早孕期孕婦外周血的胎兒游離DNA檢測分析

郭 輝

(鄭州大學第三附屬醫院(河南省婦幼保健院) 鄭州 450000)

產前篩查是檢查母嬰雙方健康的一種方法，能夠對胎兒在母體時進行缺陷預測，結合產前診斷，盡可能的減少存在先天缺陷嬰兒的出生，為更多的家庭帶來長久的幸福。傳統的產前篩查對孕婦及胎兒均具有一定的創傷，還存在導致流產的可能[1]。近幾年，產前檢查流行的新方法為：從孕婦的血液中提取胎兒的DNA，從而檢測胎兒在母體中的情況[2]。本研究采用孕婦外周血中的胎兒游離DNA進行檢測分析，現做如下報告。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月～2017年3月在我院進行產前篩查高危的100例孕婦，9～13周孕齡的50例孕婦定為早孕組，15～20周孕齡的50例孕婦定為中孕組。早孕組中初產婦24例，經產婦26例，平均年齡(27.3±2.2)歲，平均孕周(7.5±1.6)周；中孕組中初產婦25例，經產婦25例，平均年齡(27.3±2.3)歲，平均孕周(15.5±1.7)周。對兩組孕婦的外周血中游離胎兒的DNA進行檢測。所有孕婦無其它合并癥，并根據我國倫理學標準，患者及家屬均知情并同意。對兩組患者的年齡、孕周等一般資料進行比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)，兩組患者可以進行比較。

1.2 方法

1.2.1采集標本

采集孕婦外周血10mL于Cell-FreeDNA BCTTM采血管中，用來提取游離DNA。在4℃溫度條件下離心10min，離心后將上層的血清分裝到多個離心管(1.5mL)中；重復上一步驟，在4℃溫度條件下依舊經過10min用離心方式清除殘余細胞，分離后的上清液存入新的離心管中。保存于-80℃溫度的冰箱中[3]，借助干冰運送至貝瑞和康檢測中心進行檢測。

1.2.2檢測方法

對采集的孕婦外周血采用美國Illumina公司測序儀進行大規模平行測序法檢測。通過大規模核酸比對軟件對比結果，對DNA片段的染色體的位置進行確定，計算出每一個染色體來源的DNA序列數量，借助正態分布模型，比較妊娠正常二倍體胎兒的孕婦群體以及二倍體胎兒的置信區間和檢測閾值，對受檢樣本是否懷有染色體的非整倍體胎兒得出結論。整個實驗過程均在貝瑞和康檢測中心完成，數據可靠、詳細、有意義。

1.2.3隨訪

對高風險性的孕婦進行隨訪，主要方式有電話隨訪[4]和住院生產病歷兩種，對于高風險孕婦建議在妊娠中期行羊膜腔穿刺羊水細胞染色體核型檢測確認[5]，存在異常的孕婦建議終止妊娠。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 孕婦外周血胎兒游離DNA檢測

表1 孕婦外周血胎兒游離DNA檢測高風險與羊水穿刺結果對比

組別年齡孕周游離DNA檢測羊水穿刺是否一致結果早孕組33921?三體綜合征21?三體綜合征是引產中孕組351718?三體綜合征18?三體綜合征是引產312021?三體綜合征(嵌合)21?三體綜合征(嵌合)是引產

在早孕組50例孕婦外周血游離胎兒DNA檢測結果顯示，有1例染色體數目異常檢測為21-三體綜合征，與羊水染色體核型檢測分析結果完全相同；中孕組50例游離胎兒 DNA檢測結果顯示，1例孕婦染色體數目表現異常，1例染色體結構異常，均與羊水染色體核型檢測分析結果相同，見表1。

2.2 孕婦外周血中的SRY濃度

對孕婦外周血中的SRY濃度進行測量，結果顯示中孕組濃度(149.25±59.17)copies/mL遠高于早孕組的(26.42±35.31)copies/mL，結果顯示t=14.3604，P=0.0025，數據差異存在統計學意義，見表2。

表2 早孕期母體血漿中胎兒基因濃度(copies/mL)

組別病例數實測范圍均值早孕組5014．3～73．526．42±35．31中孕組5043．6～326．8149．25±59．17t值14．3604P值0．0025

3 討論

孕婦外周血胎兒游離DNA檢測可以安全、準確、快速的進行胎兒染色體疾病檢測，能夠直接針對孕婦外周血液中游離的胎兒DNA進行測序和分析[6]。目前臨床上常常用來檢測21-三體綜合征(唐氏綜合征)、18-三體綜合征(愛德華氏綜合征)、13-三體綜合癥(帕陶氏綜合征)的危險率。胎兒游離DNA在母體血漿中的有3種來源：(1)母體血漿中的胎兒有核細胞；(2)胎盤滋養細胞；(3)凋亡的胎兒組織細胞[7]。母體血漿中胎兒游離DNA濃度較胎兒有核細胞濃度高，且在懷孕5周時就可被檢測出來，并隨孕周數的增加，濃度也呈升高的趨勢[8]。相比于胎兒有核細胞，產后的胎兒游離DNA能夠更快速度的清除，半衰期平均只有16.3min。在母體血漿中，較多的胎兒游離DNA分子長度短于母體的DNA，DNA長度大的更易于檢測，檢測效果也相對更好[9]。

以上眾多的生物學特性使得胎兒的游離DNA成為臨床無創產前診斷的新趨勢。但目前該技術尚未完全成熟，存在某些較難克服的問題：對于本身存在染色體數目異常的孕婦和懷有兩個胚胎的孕婦并不適用；而且對于血漿中胎兒游離DNA含量低于10%的孕婦，敏感性和特異性較差，常檢測不出來。

綜上所述，盡管孕婦外周血胎兒游離DNA檢測存在一些不足，胎兒游離DNA依然是產前篩查的重點研究方向，研究表明，在染色體非整倍體的診斷中，該技術的準確度極高，符合臨床報道得出的結論。故孕婦外周血胎兒游離DNA對于早孕期染色體非整倍體具有準確的、高精度的檢測率，能夠作為產前篩查起到檢測胎兒疾病的方法，值得臨床推廣使用。

1 歐俚倩. 3470例孕中期產前篩查結果初步分析.河南醫學研究,2017,26(7):1201～1202.

2 時偉麗,張卉,吳東,等.孕婦外周血胎兒游離DNA在產前篩查胎兒染色體非整倍體疾病中的價值.中華實用診斷與治療雜志,2017,31(9):859～861.

3 劉俊濤.無創產前檢測國際指南與中國規范.中國實用婦科與產科雜志,2017,33(6):564～567.

4 王敏,張聞,梅瑾.全面二孩政策對21-三體綜合征的產前診斷影響分析.中國優生與遺傳雜志,2017,25(4):74～76.

5 林洋洋,徐婉芳,劉彥慧,等.大規模平行測序技術在產前無創檢測胎兒染色體異常中的臨床應用.中國優生與遺傳雜志,2016,24(1):52～54.

6 盧守蓮,黃歡,王玨,等.孕婦外周血游離DNA深度測序在胎兒染色體非整倍體無創檢測中的應用研究. 南京醫科大學學報(自然科學版),2014,34(4):499～503.

7 徐宏燕,劉凱波.北京地區6家產前診斷中心孕婦外周血胎兒游離DNA篩查情況分析.中國優生與遺傳雜志,2017,25(9):72～73;109.

8 劉喜平. 優生教育與產前篩查的應用價值分析.河南醫學研究,2016,25(3):499.

9 陸海燕,鄭建麗,楊芳芳,等.孕婦外周血胎兒游離DNA檢測在無創性產前診斷中的應用.中國優生與遺傳雜志,2014,22(10):78～79;8.