紫景天對實驗性牙周炎牙周組織病理作用的研究

王曉峰，王 偉，王會俞，張 楚，張?zhí)旆?，何金婷

(吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 1.口腔科；2.神經(jīng)內(nèi)一科,吉林 長春130033)

牙周炎 (CP) 是一種慢性炎癥性疾病,是由齦下微生物和宿主防御之間的穩(wěn)態(tài)破壞引起[1],當牙周組織被破壞時,牙周袋內(nèi)的微生物負荷壓倒系統(tǒng)的主動防御機制[2]。針對此種狀況，目前國內(nèi)外對牙周炎的藥物治療主要是牙周袋內(nèi)用藥，而此類藥物主要以抗生素為主，近幾年研究顯示抗生素的長期使用可加快細菌的進化，出現(xiàn)耐藥菌株，也可破壞人體內(nèi)正常菌群，造成菌群失調(diào)等副作用。因此，我們進行了紫景天總黃酮凝膠對實驗性牙周炎牙周組織病理作用的相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

二甲苯(北京化工廠，批號：110315)；冰醋酸(西隴化工股份有限公司生產(chǎn)，批號：120302)；磨牙機(吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院口腔科提供)；Wistar大鼠，體重180-230 g，雌雄各半(吉林大學實驗動物中心提供)。

1.2 樣品的純度、來源

濃度分別為1.0%、0.5%、0.25%的紫景天總黃酮凝膠；基質(zhì)16%泊洛沙姆407(吉林省中醫(yī)藥科學院制劑室，批號：20120725)以及陽性對照組藥物：復方牙痛酊(貴州同濟堂制藥有限公司，批號：20120102)。

1.3 絲線結(jié)扎加牙齦卟啉菌感染復合法建立大鼠實驗性牙周炎模型

取Wistar大鼠60只，雌雄各半，分籠圈養(yǎng)，隨機取出50只大鼠，用牙齦卟啉單胞菌的鹽水預(yù)處理2小時后的4號無菌絲線若干，雙股在同一位置打結(jié)3次后，再穿過大鼠的第一和第二磨牙之間的間隙，再將絲線環(huán)繞過第一磨牙，于其腭側(cè)間隙結(jié)扎，然后打結(jié)3次，將打好的結(jié)頭埋入牙齦組織下，以便使線結(jié)持續(xù)刺激到牙齦組織。在第3，5，7天將等量牙齦卟啉單胞菌的鹽水注射到大鼠頰腭側(cè)埋有絲線結(jié)頭的齦下，于處理大鼠后的第3周通過國際通用標準和觀察牙齦癥狀評價牙齦指數(shù)并記錄牙齦指數(shù)。第4周隨機取動物2只，通過獲取打結(jié)部位的上頜磨牙及其牙周組織進行病理組織學觀察，以確認實驗組大鼠模型的成立。

1.4 紫景天總黃酮對實驗性牙周炎的治療作用

1) 未處理的10只大鼠為正常對照組(A 組)：對牙齦不做任何處理，其他方面同模型組大鼠。將上述大鼠實驗性牙周炎模型動物隨機的分成4組：模型對照組(B 組)以及陽性對照藥復方牙痛酊組(C組)。根據(jù)紫景天總黃酮給藥的劑量的不同濃度分為實驗D 組(給予1.0%紫景天總黃酮)，實驗E 組(給予0.5%紫景天總黃酮)及實驗 F組(給予0.25%紫景天總黃酮)，D 、E和F組分別牙齦涂擦紫景天總黃酮，每日2次，0.5 ml/次/只，次間隔8 h，連續(xù)涂藥14天。C組牙齦涂擦復方牙痛酊，方法同紫景天藥物實驗組。

2)牙齦指數(shù)(GI)和齦溝出血指數(shù)(SBI)：于給藥后第15天，以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，觀察并記錄藥后牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù)，然后腹主動脈取血，測量血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)、丙二醛含量(MDA)。

3)牙周組織病理學觀察：在實驗開始后的第5周處死各組大鼠進行觀察，首先將獲取的上頜骨標本，經(jīng) PBS(pH=7.2)溶液清洗2遍后，用 10%甲醛固定上頜骨標本24 h，將標本浸泡在70%乙醇溶液中，將組織修正后，通過脫鈣、梯度脫水、石蠟包埋技術(shù)處理組織，然后將牙齒進行平行于牙長軸的近遠中方向切片處理，獲取牙體牙周聯(lián)合切片，厚度約為5 μm。將切片進行蘇木素-伊紅(HE)染色，通過光鏡組織學觀察并記錄組織學變化，分析結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 外部行為觀察和組織病理學檢查

由圖1結(jié)果所見，肉眼觀察：正常對照組動物(如圖A組)牙齦色粉紅，質(zhì)韌，菲薄且緊貼牙面；模型組動物可見牙面上有大量牙石菌斑，且牙齦色暗紅質(zhì)地疏松，探之易出血，牙周袋形成。第4周處死兩只動物，取牙及牙周組織進行病理組織學檢查，確認“牙周炎模型” 復制成功。第5周開始給藥，此時模型組動物組，牙周袋可見進一步加深，內(nèi)有食物殘渣聚集，牙齦組織出血、糜爛、溢膿等癥狀加重；給藥兩周后觀察可見模型對照組(B 組)癥狀加重，紫景天藥物實驗組(D、E、F組)及陽性對照藥復方牙痛酊組(C 組)動物牙齦顏色變淺，出血減少，牙周袋變淺。

正常對照組動物(A組)牙周軟組織細胞大小、形態(tài)及分布正常，鏡下可見大鼠的牙周膜的附著點位于其牙齒的釉牙骨質(zhì)界處，牙槽骨的骨小梁排列致密，且不可見牙槽骨吸收破壞等變化。模型組對照組(B組)牙周組織可見大量炎性細胞；溝內(nèi)上皮出現(xiàn)糜爛潰瘍，上皮部分向根方向增生，牙周膜附著位于釉牙骨質(zhì)界下方，可見深牙周袋形成；牙槽骨內(nèi)發(fā)現(xiàn)骨吸收陷窩，判斷出現(xiàn)破骨細胞性骨吸收，并可見中重度牙周炎的組織病變。陽性對照復方牙痛酊組(C組)大鼠的牙周組織雖然依然有炎性細胞的浸潤，但是其數(shù)量明顯減少。C組病理變化與陽性藥相似；F組大鼠的軟組織中炎性細胞的浸潤可見明顯減輕，牙槽骨吸收狀態(tài)處于靜止期，可見牙槽骨中的破骨細胞有明顯減少，且牙槽骨周圍可見大量的成骨細胞增生，并且有新生纖維結(jié)締組織大量生成，牙周袋的變化顯示變淺或消失，D組炎性病變明顯大于E組，而E組變化明顯大于F組，但是D、E、F組炎性變化明顯小于B組，這些顯示牙周組織正處于修復階段。

圖1 紫景天對實驗性牙周炎牙周組織的組織病理學改變

2.2 對實驗性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)的影響

由圖2、3結(jié)果可見，紫景天總黃酮1.0%和復方牙痛酊均可明顯降低牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù)，明顯減輕牙周炎損傷程度，與模型對照組比較均有顯著差異，對大鼠“實驗性牙周炎”有明顯的治療作用。

2.3 對實驗性牙周炎大鼠血清中SOD、GSH、MDA的影響

由圖4、5結(jié)果可見，模型組血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶比對照組明顯降低，丙二醛含量明顯升高，紫景天總黃酮1.0%、0.5%和復方牙痛酊均可明顯升高大鼠血清中超氧化物歧化酶(P<0.01)、谷胱甘肽過氧化物酶(P<0.05)，降低丙二醛含量。表明紫景天總黃酮及復方牙痛酊均可明顯減輕對大鼠“實驗性牙周炎”的損傷程度，對實驗性牙周炎具有顯著的治療作用。

與治療前比較 *P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

與治療前比較 **P<0.01；***P<0.001。

3 討論

盡管在目前的醫(yī)學和整體健康教育方面有了長足的進步,但是慢性牙周炎仍然是一種廣泛的疾病，失去牙齒是這種特殊疾病最嚴重的并發(fā)癥[3]，該病的特點是由于牙周韌帶和相鄰支撐骨的破壞而失去臨床附著。它普遍存在于成人之中[4]，它的主要病理變化為牙槽骨的病理性吸收。現(xiàn)如今對牙周炎治療的藥物，主要著力于控制或消除炎癥并且進一步促進牙周組織的再生成。臨床上主要應(yīng)用藥物是用于控制炎癥并且阻斷牙槽骨吸收和促進骨再生。目前臨床上牙周炎的藥物治療主要是針對牙菌斑細菌的抗生素的治療方法，此類治療藥物對于治療牙周炎有較好的療效，但是如果長期使用易導致耐藥細菌的增多，從而導致口腔內(nèi)菌群的失調(diào)，某些藥物也可同時引起胃腸道刺激性等毒副作用。因此需研究并且開發(fā)高效低毒的牙周炎治療的藥物以應(yīng)用在臨床治療中。因此我們進行了紫景天對實驗性牙周炎牙周組織的病理作用的研究，以給相關(guān)研究提供相應(yīng)證據(jù)。

通過本研究，我們發(fā)現(xiàn)紫景天總黃酮可以減輕牙周炎的病理性損傷，抑制牙周炎中的牙槽骨吸收。在大鼠實驗性牙周炎的觀察中可見對牙周炎有明顯的預(yù)防和治療作用。本研究可為眾多牙周病患者帶來福音，推動長白山野生藥材資源開發(fā)，本研究成果應(yīng)用前景廣闊，將對提高社會效益和經(jīng)濟效益具有重要的意義。

參考文獻：

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