不同基因診斷技術在耐藥結核菌檢測中的應用對比

劉 威

（營口市老邊區疾病預防控制中心 微生物檢驗科，遼寧 營口 115005）

結核病是因為受到結核分枝桿菌感染所致的常見的傳染病之一。人類對于結核病的認識可以追溯到50萬年前，雖然該病歷史悠久，但是人類尚沒有完全克服它，至今為止結核病仍居于引起人類死亡的傳染病的第二位。據世界衛生組織統計，世界范圍內活動性肺結核的患者約有2000萬，據該組織統計21世紀10年，世界范圍內新發的肺結核患者超過了500萬，我國是人口大國，同時也是遭受結核分枝桿菌影響的大國，據我國資料顯示我國居民的結核分枝桿菌的感染率超過30%[1]。因結核分枝桿菌常有變異耐藥發生，因此對于耐藥性的結核分枝桿菌的檢測的準確性可以指導臨床用藥，避免了病情的延誤，減輕了患者的經濟負擔，我疾控中心應用不同的基因檢測技術檢測耐藥結核分枝桿菌，旨在找出簡便易行、檢測率高的檢測方法，指導臨床治療和疾病的防控，報道如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料：選取自2015年4月至2016年4月于營口市疾控中心痰涂片結核分枝桿菌陽性的痰標本150例（每人痰樣本為3例，共450例），采用信封法隨機分為試驗組和對照組，試驗組150例，其中男性75例，女性75例，年齡19～70歲，平均（41.9±7.9）歲，對照組150例，其中男性75例，女性75例，年齡19～74歲，平均（41.3±8.6）歲，經統計學分析兩組患者年齡和性別均無統計學差異（P＞0.05），可以進行比較。

1.2 痰標本的收集方法：囑患者均應在每日行口腔清潔連續3 d，每天留取痰樣本3次，取得痰樣本后應將樣本放于4 ℃的環境中暫存，患者痰樣本的實驗室培養標準參照中國防癆協會《結核病診斷實驗室檢驗規程》中的標準進行[2]。

1.3 實驗室藥敏技術：應用BASCO公司的培養基對痰標本進行一般培養，并對結核分枝桿菌應用異煙肼和利福平的藥敏定性和定量檢測，所有的實驗室藥敏培養技術均參照世界衛生組織的IUATLD標準進行。計算并統計耐藥的標本數量。

1.4 傳統基因擴增檢測技術：將患者的痰標本進行必要的去污及相關處理后應用傳統基因擴增技術對痰液標本進行測定和分析[3]。

1.5 線性探針基因檢測：應用GenotypeR MTBDR plus試劑盒，將痰標本經過去污處理后制成混懸液，進過離心、水浴和再次離心后取上清液5 μL加入PCR擴增體系中，經過多次不同的條件擴增后將標本與線性探針進行雜交根據比色條判斷藥物的耐藥性。

1.6 觀察指標：觀察試驗組、對照組和實驗室藥敏培養的耐藥率。

1.7 統計學分析：采用統計學軟件SPSS19.0進行分析，計數資料采用（±s）表示，兩組間率比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

試驗組耐藥率為7.3%，對照組耐壓率為3.3%，實驗室藥敏培養耐藥率8.6%。試驗組和對照組比較有統計學差異（P＜0.05），試驗組和實驗室藥敏培養的耐藥率比較沒有統計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 兩組實驗結果

3 討 論

結核分枝桿菌是一類形態呈桿狀，不易被染色可以抗鹽酸，可以被乙醇脫色的抗酸桿菌，具有較強的抗干燥能力在干燥的痰液內可以頑強生存7個月。不僅如此結核分枝桿菌具有一定的變異性，容易發生耐藥，目前研究認為該耐藥性是因為結核分枝桿菌內本身發生的某些基因突變或者是因為藥物的刺激而發生了基因的突變產生耐藥性[4]。

本文研究了觀察傳統的基因擴增檢測技術和線性探針基因檢測技術對耐藥結核分枝桿菌檢測的準確性，結果表明線性探針基因檢測技術較基因擴增檢測技術對于耐藥的結核分枝桿菌檢測較為敏感與對照組比較均有統計學意義（P＜0.05），線性探針基因檢測技術對耐藥結核分枝桿菌的檢測率優于較傳統的基因擴增檢測技術。

[1]陸偉,周揚,陳誠,等.江蘇省社區人群結核桿菌耐藥狀況及影響因素研究[J].中華疾病控制雜志,2013,17(7):560-563.

[2]梁建琴,李洪敏,高華方,等.應用 PCR-熒光探針法快速檢測耐多藥結核分枝桿菌基因型[J].中華醫院感染學雜志,2013,23(21):5140-5142.

[3]朱麗,霍貴成.環介導等溫擴增法快速檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌[J].食品科學,2011,32(16):213-218.

[4]時金艷,李鐵成,夏榮榮,等.線性探針技術用于快速篩查耐多藥結核病的研究[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(4):330-333.