桔梗飲片的質量控制研究

王船英，劉 圣，王成永

(1.安徽中醫藥大學，安徽合肥 230038；2.安徽醫學高等專科學校，安徽合肥 230601；3.安徽省立醫院，安徽合肥 230001)

桔梗(Platycodon grandiflorus)是桔梗科草本植物，可用于治療痰多、咽痛、抗炎、鎮靜等。桔梗中的化學成分很多，含有大量皂苷類、黃酮類、酚類、多糖類化合物等。其中桔梗皂苷D是主要皂苷，是其主要的有效成分，具有顯著的鎮咳祛痰、抗腫瘤、抗氧化及免疫增強作用[1]。因此，桔梗皂苷在食品、醫藥和化工領域都有著廣泛的應用。但市場上銷售的桔梗飲片質量參差不齊，本實驗通過對15批桔梗飲片的質量進行定性定量分析并作出總結，為市場和企業飲片質量標準的制定提供參考和依據。

1 實驗部分

1.1 藥材、儀器與試劑

1.1.1 藥材

桔梗飲片(安徽源和堂藥業股份有限公司提供)，桔梗藥材來源安徽亳州(1-3)、太和(4-6)、渦陽(7-9)、吉林(10-12)、撫松(13-15)。

1.1.2 儀器

硅膠G薄層板、稱量瓶、打粉機、馬弗爐、恒溫水浴鍋、超聲清洗儀(UP-2200H型)、萬分之一電子天平(上海越平科學儀器有限公司)、電熱恒溫鼓風干燥箱(PHG-9140A)、Waters1525 Binary HPLC泵、Waters2489紫外檢測器、AT-330柱溫箱。

1.1.3 試劑

桔梗皂苷D對照品(批號：11851-2016-07，中國食品藥品檢定研究院，純度94.0%)、桔梗對照藥材(批號：121028-201210，中國食品藥品檢定研究院)、娃哈哈純凈水、乙醇、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、甲醇、乙腈、乙醚、濃硫酸。以上試劑，甲醇、乙腈為色譜純級別，其余為分析純。

2 水分、灰分及浸出物的測定

2.1 測定方法

水分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中的水分測定法第二法(烘干法)，總灰分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中灰分測定法，浸出物測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中浸出物測定法(熱浸法)。

2.2 結果分析

15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結果見表1所示。

表1 15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結果

3 鑒別

15批飲片，經安徽中醫藥大學藥學院王成永教授和安徽省立醫院藥劑科主任藥師劉圣的鑒別，確認為桔?？浦参锝酃５母稍锴衅?/p>

按中國藥典第一部桔梗項下薄層色譜鑒別的處理方法制得15批飲片的供試品溶液。另取桔梗對照藥材一份，采用同樣的方法制成對照藥材溶液。用毛細管吸取上述溶液，分別點于相同規格的硅膠G薄層板上，將配置好的石油醚-乙酸乙酯(7∶4)的展開劑倒入展開槽內進行展開，晾干后用10%硫酸乙醇溶液噴灑后，晾干[2]。將薄層板放置于烘箱中105℃下加熱至斑點顯色清晰，結果顯示：供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上有相同顏色的斑點(圖1)。

圖1 DZYC為桔梗對照藥材；1-15為不同批次的桔梗飲片

4 桔梗皂苷D含量的測定

4.1 色譜條件

高效液相色譜儀(Waters1525二元高壓泵，Waters2489紫外檢測器),大連依利特C18色譜柱，流動相為乙腈-水(28∶72)，檢測波長210 nm,流速1mL/min,柱溫30℃。

4.2 對照品的制備

精密稱取桔梗皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含桔梗皂苷D 1mg的溶液(1.0026 mg/mL)即得，備用。

4.3 供試品的制備

按藥典方法，制取供試品。取本品粉末(過二號篩)約2.0 g，精密加入甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻、濾過。精密量取續濾液25 mL，水浴蒸干，殘渣加水20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液。用氨試液50 mL洗滌，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇3 mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加在以氯仿-甲醇(9∶1)裝好的硅膠柱(內徑2 cm，10 g)上，以氯仿-甲醇(9∶1)50 mL洗脫，棄去洗脫液，再以氯仿-甲醇-水(60∶20∶3)100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用氯仿-甲醇-水(60∶29∶6)100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，搖勻，即得[3]。15批供試品溶液均用此法制得。

4.4 線性關系考察

分別精密吸取4.2項對照品溶液稀釋成0.1、0.25、0.5、0.75 mg/mL不同濃度的溶液，分別取0.1、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL溶液20 uL注入液相色譜儀，得回歸方程Y=2×106X+15618，R2=0.9992。結果表明，桔梗皂苷D在2～20 ug之間，其濃度與峰面積呈良好的線性關系(圖2)。

圖2 不同濃度的樣品溶液的線性關系

4.5 精密度實驗

精密吸取4.4項制取的0.1 mg/mL對照品溶液連續進樣6次，每次20 uL。得到桔梗皂苷D的峰面積，其RSD值為2.4%，表明儀器精密度良好。

4.6 重復性實驗

精密吸取4.3項制取的同一供試品溶液6次，每次20 uL。其桔梗皂苷D的平均含量為1.0466 mg/g，其RSD值為1.6%。表明該方法的重復性較好。

4.7 穩定性實驗

精密量取4.3項同一供試品溶液20 uL，在4.1色譜條件下，在放置0、2、4、10、24 h測定桔梗皂苷D峰面積，并計算RSD值為2.0%。說明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

4.8 加樣回收率實驗

精密稱定同一批烘干至恒重的飲片6份，每份約1 g，再精確加入1mg/mL桔梗皂苷D對照品溶液1mL，按4.3制成供試品溶液，記錄峰面積，計算回收率為101.2%,RSD值為2.1%。說明本實驗回收率良好。

4.9 供試品含量測定

分別取4.3項制得的15批供試品溶液和對照品溶液各進樣20 uL,在同一色譜條件下，測定出供試品桔梗皂苷D含量在0.10%～0.15%之間，均不低于國家藥典規定的0.1%的標準。桔梗皂苷D對照品和桔梗飲片的HPLC圖譜見圖3和圖4。

圖3 桔梗皂苷D對照品HPLC圖譜

圖4 桔梗飲片HPLC圖譜

5 結語

根據實驗結果，15批桔梗飲片的水分、灰分及浸出物和桔梗皂苷D含量均達到中國藥典2015版標準，經檢查均達到合格標準。在進行薄層色譜鑒別時，在15版藥典基礎上，通過改變展開劑等方法，獲得了更清晰、更持久的薄層色譜圖譜，取得了更佳的實驗效果。

[參考文獻]

[1]李盈,王舉濤,桂雙英,等.桔梗的化學成分及藥理作用研究進展[J].食品與藥品,2016(1):72-75.

[2]鐘永康.桔梗、連翹、五倍子薄層色譜鑒別方法的研究與改進[J].中國現代藥物應用,2007(3):13-14.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京:化工出版社,2015:172.