基上,隨后將涂好的培養基放置到37℃恒溫箱中溫育24～48 h,觀察并記錄細菌生長形態、大小等。

1.5.1 金黃色葡萄球菌的分離鑒定 在高鹽甘露醇瓊脂中呈現黃色或紅色小菌落,在血瓊脂平皿中形成光滑、隆起、顏色金黃色、中等大小面積的菌落,有溶血現象。鏡檢呈典型的葡萄球狀,可在肉湯中生長,并能分解甘露醇,凝固酶實驗呈陽性[1]。

1.5.2 大腸桿菌的分離鑒定 可在普通平皿、伊紅—美藍平皿、鮮血平皿上生長,形成較大的菌落。肉湯培養中,下層會出現明顯的沉淀,上層出現菌環,肉湯變渾濁。為革蘭陰性菌,鏡檢細菌形態呈現短桿狀[2]。

1.5.3 鏈球菌的分離鑒定 鮮血平皿生長出半透明、圓形隆起、露滴狀菌落,呈α、β或γ溶血,鏡檢為短鏈、長鏈狀排列。肉湯培養中,形成渾濁的菌液[3]。

1.5.4 棒狀桿菌的分離培養與鑒定 伊紅—美藍培養基上形成體積較小的菌落,普通瓊脂上生長不良,染色為革蘭氏陽性菌,鏡檢細菌形態呈現棍棒狀態[4]。

1.5.5 沙門菌的分離培養與鑒定 麥康凱瓊脂培養基上呈現邊緣整齊、半透明狀、扁平的菌落。染色鏡檢為革蘭陰性菌。

1.6 藥敏試驗 利用K-B紙片瓊脂擴散法進行檢測。最后用游標卡尺測量,記錄抑菌圈直徑,具體判定標準見表1。

表1 藥敏試驗評判標準

2 結果

2.1 主要致病菌分離鑒定結果 經過對患牛乳樣進行分離鑒定,本縣牛場大腸桿菌是奶牛乳腺炎的主要病原菌,占所有感染菌的52.6%,其次是鏈球菌,占23.1%。結果見表2。

表2 病原菌檢出率

2.2 藥敏試驗檢測結果 對本縣牛場乳腺炎的主要致病菌大腸桿菌進行藥敏試驗,結果見表3,頭孢噻呋對大腸桿菌高度敏感,其余多數藥物均有抑菌作用。

表3 藥敏試驗判定結果

3 討論

3.1 乳腺炎是母畜乳腺的炎癥,多發生在乳用家畜,特別是奶牛乳腺炎更為常見,其特點是乳中體細胞特別是白細胞增多,以及乳腺組織發生病理變化。本病不僅影響產奶量,造成重大的經濟損失,而且影響鮮乳的品質,危害人類的健康。導致乳腺炎的病因有很多種,包括乳房受到摩擦、擠壓、碰撞等機械因素;體內某些臟器疾病產生的內毒素,飼料、飲水或藥物中的毒素也可能導致乳腺炎的發生;此外也與遺傳因素有關,但是引起奶牛乳腺炎發生的最常見的因素為病原微生物感染。病原微生物種類繁多,有細菌、真菌、霉形體等,其中大腸桿菌是一種導致該病發生的常見病原菌。

3.2 本試驗中在臨朐縣5個不同的牛場采集了60份臨床型乳腺炎的樣本,對其致病菌進行分離培養鑒定,結果導致奶牛乳腺炎的主要致病菌為大腸桿菌和鏈球菌,通過藥敏實驗結果表明,分離培養的大腸桿菌對多種抗生素均具有不同程度的耐藥性,對頭孢噻呋敏感,提示該地區奶牛乳腺炎可以考慮應用頭孢噻呋治療。

參考文獻:

[1] 柳旭偉,葛文霞,楊力偉,等.奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌的分離鑒定及其藥敏試驗[J].上海畜牧獸醫通訊,2014(2):50-51.

[2] 許有盼.奶牛乳房炎源大腸桿菌的分離鑒定[J].中獸醫學雜志,2017(6):45.

[3] 梁瑞琴,劉強.奶牛乳房炎鏈球菌的分離鑒定[J].畜牧與飼料科學,2009,30(2):64～65.

[4] 肖林晉,孫延鳴.犢牛棒狀桿菌的分離鑒定[J].畜牧與獸醫,2014,44(9):79～81.