前列腺液體中各指標對早期癌性診斷標志物篩選的臨床研究

賀 凱 王耀東 胡海燕 任碧華 袁光亞

目前，前列腺癌的早期篩查手段較為單一、篩查效果并不理想、臨床應用還有一定不足[1]。因此，研究前列腺癌早期診斷的標志物很有必要，目前國內許多研究選取了血液為樣本，也有部分學者利用一些蛋白質分析技術進行研究，但這些研究都存在成本過高、成分復雜、難以推廣、特異性低等缺點[2]。因此一種新的更為高效、便捷、特異性強、成本較低的前列腺癌早期診斷的標志物篩選研究方式亟待提出。前列腺液是一種大量含有前列腺和精囊的細胞、蛋白的分泌物[3-4]，取材方便，成本較低，便于臨床研究[5]，因其成分來源只有前列腺和精囊，很容易識別標志物，而精囊的惡性腫瘤發(fā)病率非常低，可以視為腫瘤標志物來源基本都是前列腺[6-7]。只要從前列腺液中篩選到合適的腫瘤標志物，不僅應用前景十分廣，還有利于臨床進一步研究推廣。因此本研究選取了前列腺液各指標中4種較有研究前景的蛋白質(α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)進行檢測，進一步篩選出最合適的標志物，旨在提高前列腺癌早期診斷率，為臨床提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

A組為前列腺癌患者組：2015年12月至2016年12月期間在本院治療，經檢查明確診斷為前列腺癌的患者77例，平均年齡(51.52±2.74)歲，BMI(21.2±1.6) kg/m2。B組為同期在醫(yī)院體檢的非前列腺癌患者，平均年齡(48.26±2.14)歲，BMI(23.1±1.7) kg/m2，無過往病史且未服用影響體檢的藥物，共28例。所有入選B組的患者排除前列腺方面的隱患以及不可抗因素所引起的前列腺損害。2組患者在平均年齡、BMI上差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 納入標準及排除標準

前列腺癌組納入標準[8]：經檢查確診為前列腺癌患者；無器官移植、其他惡性腫瘤、自身免疫性疾病；無免疫功能缺陷；HIV抗體均陰性；患者同意參與此次研究。前列腺癌組排除標準[9]：除前列腺癌外患者患有其它較為嚴重的疾病；患者患有自身免疫病或免疫失調；HIV抗體為陽性；患者不愿意配合術后隨訪；患者不同意參與此次研究。

1.3 研究方法

獲取前列腺液：通過按摩的方式分別獲取2組患者的前列腺液，約1 ml，制作為標本存放。使用夾心法酶聯免疫吸附測定(ELISA)檢測標本[10]。

A組根據病理結果分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個級別；按照骨掃描結果將A組分為骨轉移組和無骨轉移組。

1.4 實驗步驟

將A、B組前列腺液標本用離心機處理后按一定順序分別置100 μl于酶標板空白孔，標記編號。分別在2組孔中加入50 μl酶標記液，在36 ℃條件下進行60 min左右的反應。稀釋洗滌后，加入呈色劑，避光反應15 min左右。各組均加入50 μl終止液，輕微震蕩至變色，將標本置于標儀上讀取OD值，并計算出各個蛋白的濃度[11]。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 2組各蛋白平均濃度、陽性率對比

核基質蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白的平均濃度2組差異有統(tǒng)計學意義，α-甲酰輔酶A消旋酶的陽性率2組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其余指標差異均沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)?？梢哉J為α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度。見表1。

表1 2組各蛋白平均濃度、陽性率對比

2.2 前列腺癌各組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均濃度對比

不同級別組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、Survivim蛋白平均濃度對比，差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；骨轉移組與無骨轉移組之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、Survivim蛋白平均濃度對比，差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。胸腺素B15在不同級別及骨轉移與否中的平均濃度均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表2。

3 討論

前列腺癌是當前威脅中老年男性健康最大的惡性腫瘤之一。據國外報道，死亡率約為12%[12]。近年來，隨著人口的發(fā)展和社會的整體老齡化，我國前列腺癌發(fā)病率不斷提高。由于腫瘤的特點，早期癌性難以及時發(fā)現治療，導致了患者死亡率大大增加[13-14]。為了解決這一問題，許多學者提出了標志物診斷想法。近年來針對基因、抗原、染色體標記的研究層出不窮，但這些研究或多或少都存在著成本較高、取材不易、操作復雜、難以推廣等缺點[15-16]。因此本次研究選取了取材方便、成本較低、操作比較簡便的前列腺液作為研究材料。

表2 前列腺癌各組別之間α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、胸腺素B15、Survivim蛋白平均濃度對比

注：a表示與Ⅰ～Ⅱ組對比，P<0.05；b表示與Ⅱ～Ⅲ組對比，P<0.05；c表示與Ⅲ～Ⅳ組對比，P<0.05。t、P為骨轉移與否間的比較。

本研究選取了前列腺液各指標中4種較有研究前景的蛋白質(α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白)進行檢測，進一步篩選出最合適的標志物。通過A組(前列腺癌患者)和B組(前列腺正常體檢人群)各蛋白平均濃度、陽性率對比，在陽性率上，α-甲酰輔酶A消旋酶差異明顯具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；核基質蛋白、胸腺素β15、Survivin蛋白差異均沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；可以認為α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度。根據病理結果、骨掃描結果將A組分為Ⅰ～Ⅱ組、Ⅱ～Ⅲ組、Ⅲ～Ⅳ組、Ⅳ及以上組；骨轉移組、無骨轉移組。在各組別之間對比了4種蛋白的平均濃度，發(fā)現在不同級別及有無骨轉移之間平均濃度對比上，α-甲酰輔酶A消旋酶、核基質蛋白、Survivin蛋白平均濃度對比差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；胸腺素β15平均濃度對比差異明顯有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。出現這一結果的原因可能是：α-甲酰輔酶A消旋酶在癌細胞過氧化物酶和線粒體中活性較強，而胸腺素β15與肌動細胞息息相關，能夠體現不同病情之間的變化。

綜上所述，α-甲酰輔酶A消旋酶具有最高的陽性率和敏感度，胸腺素β15濃度隨著病情的分級升高或骨轉移進程而增高，能夠一定程度上體現出患者病情程度。2種蛋白可結合應用于臨床前列腺早期癌性診斷。

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