豬瘟耐熱保護劑活疫苗生產工藝研究

鄒立宏 何平有，2 翟含流

1.瑞普（保定）生物藥業有限公司

2.天津瑞普生物技術股份有限公司

3.河北省保定市蓮池區動物衛生監督所

一、實驗材料

1.種毒。豬瘟兔化弱毒株購自中國獸醫藥品監察所。

2.毒液。按2000年版《獸用生物制品規程》（以下簡稱《規程》）載“豬瘟活疫苗制造及檢驗規程（I）”方法制備毒液，病毒效價不低于105RID/ml。

3.保護劑。耐熱保護劑以甘氨酸、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮為基礎，優選制備。

4.對照疫苗。按《規程》生產常規的豬瘟活疫苗，批號S2017。

5.實驗動物。效檢用兔為健康大耳白兔，體重1.5～2.5 kg；試驗豬，3月齡，體重約3.5 kg，選購自河北順平某村，經檢驗無豬瘟中和抗體。

二、試驗方法

1.耐熱苗制備。將合格的豬瘟病毒液與耐熱保護劑按一定比例，混合，定量分裝后冷凍真空干燥，制備3批疫苗，批號分別為201701、201702和201703。

2.疫苗加速老化試驗和保存期試驗。將3批豬瘟耐熱保護劑活疫苗和對照疫苗取樣后，分別進行以下試驗項目。

3.疫苗加速老化試驗。將疫苗置于37℃溫室中放置10 d，分別于放置后第2 d和第10 d，按照《規程》用兔進行效力檢驗。

4.疫苗保存期試驗。將疫苗置于2℃～8℃環境中，放置26個月，分別于放置第0天、第12個月、第24個月和第26個月，按照《規程》用兔進行效力檢驗。

5.成品溶解性及其它檢驗項目。將4批豬瘟活疫苗隨機取樣，按照《規程》方法分別進行物理性狀檢驗、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、鑒別檢驗、安全檢驗、剩余水分測定、真空度測定等項目的檢測；并觀察豬用活疫苗稀釋液對其溶解情況。

三、試驗結果

1.疫苗加速老化試驗和保存期試驗結果。結果見表1。從表1可以看出，3批豬瘟耐熱保護劑活疫苗，37℃環境中放置10 d后，疫苗效力均為(++)（++），而在2℃～8℃環境下保存26個月疫苗，疫苗效力也均為 (++)（++），明顯優于相同環境儲存的S2017（對照苗），其效價為（+）（-）。實驗結果表明，3批研制的豬瘟耐熱保護劑活疫苗耐熱性能均良好。

表1 不同保存環境不同時間試驗疫苗效力測定結果

2.成品溶解性試驗及其它檢驗項目檢驗結果。4批疫苗其余各項檢驗項目（物理性狀檢驗、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗、鑒別檢驗、安全檢驗、剩余水分測定、真空度測定）均符合要求。溶解性結果見表2。由表2可以看出，3批豬瘟耐熱保護劑活疫苗溶解性均良好，優于規程疫苗。

表2 3批豬瘟耐熱保護劑活疫苗溶解試驗結果

四、討論

本研究優選的豬瘟活疫苗耐熱保護劑對豬瘟病毒之所以有良好保護效果，筆者認為是通過以下兩個方面實現的，一是凍干過程中保護劑中大分子物質的優先析出，有效阻止了小分子物質的結晶，從而減少了凍干過程中豬瘟病毒活性的損傷；二是耐熱保護劑與病毒的最適配比，有效地阻止了保存過程中外界因素對病毒破壞作用。同時，精選的保護劑配方，溶解性能優良，對提高豬瘟疫苗的臨床使用效果和今后耐熱保護劑的研究均具有重要意義。