小白菊注射液對(duì)大鼠的亞慢性毒性試驗(yàn)研究

高晶晶，陳成勛，郭永軍，朱國(guó)霞，李 源，董惠峰，王立紅，張鳳洪，劉鼎闊,4*

(1. 天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院 天津300450；2. 天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院 天津300384；3. 天津市飼用微生物制劑企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鼎正動(dòng)物藥業(yè)(天津)有限公司 天津300383；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 北京100094)

小白菊注射液是以中藥材小白菊經(jīng)提取加工制成的注射液，具有清熱解毒消炎的作用。主要成分為小白菊內(nèi)酯，小白菊內(nèi)酯是小白菊花蕾中的提取物，具有抗炎、抗腫瘤、止痛等功效[1]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于小白菊內(nèi)酯的研究，主要集中在其對(duì)于乳腺癌、膽管癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、黑色素瘤和神經(jīng)元等疾病的抗腫瘤作用[2]，對(duì)于小白菊內(nèi)酯藥物毒性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本試驗(yàn)旨在考察小白菊注射液長(zhǎng)期大劑量用藥后可能出現(xiàn)的癥狀和嚴(yán)重程度，毒副反應(yīng)的靶器官及其恢復(fù)和發(fā)展情況，以便為臨床較長(zhǎng)期大劑量應(yīng)用提供安全性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物

小白菊注射液藥物，批號(hào)：20170601，由鼎正動(dòng)物藥業(yè)(天津)有限公司提供。規(guī)格 10,mL/支(每毫升含小白菊提取物以小白菊內(nèi)酯計(jì)為20.0,mg)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4周齡清潔級(jí)SD大鼠80只，雌雄各半，體重在130～150,g之間，由天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為：SC2017-0325。

1.3 給藥劑量的選擇及分組

試驗(yàn)設(shè) 3個(gè)給藥劑量組，腹腔注射給藥。本試驗(yàn)高劑量組大鼠給藥劑量為1.5,mL/100,g體重，腹腔注射。并按等比系數(shù) 1：2，依次設(shè)定中劑量組0.75,mL/100,g體重，低劑量組按 0.325,mL/100,g體重，并設(shè)一個(gè)生理鹽水對(duì)照組，0.75,mL/100,g體重，均腹腔注射。每組動(dòng)物20只，雌雄各半。試驗(yàn)開始時(shí)動(dòng)物體重的差異應(yīng)不超過(guò)平均體重的±20%,。每天腹腔注射給藥一次，連續(xù)給藥35,d(即共5周)。

1.4 試驗(yàn)期間臨床觀察

每天觀察大鼠的健康狀況、采食、飲水、體重等變化。分別于第 1、2、3、4、5周稱量體重，給藥結(jié)束后計(jì)算平均攝食量和飼料利用率(動(dòng)物每食入 100,g飼料所增長(zhǎng)的體重克數(shù))。將給藥劑量組與對(duì)照組進(jìn)行比較和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，及時(shí)記錄和分析大鼠的中毒癥狀及出現(xiàn)各癥狀的先后次序、時(shí)間。

1.5 血液學(xué)和血液生化檢測(cè)

于第4周周末，稱重并采血進(jìn)行血液學(xué)和血液生化指標(biāo)的檢測(cè)。

血液學(xué)檢測(cè)包括：血紅蛋白(Hg)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(Ec)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(Lc)、嗜中性(NL)、嗜酸性(AL)、嗜堿性(BL)、淋巴(LM)、單核(ML)。

血液生化檢測(cè)包括：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)換酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。

1.6 病理檢查

1.6.1 大體剖檢

給藥結(jié)束后，各組取 10只大鼠(雌雄各半)進(jìn)行剖檢(結(jié)合采血進(jìn)行)。做好記錄，并將重要器官和組織固定保存。

1.6.2 臟器稱重

剖檢試驗(yàn)大鼠的同時(shí)，稱取大鼠體重及各主要臟器(包括心、肝、脾、胃、腸、肺、腎、睪丸及卵巢)重量，做好記錄。計(jì)算各臟器相對(duì)重量(臟器重/體重)，即臟器系數(shù)。

1.6.3 組織病理學(xué)檢查

對(duì)高劑量組及對(duì)照組大鼠的主要臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)病變后再對(duì)較低劑量組大鼠的相應(yīng)器官及組織進(jìn)行檢查。組織病理學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目包括：脾、肺、肝、腎、胃、腸、睪丸(♂)及子宮(♀)。

1.7 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 臨床表現(xiàn)

各組大鼠腹腔注射給藥期間各組均無(wú)死亡，臨床表現(xiàn)正常。給藥期間，各劑量組大鼠體重增重、進(jìn)食情況及臟器系數(shù)與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(P＞0.05)(見(jiàn)表 1、表 2和表 3)。母鼠的體重、耗料及飼料利用率較公鼠少，可解釋為性別差異所造成。

表1 小白菊注射液對(duì)大鼠體重增重的影響(g)Tab.1 The effects of Parthenolide Injection on weight gain of rats

表2 小白菊注射液對(duì)大鼠進(jìn)食情況的影響Tab.2 The effects of Parthenolide Injection on food intake of rats

2.2 血液學(xué)及血液生化參數(shù)

給藥結(jié)束后，各組大鼠進(jìn)行血液學(xué)和血液生化參數(shù)測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)表 4和表 5。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與對(duì)照組相比小白菊注射液各劑量組的血液學(xué)和血液生化參數(shù)之間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 小白菊注射液對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響(%)Tab.3 The effects of Parthenolide Injection on organ coefficient of rats

表4 小白菊注射液給藥結(jié)束后大鼠血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)Tab.4 The effects of Parthenolide Injection on hematology of rats

表5 小白菊注射液給藥結(jié)束后的大鼠血液生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)Tab.5 The effects of Parthenolide Injection on blood biochemistry of rats

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)《新獸藥一般毒性試驗(yàn)技術(shù)要求》[3]進(jìn)行了小白菊注射液 35,d亞慢性毒性試驗(yàn)。本試驗(yàn)中，小白菊注射液連續(xù)注射35,d后，各劑量組的大鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好，無(wú)一死亡，大鼠增重、攝食、血常規(guī)及血液生化指標(biāo)與對(duì)照組相比均未發(fā)生顯著性變化(P＞0.05)，且均在正常范圍之內(nèi)。該藥物注射35,d亞慢性毒性試驗(yàn)對(duì)大鼠各項(xiàng)觀察指標(biāo)未產(chǎn)生明顯影響，對(duì)大鼠不顯示亞慢性毒性，35,d重復(fù)給藥亦無(wú)毒性反應(yīng)。因此，綜上所述小白菊注射液對(duì)靶動(dòng)物的臨床安全性在可接受范圍內(nèi)。

小白菊內(nèi)酯可以通過(guò)其生物活性位點(diǎn) ɑ-甲基-γ-內(nèi)酯環(huán)這一特殊結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞中的多種功能性蛋白產(chǎn)生特異性結(jié)合，從而對(duì)信號(hào)通路中下游的蛋白表達(dá)進(jìn)行調(diào)控[4]。有研究表明，小白菊內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用是由于其對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB、STATs、JNK 的表達(dá)的抑制，誘發(fā) ROS反應(yīng)[5]。此外，小白菊內(nèi)酯還具有潛在的抗炎、抗氧化等生物活性，它可通過(guò)影響COX-2、PGE2和iNOS的表達(dá)，起到抗炎作用[6]。

[1]韓琨景，丁楊，楊萬(wàn)山. 小白菊提取物的藥理作用[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2012，18(11)：1735-1737.

[2]徐惠君，佟仲生，賈勇圣，等. 小白菊內(nèi)酯抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中成藥，2013，35(9)：1985-1988.

[3]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部. 新獸藥一般毒性試驗(yàn)技術(shù)要求[S]. 1991.

[4]Kim I H，Kim S W，Kim S H，et al. Parthenolide induced apoptosis of hepatic stellate cells an anti-fibrotic effects in an in vivo rat model [J]. Experim Molec Med，2012，44(7)：448.

[5]劉玉輝，歐瑜. 小白菊內(nèi)酯結(jié)構(gòu)及藥理特性的研究進(jìn)展[J]. 藥物生物技術(shù)，2013(6)：586-589.

[6]張輝，陶建峰，王愛(ài)軍，等. 小白菊內(nèi)酯對(duì)帕金森病MPTP模型小鼠抗炎作用的研究[J]. 中風(fēng)與神經(jīng)疾病，2015，32(2)：158-160.