轉錄因子DLX4與EMT相關蛋白在乳腺癌中表達與意義研究

柳蘇玲

【中圖分類號】R737 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）02-0-01

對于女性群體來說，乳腺癌是非常常見的一種危害極大的惡性腫瘤，乳腺癌居女性惡性腫瘤發病中發病率非常高的位置，導致女性身心健康受到嚴重的影響，甚至嚴重的危及到患者的生命。癌基因是轉錄因子DLX4最明顯的特征，上皮細胞間質轉化EMT相關蛋白主要包括兩個，第一個是E-cadherin，第二個是vimentin，其主要與以下兩個因素相關：乳腺癌侵襲和乳腺癌轉移。本次研究收集乳腺癌以及對應癌旁組織標本各200件作為分析主體，分析在乳腺癌組織中轉錄因子 DLX4 與 EMT 相關蛋白的表達以及意義。詳細如下所示：

1 資料選擇以及方法

1.1 資料選擇 選取2015年1月到2017年12月期間，選擇各200例乳腺浸潤性導管癌標本（100例乳腺癌以及100例癌旁組織標本）作為分析主體，分析其病理分級情況得到：有68例Ⅰ級例數；有92例Ⅱ級例數；有40例Ⅲ級例數。

1.2 納入標準 都需要進行病理學專家確診，確診之后結果為乳腺浸潤性導管癌或者是癌旁組織；均沒有接受過經放治療以及化療治療；

存在完整的患者隨訪資料以及數據。

1.3 試劑的準備 自北京中杉金橋公司購SP法進行免疫組化，嚴格按試劑盒說明書完成具體操作步驟[1]。在Santa Cruz公司購取以下試劑：鼠抗單克隆抗體β-actin試劑、羊抗單克隆抗體DLX4試劑。在北京中杉金橋公司購取以下試劑：兔抗單克隆抗體vimentin試劑、鼠抗單克隆抗體E-cadherin試劑。在ATCC細胞庫購取以下細胞：乳腺癌細胞系MDA-MD-231。使用SP法進行免疫組化的情況：完成脫蠟水化以及抗原修復，完成一抗的滴加，保持溫度為4℃，儲存過夜，進行有效的PBS洗滌操作，進而完成二抗的滴加，進行PBS洗滌，使用DAB完成顯色工作，在完成蘇木精復染之后則使用雙蒸水進行洗滌，之后進行進一步的脫水工作、透明工作以及封固工作。

1.4 方法

1.4.1 乳腺癌細胞系 MDA-MD-231 細胞的培養 在完成細胞收集之后，完成裂解液的添加，實現蛋白的添加，添加樣緩沖液，對其混合混勻，之后煮沸，轉性處理，在室溫進行靜置，在完全冷卻之后，需要將其置放于零下20℃的環境下進行存備使用。之后分離使用10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，實現硝酸纖維素（NC）膜的轉移，之后使用5%脫脂牛奶進行一個小時的封閉處理，并且分別加入以下試劑：1∶2 000比例的鼠抗β-actin單克隆抗體試劑；1∶1 000比例的兔抗vimentin試劑；1∶1 000比例的鼠抗E-cadherin試劑；1∶500比例的羊抗DLX4試劑。之后將其處于4℃的環境下，需過夜，在第二天，完成三次的洗膜處理，添加1∶2 000比例的二抗HRP，將其處于37℃的環境下完成兩個小時的反應，之后完成三次的洗膜處理，之后進行NBT/BCIP顯色處理，對其進行水洗，完成反應的終止。使用圖像處理儀完成掃描工作，半定量分析使用的是Image J軟件。

1.4.2 免疫組化 使用免疫組化SP法染色。vimentin于胞質表達。DLX4陽性信號主要指的是棕黃色信號或者是棕褐色信號，于細胞膜表達。E-cadherin陽性信號主要指的是棕黃色信號，于細胞膜表達[2]。

2 結果

2.1 DLX4、E-cadherin以及vimentin在乳腺癌和癌旁組織中的表達

分析得到：乳腺癌組織的DLX4的表達、vimentin的表達的陽性率均高于癌旁組織；同時，E-cadherin的表達低于癌旁組織的陽性率表達。

2.2 DLX4、E-cadherin的表達、vimen-tin 在乳腺癌細胞系中的表達

檢測乳腺癌細胞選擇使用Western blot檢測方法，在完成檢測之后得到以下的結果：

選擇的是乳腺癌細胞系，分析DLX4在MDA-MD-231細胞的表達情況，DLX4在該細胞的中為高表達，而在MDA-MD-231細胞中E-cadherin得到的結果是低表達，而vimentin則呈現一個高表達的結果。

3 結論

EMT具有非常顯著的特征，那就是E-cadherin（上皮性標志物）表達下調，同時還存在vimentin（充質蛋白）Fibronectin（充質蛋白）表達升高的情況。然而，EMT具有的最為主要的一個特征就是降低的E-cadherin表達結果，并且還存在vimentin表達結果升高的情況[3]。

在完成本次研究之后發現，在乳腺癌組織中，DLX4的結果是高表達的情況，如果是在高侵襲性的癌細胞系中則結果為高表達，如果是在低侵襲性癌細胞系中結果則是低表達。綜上所述，轉錄因子DLX4跟E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌中的表達結果為兩者之間負相關，同時DLX4跟vimentin表達之間則結果為正相關，所以，上述提到的DLX4、E-cadherin、vimentin之間或存在一種調控的關系，這是促使腺癌實現局部侵襲的主要原因，同時也是導致出現遠處轉移的主要原因。

參考文獻

王魯英，王永紅，葉瓊，王秋穎.乳腺癌患者中轉錄因子特化蛋白1和血管內皮生長因子的表達及臨床意義[J].實用癌癥雜志，2017，32（10）：1580-1583.