豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯滅活疫苗血清學效力檢驗與靶動物免疫攻毒保護相關性研究

藏玉婷，張春媛

（ 哈藥集團生物疫苗有限公司研發中心，哈爾濱 150069）

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）是引起豬腹瀉的重要病原，主要引起兩周齡以內仔豬發生以急性腹瀉、脫水及高死亡率為特征的豬傳染性胃腸炎（TGE），該病給世界各國養豬業造成了巨大經濟損失[1]。我國從20世紀50年代起就有豬傳染性胃腸炎的報道，并且一直在我國養豬場時有發生，尤其是冬季和早春寒冷季節常呈地方性爆發流行，給我國養豬業造成極大的危害[2]。豬流行性腹瀉病毒可以引起豬流行腹瀉（PED），該病多在寒冷的冬季發生，臨床上主要以嘔吐、嚴重腹瀉、脫水和高死亡率為特征[3]。

早期預防對控制TGE和PED十分重要，使用疫苗預防接種有較大的實踐意義，我國于1973年首次出現，1995年開始使用豬流行腹瀉與豬傳染性胃腸炎二聯滅活疫苗和弱毒疫苗，其對該病的控制起到了積極的作用，但2010年10月以來，豬流行性腹瀉在我國多個省爆發流行，并且表現出新的特征[4-6]。因此，本文分離了現地流行毒株制備豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯滅活疫苗（JL株+HN-1株），以明確該滅活疫苗中和抗體效價與靶動物攻毒保護相關性為目的進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 疫苗

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯滅活疫苗（JL株+HN-1株），3批實驗室產品，批號為201601、201602、201603，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

1.1.2 檢驗用強毒

豬傳染性胃腸炎病毒JL株，批號為TGEV-Q-201601，病毒含量107.50TCID50/0.2 mL；豬流行性腹瀉病HN-1株，批號：PEDV-Q-201601，病毒含量107.38TCID50/mL，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備、鑒定、保存。

1.1.3 試驗動物

TGEV、PEDV中和抗體均≤1∶4母豬所產3～5日齡健康仔豬，購自黑龍江省哈爾濱市郊某豬場，品種為長白。

1.2 試驗方法

1.2.1 分組與免疫

將3批疫苗分別經頸部肌肉接種于3～5日齡的仔豬20頭·組-1，共免疫60頭，另設20頭作為對照，試驗分組情況見表1。

1.2.2 抗體檢測

仔豬免疫后14及21 d，分別采集10頭·組-1免疫仔豬和10頭對照仔豬的血液，對每組的其中5頭仔豬血清中TGEV中和抗體進行測定；每組的另5頭仔豬測定血清中PEDV中和抗體。

1.2.3 免疫攻毒

免疫后14 d，將測定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒，每頭2.0 mL，將測定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒，每頭2.0 mL；免疫后21 d，將測定TGEV中和抗體的仔豬分別口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒攻毒，每頭3.0 mL，將測定PEDV中和抗體的仔豬分別口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒，每頭3.0 mL；攻毒后連續14 d觀察臨床發病情況；以無臨床癥狀作為保護，計算各組的保護率。

2 試驗結果

2.1 仔豬免疫后TGEV中和抗體檢測與攻毒保護結果

仔豬免疫后14、21 d，每組隨機選5頭仔豬分別采血，測定TGEV中和抗體，并口服豬傳染性胃腸炎病毒JL株攻毒。

由表2、表3可知，免疫后14 d至少4/5免疫豬產生了≥1∶32的TGEV中和抗體；免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價都≥1∶32，而對照仔豬的中和抗體效價均≤1∶4。攻毒結果表明，當TGEV中和抗體達到1∶32時可完全保護仔豬不發病。

2.2 仔豬免疫后PEDV中和抗體檢測與攻毒保護結果

仔豬免疫后14、21 d，每組隨機選5頭仔豬分別采血，測定PEDV中和抗體，并口服豬流行性腹瀉病HN-1株攻毒。

由表4、表5可知，免疫后14 d各仔豬均產生了低水平的PEDV中和抗體，只有少數仔豬的中和抗效價達到了1∶16；免疫后21 d所有免疫仔豬的中和抗體效價都≥1∶16，而對照組仔豬的中和抗體效價均≤1∶4。攻毒結果表明，當PEDV中和抗體效價達到達到1∶16時完全保護免疫仔豬抵抗PEDV強毒的攻擊。

表1 試驗仔豬分組免疫攻毒情況

表2 仔豬免疫后14 d TGEV中和抗體與攻毒保護的相關性

表3 仔豬免疫后21 d TGEV中和抗體與攻毒保護的相關性

續表

表4 仔豬免疫后14 d PEDV中和抗體與攻毒保護的相關性

表5 仔豬免疫后21 d PEDV中和抗體與攻毒保護的相關性

3 結 論

TGEV中和抗體水平與靶動物免疫攻毒保護具有相關性，當TGEV中和抗體水平≥1∶32時，能完全保護免疫仔豬抵抗TGEV強毒的攻擊；達1∶22時可部分保護免疫仔豬抵抗TGEV強毒攻擊。

PEDV中和抗體水平與靶動物免疫攻毒保護同樣具有相關性，當PEDV中和抗體水平≥1∶16時，能完全保護免疫仔豬抵抗PEDV強毒的攻擊；達1∶13時可部分保護免疫仔豬抵抗PEDV強毒攻擊。

對于TGEV，免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測到TGEV中和抗體（1∶16～1∶40），但免疫組免疫仔豬抵抗TGEV強毒的攻擊保護率＞80%，免疫后21 d中和抗體效價明顯上升，所有免疫仔豬的TGEV中和抗體均≥1∶16（1∶32～1∶64），能完全保護免疫仔豬抵抗TGEV強毒的攻擊。而對于PEDV，免疫后14 d所有免疫仔豬均可檢測到PEDV中和抗體（1∶8～1∶16），但免疫組免疫仔豬抵抗PEDV強毒的攻擊保護率僅為40%，免疫后21 d中和抗體效價明顯上升，所有免疫仔豬的PEDV中和抗體均≥1∶16（1∶16～1∶32），能完全保護免疫仔豬抵抗PEDV強毒的攻擊。

[參考文獻]

[1] 殷震,劉景華.動物病毒學（第二版）[M].北京:科學出版社,1997.

[2] 王憲文,畢英佐,于康震,等.豬傳染性胃腸炎病毒基因工程研究進展[J].上海畜牧獸醫通訊,2004（2）:2-4.

[3] 楊春華,王強,王毅,等.豬流行性腹瀉的診斷與科學防治[J]. 畜牧與飼料科學,2009,30（7/8）:34-36.

[4] 錢永清,鄒勇.豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎病及其防制[J].國外畜牧學-豬與禽,2007,27（1）:57-60.

[5] 佟有恩,馬思奇,李偉杰,等.豬傳染性胃腸炎與豬流行性腹瀉二聯弱毒疫苗的研究[J].中國預防獸醫學報,1999,21（6）:406-410.

[6] 施標,董世娟,朱于敏,等.中國豬流行性腹瀉病毒分子流行病學研究進展[J].中國農業科學,2013,46（20）:4 362-4 369.