膝痹膏摩法對膝骨性關節炎兔血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平的影響

擺 雪，劉俊昌,，王新軍,*，孫 蕓，張洪平,，馬鑫文，辛春光

（1.新疆維吾爾自治區中醫醫院，烏魯木齊 830000；2.新疆醫科大學，烏魯木齊 830011）

1.4 指標檢測及方法

1.4.1 步態觀察 采用David Coderre法步態分級評價[10]：Ⅱ級：行走時間＜3 min，中度跛行；I級：行走時間3～5 min，輕微跛行； 0級：行走時間＞5 min，正常行走。

1.4.2 IL-6、IL-1β和TNF-α檢測 給藥干預8周，末次給藥的第二天取樣，經耳緣靜脈取血4 mL，3 000 r/min，離心10 min后，取上清液，用無菌EP管分裝好后置于- 20 ℃冰箱保存，待檢，嚴格按試劑盒說明書采用ELISA法測試血清中IL-6、IL-1β和TNF-α 含量。

1.5 統計學分析 采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析，計量數據采用均數±標準差（±s）表示，各組間比較采用ANOVA，各組間兩兩比較采用LSD-t。

2 結果

2.1 一般情況 正常組：兔膝關節內外側間隙較明顯，關節面光滑且平整，關節軟骨色澤透明；模型組：兔膝關節內側間隙明顯變窄，關節面凹凸不平，邊緣可見增生肥厚的軟骨組織和部分剝脫凹陷，滑膜與關節軟骨有少許黏連；干預組：兔膝關節內外側間隙較模型組明顯，關節軟骨大體觀察呈淡藍透明白色，關節表面平整光滑，軟骨與滑膜無黏連，滑膜表面光滑。

2.2 IL-6、IL-1β和TNF-α檢測結果 運用單因素方差分析（ANOVA）統計各組白兔實驗后血清中IL-6、IL-1β 和 TNF-α濃度。

各組IL-6濃度平均數值為模型組＞膝痹膏低濃度組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞正常組＞膝痹膏中濃度組，通過方差分析，F =12.835，P=0.000。用LSD-t進行兩兩比較分析，得出正常組與模型組比較，P =0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P=0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組差異皆有統計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-6濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖1）。

圖1 各組血清IL-6檢測結果（μg/L）

各組IL-1β濃度平均數值為模型組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞膝痹膏低濃度組＞正常組＞膝痹膏中濃度組，通過方差分析，F=14.201，P=0.000，P＜0.05。用LSD-t進行兩兩比較分析,得出正常組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P =0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組的差異皆有統計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-1β濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖2）。

圖2 各組血清IL-1β檢測結果（μg/L）

各組TNF-α濃度平均數值為模型組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞膝痹膏低濃度組＞膝痹膏中濃度組＞正常組，統計學上通過方差分析，P＜0.05。用LSD-t進行兩兩比較分析,得出正常組與模型組比較，P =0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P=0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組的差異皆有統計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-1β濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖3）。

圖3 各組血清TNF-α檢測結果（μg/L）

說明膝痹膏高濃度、中濃度、低濃度和手法組都能降低膝痹兔血清中的IL-6、IL-1β和TNF-α濃度,且膝痹膏中濃度組IL-6、IL-1β和TNF-α濃度含量明顯低于模型組。

3 討論

膝骨性關節炎屬于祖國醫學中的“膝痹”范疇。祖國醫學認為，本病的發生多由于肝腎不足，精血虧損，風寒濕邪侵入骨骼，以致瘀滯經絡，運行失暢，不通則痛；現代醫學認為：本病的病理表現主要是關節軟骨發生退行性改變，骨質增生、軟骨基質降解、關節軟骨受損是其病理演變的關鍵[11]。大量研究發現，膝骨性關節炎的病變程度與IL-6、IL-1β和TNF-α的含量有關，炎性細胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α是骨性關節炎發病過程中的重要介質，其中分解代謝因子IL-1β和TNF-α能夠促進細胞外基質的降解，也能抑制軟骨細胞內蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成[12]；IL-6是單核吞噬細胞等在IL-1、TNF-α等誘導下產生的一種細胞因子，IL-6作為炎癥介質又可以增強TNF-α在關節疾病中的作用[13]。TNF-α能夠促使滑膜成纖維樣細胞增殖，使得滑膜組織纖維樣變，并且增加滑液中細胞因子[14]。IL-1是最經典的炎癥調節的始動因素，其IL-1β能促進軟骨細胞凋亡，降解軟骨細胞基質，直接干預滑膜和骨的代謝發生病變[15]。IL-1β對膝骨性關節炎的主要作用表現為：促進I、Ⅲ型膠原蛋白的合成；抑制透明軟骨特征性Ⅱ、Ⅸ型膠原蛋白的合成；還能促進軟骨細胞分泌金屬蛋白酶，從而提高蛋白分子酶類的活性，進而對關節軟骨進行降解[16-18]。大量研究證實：骨性關節炎的破壞可以被IL-1β、IL-6、TNF-α的選擇性抗體、細胞因子受體拮抗蛋白、可溶性或轉移性細胞因子受體的分子所修復，因此說明骨性關節炎的破壞與IL-1β、IL-6、TNF-α 的作用密切相關[19-20]。本實驗用ELISA實驗檢測模型組中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量，均較高，說明IL-6、IL-1β和TNF-α在骨性關節炎中起主要調控作用，能夠介導骨性關節炎炎癥的發生。

膝痹膏摩法為新疆醫科大學附屬中醫醫院推拿科治療膝關節骨性關節炎的經驗方法，該方法是方藥與推拿手法的完美結合，臨床研究中發現：該方法能夠緩解膝關節疼痛和改善功能活動度，在臨床上治療膝骨性關節炎療效顯著[21]。課題組在前期的實驗研究中亦發現，膝痹膏摩可以減輕膝骨性關節炎大鼠關節軟骨基質的破壞及關節病損[22]。

本課題研究結果表明：膝痹膏中濃度配合推拿手法即“膝痹膏摩法”最有效地降低IL-6、IL-1β和TNF-α濃度；膝痹膏高濃度可能因為藥物含量太高，凡士林羊毛脂的透皮吸收受到抑制。因此得出膝痹膏摩法能夠抑制膝骨性關節炎軟骨基質降解和關節軟骨的破壞，從而延緩關節軟骨的退變，其中膝痹膏中濃度摩法在降低血清中IL-6、IL-1β和TNF-α療效顯著。

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