局部晚期維、漢族食管鱗癌血清蛋白差異表達相關通路分析

（1新疆醫科大學第一附屬醫院腫瘤中心 新疆 烏魯木齊830054）

（2新疆醫科大學 新疆 烏魯木齊830000）

（3新疆醫科大學第一附屬醫院VIP醫學 新疆 烏魯木齊830054）

食管癌已被列為新疆特高發惡性腫瘤之一，具有明顯的民族差異，哈薩克族和維吾爾族發病率很高，且逐年上升；臨床療效和預后差，且不同民族間療效及預后不盡相同。目前尚無明確的預測其療效的分子標記物。本研究將對比維漢食管癌患者局部晚期血清蛋白的差異及其相關通路的分析，為今后靶基因通路研究打下基礎。

1.材料與方法

1.1 材料收集

收集新疆醫科大學第一附屬醫院2014年6月—2015年06月收治的臨床分期為III～IVA期的維吾爾族食管鱗癌患者28例、漢族食管鱗癌患者35例。分別選取性別、年齡等相匹配的維吾爾族、漢族健康體檢者14、10例作為對照組。采集接受放化療前食管鱗癌患和健康體檢者外周靜脈血5ml，所有食管癌患者完成同期放化療后，按照隨訪時間長短再次采集靜脈血5ml。所有病例均經胃鏡活檢，組織病理確診為鱗狀細胞癌，分期為III～IVA期食管癌患者，一般狀況(PS)評分≤2分。所有患者預計生存期≥6個月，無主要器官功能障礙，心、肺、肝、腎功能基本正常。

1.2 方法

采用同位素標記相對和絕對定量技術（iTRAQ)，該技術通過蛋白質提取、消化，利用多種同位素試劑標記蛋白多肽，然后用高精度質譜儀串聯分析，篩選綜合治療前后食管癌患者及健康對照者血清蛋白質譜表達差異。

1.3 血清差異蛋白的篩選標準

按對比要求進行組間比較，組間比值大于1.2（表達上調）或小于0.833（表達下調），P＜0.05為差異蛋白的篩選標準。其中組間比值大于1.5為顯著表達上調，組間比值小于0.6為顯著表達下調，對篩選的差異蛋白進一步在http∶//www.uniprot.org進行驗證。

2.結果

（1）83個維吾爾族局部晚期食管鱗癌對比正常對照組的差異蛋白被導入KEGG數據庫后，將不同的蛋白質富集到共同代謝途徑中，共得到127個差異蛋白的KEGG通路，有統計學差異的KEGG通路有7個（P＜0.05）,與腫瘤有相關性的通路有1個（表1）。

（2）46個漢族局部晚期食管鱗癌對比正常對照組的差異蛋白被導入KEGG數據庫后，將不同的蛋白質富集到共同代謝途徑中，共得到36個差異蛋白的KEGG通路，P＜0.2的KEGG通路有13個,與腫瘤有相關性的通路有3個（表2）。

表1 食管癌患者放化療前組與健康對照組比對篩選的血清差異蛋白富集的KEGG通路

3.討論

我們將維吾爾族食管癌差異表達的血清蛋白導入KEGG數據庫后，共得到127個差異蛋白的KEGG通路，有統計學差異的KEGG通路有7個（P＜0.05）,與腫瘤有相關性的通路有1個，Toll-like receptors（TLR）通路與口腔癌[1]、卵巢癌[2]、非小細胞肺癌[3]及食管癌[4]等的發生發展都有一定相關性，其中對于食管癌的研究也僅限于食管腺癌，該研究者發現在食管腺癌中TLR通路基因發生了周期性的突變，TLR4突變對細菌脂多糖的響應能力下降，而這個突變可能破壞先天免疫信號，并促進一個有利于腫瘤發生的微環境。在此研究中，食管鱗癌患者差異蛋白組蛋白H2B、脂多糖結合蛋白（LBP）均參與該通路，且有統計學差異，通路的功能與這兩種差異蛋白生物學特性保持了一致性，可作為今后的重點研究。

我們又將局部晚期漢族食管鱗癌患者治差異蛋白導入KEGG數據庫后，得到36個差異蛋白KEGG通路，由于治療前與對照組相比KEGG通路未得到明顯統計學差異通路，故選擇P＜0.2的通路進行分析，共篩選出腫瘤相關通路3個，分別為小細胞肺癌通路、趨化因子信號通路、甲狀腺癌通路。而治療后選擇P＜0.05有明顯統計學差異且和腫瘤相關通路有小細胞肺癌通路、趨化因子信號通路。兩組比較中小細胞肺癌通路由于特異性較強，故再此食管癌研究中不做過多闡述。

研究發現，多種腫瘤細胞表達趨化因子受體[5]，與趨化因子結合后激活胞內下游信號通路Ras和細胞外調節蛋白激酶-絲裂原活化蛋白激酶(extracellular regulated protein kinasemitogen-activated protein kinases，ERK-MAPK)[6]，影響腫瘤生長和凋亡[7]。Teicher等[8]研究發現CXCL12與CXCR4結合后，通過激活CXCR4偶聯的G蛋白，激活磷脂酰肌醇-3激酶 (phosphatidylinositide 3-kinases，PI3-K)、MAPK和轉錄因子核因子-κB(nuclear factorκB，NF-κB)信號通路，進一步促進腫瘤細胞的侵襲轉移；趨化因子及其受體和腫瘤免疫相關，CCL21通過與CCR7結合，募集調節性T細胞抑制抗腫瘤應答[9]；同時通過分泌羥固醇，刺激周圍組織中成熟樹突狀細胞停止表達CCR7，使其不能前往淋巴結啟動抗腫瘤應答，進而逃避免疫攻擊[10]。

趨化因子信號通路中漢族食管癌患者有血小板因子參與，且均為下調。考慮血小板因子的功能為抑制腫瘤的血管生成，故猜測如果此蛋白上調，是否可進一步激活該通路，而影響腫瘤的生長。

由于食管癌分子蛋白可以參加數百種通路，且通路之間影響也有相互交叉，且無統計學差異的通路也并非真正意義上無效果的通路，故特異性通路需要更多的 有質量的實驗來探索及驗證。

】

[1]Ikehata N,Takanashi M, Satomi T,et al.Toll-like receptor 2 activation implicated in oral squamous cell carcinoma development[J].Biochem Biophys Res Commun. 2017 Dec 18.

[2]Sun NK,Huang SL,Chang TC,et al.TLR4 and NFκB signaling is critical for taxol resistance in ovarian carcinoma cells[J].J Cell Physiol.2018 Mar;233(3):2489-2501.

[3]Wang X,Zhang Z,Cao H,et al.Human papillomavirus type 16 E6 oncoprotein promotes proliferation and invasion of non-small cell lung cancer cells through Tolllike receptor 3 signaling pathway[J].J Med Virol. 2017 Oct;89(10):1852-1860.

[4]Fels Elliott DR1,Perner J2,Li X,et al.Impact of mutations in Toll-like receptor pathway genes on esophageal carcinogenesis[J].PLoS Genet. 2017 May 22;13(5)

[5]Lee HJ，Song IC，Yun HJ，et al.CXC chemokines and chemokine receptors in gastric cancer:from basic findings towards therapeutic targeting[J].World J Gastroenterol，2014，20: 1681-1693.

[6]Marinissen MJ，Gutkind JS.G-protein-coupled receptors and signaling networks:emerging paradigms[J].Trends Pharmacol Sci，2001，22:368-376.

[7]Burger JA，Tsukada N，Burger M，et al.Blood-derived nurselike cells protect chronic lymphocytic leukemia B cells from spontaneous apoptosis through stromal cell-derived factor-1[J].Blood，2000，96:2655-2663.

[8]Teicher BA，Fricker SP.CXCL12(SDF-1)/CXCR4 pathway in cancer[J].Clin Cancer Res，2010，16:2927-2931.

[9]Allavena P，Germano G，Marchesi F，et al.Chemokines in cancer related inflammation[J].Exp Cell Res，2011，317: 664-673.

[10]Sperveslage J，Frank S，Heneweer C，et al.The role of chemokine receptor CCR7 and Its ligands CCL19 and CCL21 in tumor progression of pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Cytokine，2013，63:302-310.