開窗減壓術對成釉細胞瘤術前術后Ki-67蛋白表達的影響及意義

澈力格爾，夏軼超，李佳樂，王雨萌，王寧寧，孫靜淳，文 靜，韓 冰*

(1.吉林大學口腔醫院 口腔頜面外科，吉林 長春130021；2．吉林省牙發育及頜骨重塑與再生重點實驗室)

成釉細胞瘤(AM)是一種牙源性上皮性腫瘤，約占牙源性腫瘤的60%以上，頭頸部腫瘤的1%左右[1]。大多數腫瘤發生于頜骨內且多發生于下頜磨牙區，常導致頜骨膨大和面部變形[2]。雖屬良性腫瘤但是其局部侵襲性和復發率較高。開窗減壓術是一種保守的治療方法，它可以減少囊腔內的壓力，促進骨骼形成，迅速消除頜面畸形，有利于保存鄰近結構和骨的連續性，術后并發癥少，治療效果好[3]。但目前對于該方法治療成釉細胞瘤的分子生物學機制尚不明確。Ki-67是一種增殖細胞相關抗原[4,5]，高表達于成釉細胞瘤中。本研究旨在探究開窗減壓治療術對成釉細胞瘤中Ki-67表達情況改變的影響及意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

病例取自2013-2017年在吉林大學口腔醫院就診接受開窗減壓術治療的4名成釉細胞瘤患者，其中3名男性1名女性患者，年齡分布在22至44歲，平均年齡31歲。本研究中全部病損發生于下頜骨，無發生于上頜骨的病例。所有患者術后隨訪時間均在12個月以上。所有標本均用10%中性甲醛溶液固定并石蠟包埋，4 μm 連續切片，由2 名病理專家確診，根據2005 年WHO制定的組織學分類標準確診為成釉細胞瘤[6]。所有患者一期均行開窗減壓，并附有術前術后隨訪，曲面斷層和CT影像記錄。另取4名來我院做阻生齒拔除患者正常黏膜和4名接受根治術的成釉細胞瘤患者組織作為對照組。見表1。

表1 開窗減壓術治療的四名患者基本信息

(M：男性，F:女性，m:月)

1.2 方法

1.2.1治療方法 經過吉林大學倫理委員會的批準，治療方案經患者同意簽字，根據患者實際情況判斷選擇在全麻下進行手術。病變區切口，顯露囊性腫物，見腫物成囊性，摘除。切取標本做術中快速冷凍活檢及常規組織病理學檢查。沖洗，止血，放置油紗布包裹碘仿紗條，置于創腔，組織瓣復位，嚴密縫合創口。術后第7天拆除縫線，去除碘仿油紗條，徹底沖洗，放置新碘仿油紗條。出院后教會患者沖洗創口，一周換一次紗條，連續更換3至4次后做塞制器。2至3個月定期復查，拍攝曲面斷層及CT。當術后復查發現患者有囊腔已經無法縮小，或開窗口已經閉塞，需做二期手術。對于對照組4個根治性手術患者，根據病變范圍，縱行向下頜骨下緣方向鋸開，將腫瘤完整摘除，取出重建夾板彎制，與下頜骨體貼合后螺絲固定于下頜骨。

1.2.2免疫組化技術檢測Ki-67的表達 采用免疫組化SP染色法。在染色前，切片置于60 ℃ 烤箱中烤片60 min，脫蠟水化后，置于枸櫞酸緩沖液(0.01 mol/L,pH 6.0 ) 中，進行抗原修復。3%過氧化氫37℃孵育15 min后，一抗(Anti-MKI67 Rabbit Ployclonal Antibody，上海生工公司)，羊抗小鼠IgG二抗(北京中杉金橋公司)，按說明滴加。室溫孵育30 min，DAB 顯色。其余均嚴格遵循試劑盒使用說明操作。應用PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.3 統計學分析

應用Image-Pro Plus 軟件進行各組Ki-67的定量分析，所得的數據采用均數±標準差表示。采用SPSS 22.0軟件行配對t檢驗分析開窗減壓術前術后成釉細胞瘤中Ki-67表達，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 影像學表現

三名開窗手術療效好的患者，其囊腔明顯縮小，囊腫周圍有新骨形成，從曲面斷層和CT影像可知囊腔縮小，病損周圍向中心有高密度骨形成(圖1)。

圖1A和C是同一患者術前曲面斷層片和CT照片。B和D是患者術后20月復診曲面斷層片和CT照片。可知囊腔變小，囊腫周圍有新骨形成。

2.2 免疫組化結果

Ki-67在所有8名成釉細胞瘤患者組織中的表達量為80.85%±8.36%，而在正常組織中其表達量僅為60.33%±6.3%。Ki-67在成釉細胞瘤組織中的表達高于正常組織中表達，且差異顯著(P<0.01)。在4名接受開窗減壓治療的成釉細胞瘤患者組織中表達量為65.72%±11.45%，開窗減壓治療一段時間后，開窗減壓療效好的3名患者組織中表達量明顯降低到55.06%±5.04%，且較開窗治療前有顯著差異(P<0.01)。而開窗減壓療效不好的1名患者其表達量為67.35%±2.6%，較開窗治療前無明顯改變，差異無統計學意義(P>0.05)。4名進行根治性手術的成釉細胞瘤患者組織中Ki-67表達量為82.11%±7.33%，這比開窗減壓療效好的三名患者開窗減壓治療一段時間后組織中Ki-67表達量高，其差異具有統計學意義(P<0.05)。見圖2。

圖2A是正常黏膜染色結果，B是根治術患者組織染色結果，C和D開窗減壓治療有效患者術前術后組織染色結果，E和F是開窗減壓術治療無效果術前術后組織染色結果。LsABX400

3 討論

WHO 分類將成釉細胞瘤根據其臨床病理行為不同分為實性/多囊型、骨外/外周型、促結締組織增生型和單囊型[7]。其生長具有輕微的男性傾向性，大多數腫瘤發生于頜骨內并且多發生于下頜骨磨牙區，常導致頜骨的膨大以及面部變形。雖屬于良性腫瘤，但其局部侵襲性，術后復發率高，也有惡變、甚至遠處轉移的零星報道[2,8]。

對于成釉細胞瘤這類骨質破壞嚴重的頜骨囊腫，常規的治療方法是將病變處骨質完全切除，用自體骨移植或金屬材料進行修復，但手術復雜，對患者損傷較大。而開窗減壓術雖然療程長，但能有效避免可能造成的骨折或缺損，可降低手術風險與難度，減輕患者痛苦與經濟負擔[9]。同時在治療牙源性腫瘤的優點是可以在局部麻醉下進行手術，并且可以保護所涉及的牙齒免于拔除和大面積的手術切除，從而避免神經損傷和可能造成的畸形[10]。然而有關開窗減壓術治療成釉細胞瘤的機制研究較少。

以往的研究表明，在開窗減壓術后，牙源性疾病的內層似乎變得更厚，組織學上的襯里細胞層發生改變并且類似于正常的口腔黏膜[11]。有關開窗減壓術在其他類型牙源性腫瘤中的作用顯示，開窗后腫瘤中上皮層及纖維囊壁層細胞形態，層次結構等均發生改變[12]。細胞的增殖、分化、衰老和凋亡均是細胞周期依賴性。幾乎所有的腫瘤都有細胞周期調控機制的破壞導致細胞生長失控、分化受阻、凋亡異常的特征[13]。細胞增殖在一個活體生物的細胞生長和組織的新陳代謝動態平衡中起到關鍵作用。關于成釉細胞瘤的研究發現，許多因子參與腫瘤進展，包括參與細胞粘附的蛋白質、骨重建，凋亡調節，細胞周期/細胞增殖和表皮生長因子基因等的突變等[14]。

Ki-67是一種細胞增殖相關抗原，它的異常表達與腫瘤的發生發展相關。它是一種耐久性抗原，可以方便，經濟地進行從石蠟包埋的腫瘤組織切片取回，許多研究應用其作為預后的價值標志物[15]。之前的研究表明Ki-67高表達于成釉細胞瘤中[16]。有學者認為在其他腫瘤中Ki-67表達與WNT-1表達呈負相關[17]，而與此同時WNT信號通路又參與成骨細胞的調控[18]。本實驗發現在3名開窗減壓療效好的患者中，Ki-67術后表達較術前降低。開窗前Ki-67的高表達解釋了成釉細胞瘤的侵襲性及浸潤性生長的特點。而開窗有效果時，內環境的改變，包括囊腔壓力的改變，可能是導致Ki-67表達降低的原因之一。同時Ki-67的表達降低可能調節了WNT信號通路對于成骨細胞的調控，從而影響了開窗后局部囊腔變小和新骨的形成，并最終達到治療效果。

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