Survivin及Bcl-2在鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中的臨床表達意義

肖躍華

鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma of nasal cavity and paranasal sinuses,SNSCC)是臨床比較常見的1種惡性腫瘤，在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中占比約為80%，該病的發生發展有著多因素以及多階段特點[1]。在腫瘤惡化的過程當中涉及到人體凋亡機制的紊亂以及癌基因的活化，其中Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族當中最強的1種，在大部分的腫瘤組織當中廣泛表達，但是在健康組織當中低表達或者不表達[2]。研究人員發現Survivin與腫瘤的發生以及患者預后有重要聯系，同時可以作為治療癌癥的重要靶點。臨床上對Bcl-2的研究比較深入，與人體細胞的凋亡存在直接的聯系[3]。當前關于Survivin以及Bcl-2在SNSCC中的表達及其相關性還缺乏深入的研究，本研究應用免疫化學法檢測SNSCC患者的Survivin以及Bcl-2表達，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2013年12月我院收治的SNSCC患者35例，其中男性19例、女性16例，年齡29～56歲，平均(41.2±2.3)歲，其中高分化患者9例、中分化患者16例、低分化患者10例。同時選取鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤(SNIP)患者35例，男性20例、女性15例，年齡26～59歲，平均(39.1±2.2)歲；并選取下鼻甲黏膜患者35例，男性22例、女性13例，年齡26～57歲，平均(42.9±2.3)歲。3組患者資料完整，術前均未進行放化療，一般資料有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

本研究使用Survivin兔抗人抗體、Bcl-2鼠抗人抗體、DAB顯色劑以及免疫化學試劑盒(中杉金橋公司生產)。具體實驗步驟方面，全部標本使用甲醛固定，使用石蠟包埋，切片的厚度為3 μm。使用免疫組織化學法對切片進行脫蠟以及脫水處理，孵育15 min。標本添加Survivin孵育20 min，濃度為1∶100。使用磷酸鹽緩沖液當作陰性對照。然后滴加Envision孵育20 min后進行DAB顯色，復染、脫水之后封片，顯微鏡條件下進行觀察[4]。

1.3 判斷標準

標本在300倍視野下觀察，選取5個視野，單個視野選取100細胞，計算陽性細胞百分比。表達陰性(-)：計數陽性細胞占比<10%；表達弱陽性(+)：計數陽性細胞數占比<30%；表達中度陽性(++)：計數陽性細胞占比30%～60%；表達強陽性(+++)：計數陽性細胞數占比>60%，同時染色為棕黃色[5]。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 3組患者Survivin及Bcl-2陽性表達比較

SNSCC患者以及SNIP患者的Survivin表達率分別為86.6%(31/35)、68.6%(24/35),顯著高于下鼻甲黏膜組0%(0/35)(χ2=6.9532、5.2531，P均<0.05)；SNSCC及SNIP患者之間對比無明顯差異(P>0.05)。SNSCC患者的Bcl-2表達率為77.1%(27/35)，顯著高于SNIP患者的51.4%(18/35)以及下鼻甲黏膜組患者的37.1%(13/35)，三者兩兩差異均有統計學意義(χ2=6.1593、4.8462、5.1843，P均<0.05)。

2.2 不同分化SNSCC患者Survivin、Bcl-2表達的比較

在不同分化SNSCC患者的組織當中，腫瘤分化越高，患者的Survivin表達越低，但差異無統計學意義(P>0.05)；在不同分級SNSCC患者的組織當中，腫瘤分化越高，患者的Bcl-2表達越低，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同分級SNSCC患者Survivin及Bcl-2表達對比/例

3 討論

研究人員于二十世紀末首次使用細胞蛋白酶受體通過雜交篩選分離得到Survivin，并且將其定位在17q25，是IAP家族成員當中最小的一種，有著抗凋亡功能以及有絲分裂調節的功能[6]。相關研究的結果顯示，IAP家族當中，Survivin的抗凋亡效果最為顯著[7]。Survivin在正常的人體組織當中低表達甚至不表達，但是在腫瘤組織當中表達廣泛，例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結腸癌、胰腺癌、胃癌晚期淋巴瘤以及神經纖維瘤等[8-9]。Survivin在腫瘤組織當中的表達處于失控狀態，這一問題意味著腫瘤在進展的過程當中廣泛存在著凋亡抑制問題。截止到目前為止，Survivin的抗凋亡作用途徑還不夠明確，部分研究人員認為Survivin能夠直接作用到細胞凋亡過程當中終末效應酶從而發揮細胞凋亡的調節效果，同時參與到細胞周期調控以及腫瘤血管生成過程當中[10]。

本研究使用免疫化學法檢測SNSCC患者當中Survivin的表達率陽性率，結果顯示陽性率為88.6%，與此同時下鼻甲黏膜患者當中均未見表達，這表明Survivin在人體腫瘤組織當中的表達有著特異性，意味著Survivin參與到SNSCC發生發展的過程當中，同時有著促進腫瘤發展的效果。Survivin在人體腫瘤當中的表達特異性，導致Survivin可以當作基因治療腫瘤的新靶點。本研究發現SNSCC患者隨著組織分化程度的下降，Survivin表達的陽性表達率上升，不過差異無統計學意義(P>0.05)。SNIP患者當中的Survivin蛋白表達顯著高于下鼻甲黏膜患者，同時差異有統計學意義(P<0.05)，同時染色的范圍以及強度也跟SNSCC患者不同，這意味著SNIP患者有著持續生長以及惡化的發展趨勢。除此之外，Survivin在SNIP患者到SNSCC患者當中的表達越來越高。有研究人員發現，Survivin表達在初發SNSCC患者以及SNIP患者、復發SNSCC患者以及SNIP患者之間有明顯的區別，這意味這Survivin在SNSCC患者的惡變過程當中有著不容忽視的重要影響[11]。

Bcl-2作為細胞凋亡的重要抑制劑參與到細胞死亡的過程當中，能夠抑制各種病理因素以及生理因素誘發的細胞凋亡，在腫瘤形成的過程當中有著重要的影響[12-14]。本研究的結果顯示，SNSCC患者當中Bcl-2表達陽性率高達77.1%，下鼻甲黏膜患者當中的陽性率僅為37.1%，二者之間有明顯區別(P<0.05)。隨著SNSCC患者分化程度的下降，Bcl-2陽性表達率也越來越高，差異有統計學意義(P<0.05)。這意味著Bcl-2通過抑制腫瘤凋亡而參與到SNSCC發生發展的過程當中。Survivin同Bcl-2都屬于凋亡抑制蛋白，不過二者抑制凋亡的作用途徑存在區別。Bcl-2主要是借助于干擾細胞色素從線粒體當中釋放從而抑制細胞凋亡。SNSCC患者當中Survivin以及Bcl-2 2種不同抗凋亡的機制能夠發揮協同效果，從而進一步增強抗凋亡作用，促進SNSCC出現。Survivin在SNSCC患者組織當中高表達但是在正常下鼻甲組織當中不表達的特征，為臨床上SNSCC患者的基因治療提供可靠的依據。

綜上所述，Survivin及Bcl-2表達與SNSCC的發生發展有重要的聯系，可以作為基因治療的靶點。

[1] 陸鴻略,張淑君,岳文慧,等.Dkk-1及Bcl-2蛋白在人鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中的表達及意義〔J〕.重慶醫學,2015,44(12):1652-1654.

[2] 陸鴻略,張宇麗,趙勇杰,等.程序性細胞死亡因子5、Dickkopf-1及B細胞淋巴瘤-2蛋白在鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義〔J〕.中國耳鼻咽喉頭頸外科,2014,21(6):307-311.

[3] Hasegwa Y，Goto M，Hanai N，et al.Evaluation of optimal drug concentration in histoculture drug response assay in association with clinical efficacy for head and neck cancer〔J〕.Oral Oncol，2007，43(8):749-756.

[4] 祝立麗,肖明明,表貞淑,等.皮膚鱗狀細胞癌中Survivin,Caspase-3,COX-2的表達及臨床意義〔J〕.中國美容整形外科雜志,2014,25(5):317-320.

[5] 陸鴻略,畢 靜,張建利,等.C-erbB-2和VEGF在鼻腔-鼻竇鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義〔J〕.基礎醫學與臨床,2016,36(10):1407-1411.

[6] Liu HT，Wang YG，Zhang YM，et al.TFAR19，a novel apoptosis related gene cloned from human leukemia cell line TF21，could enhance apoptosis of some tumor cells induced by growth factor withdrawal〔J〕.Biochem Biophy Res Commun，2015，25(4)：203-210.

[7] 婁鴻飛,房居高,李平棟,等.CD4～+CD25～+Foxp3～+調節性T細胞在鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中的表達和免疫抑制功能研究〔J〕.中國耳鼻咽喉頭頸外科,2015,22(6):299-303.

[8] 尹文華,劉素琴,陳志凌,等.細胞角蛋白4和細胞角蛋白13在鼻腔-鼻竇鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國耳鼻咽喉頭頸外科,2016,23(2):98-101.

[9] 吳金華,楊細虎,劉振中,等.凋亡抑制因子Survivin在口腔鱗癌中的表達及其意義〔J〕.山東大學學報(醫學版),2014,34(4):89-92.

[10] Chen C，Zhou H，Xu L，et al.Rognostic significance of do-wnregulated expression of programmed cell death 5 in chondrosarcoma〔J〕.J Surg Oncol，2015，10(2)：838-843.

[11] 劉 亮,李 慧,左連富.去甲斑蝥素誘導人食管癌Ec9706細胞凋亡及其可能的機制〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志,2014,21(4):419-422.

[12] 譚 彥,聶志強.生存蛋白基因及其在皮膚腫瘤中表達的研究進展〔J〕.醫學綜述,2015，1(14):2517-2519.

[13] 陸鴻略,張建利,康 菲.C-erbB-2在鼻腔、鼻竇鱗狀細胞癌組織中的表達及其意義〔J〕.軍事醫學,2016,40(8):665-667.

[14] Zhang X，Wang X，Song X，et al.Clinical and prognostic significance of lost or decreased PDCD5 expression in human epithelial ovarian carcinomas〔J〕.Oncol Rep，2011,25(2):353-358.