仔豬傳染性胸膜肺炎母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究

張　艷， 劉海隆， 林哲敏， 曹宗喜， 譚樹(shù)義

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南海口 571100；2.海南省熱帶動(dòng)物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口 571100)

豬傳染性胸膜肺炎(porcie contagious pleuropneum，簡(jiǎn)稱PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacilluspleuropneumoniae，APP)引起的一種以肺臟出血、壞死及胸膜纖維素性粘連為特征的呼吸道疾病，在世界各地廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失，是國(guó)際公認(rèn)的危害現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的5大疾病之一[1-2]。近些年來(lái)，隨著規(guī)模化、集約化養(yǎng)豬業(yè)的興起，該病的流行呈迅速上升趨勢(shì)。筆者經(jīng)血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，海南省規(guī)模豬場(chǎng)豬傳染性胸膜肺炎的抗體陽(yáng)性率達(dá)到37.65%(436/1 286)[3]。因此，該疾病需要引起養(yǎng)豬業(yè)的高度關(guān)注。

合理接種疫苗是控制該病的有效措施之一，然而仔豬如何才能獲得有效的免疫，關(guān)鍵在于排除母源抗體干擾，確定合適的首免日齡。總所周知，如果仔豬的母源抗體水平過(guò)高，接種豬傳染性胸膜肺炎疫苗后疫苗會(huì)被母源抗體中和，使仔豬產(chǎn)生不了抗體，得不到應(yīng)有的保護(hù)；母源抗體過(guò)低接種疫苗，仔豬在免疫空白期則易受環(huán)境中胸膜肺炎放線桿菌的侵襲。因此，本研究于2015年2月檢測(cè)了產(chǎn)前接種豬傳染性胸膜肺炎疫苗的母豬所產(chǎn)仔豬在不同日齡的豬傳染性胸膜肺炎母源抗體水平，旨在為豬場(chǎng)豬傳染性胸膜肺炎免疫程序的制定，特別是首免日齡的確定提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)動(dòng)物

以經(jīng)ApxlV ELISA試劑盒檢測(cè)為陰性的18頭健康經(jīng)產(chǎn)杜長(zhǎng)大三元雜交母豬及其所產(chǎn)18窩仔豬(每窩用4頭，共計(jì)72頭)作為試驗(yàn)動(dòng)物，由海南澄邁新華達(dá)豬場(chǎng)提供。

1.2　疫苗

豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批號(hào)140704，武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司)，豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批號(hào)1410005，中牧實(shí)業(yè)股份有限公司)。

1.3　主要試劑

豬胸膜肺炎放線桿菌ApxIV-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)為141004；豬胸膜肺炎放線桿菌(1-9-11型)抗體檢測(cè)試劑盒，豬胸膜肺炎放線桿菌(4-7型)抗體檢測(cè)試劑盒，豬胸膜肺炎放線桿菌(Ⅱ型)抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自法國(guó)ID-VET公司。

1.4　試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1試驗(yàn)分組選取健康經(jīng)產(chǎn)母豬隨機(jī)分為3組進(jìn)行雙盲試驗(yàn)，A組(武漢科前豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗組)、B組(中牧豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗組)、C組(非免疫對(duì)照組)，每組6頭。母豬所產(chǎn)仔豬的組別同母豬，即A組母豬所產(chǎn)的仔豬歸為A組，B組母豬所產(chǎn)的仔豬歸為B組，以此類推。

1.4.2試驗(yàn)?zāi)肛i免疫A、B 2個(gè)試驗(yàn)組的母豬，分別于產(chǎn)前6周和產(chǎn)前2周按照疫苗廠商提供的免疫途徑和劑量免疫接種，C組母豬在產(chǎn)前6周和產(chǎn)前2周頸部肌肉注射2.0 mL生理鹽水。

1.4.3試驗(yàn)仔豬采血及抗體檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)肛i于二免后14 d耳靜脈采血分離血清；試驗(yàn)仔豬分別于10、20、28、35、42、50、60和70日齡通過(guò)前腔靜脈采血并分離血清。

按照ApxIV-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)，在630 nm處測(cè)量和記錄樣品和對(duì)照的吸光度。檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：S(樣品孔D630 nm)≥P(陽(yáng)性對(duì)照孔D630 nm)×0.25，判為陽(yáng)性；如果S

棄去經(jīng)ApxIV-ELISA抗體檢測(cè)為陽(yáng)性的血清，陰性血清按照豬胸膜肺炎放線桿菌ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)，在450 nm 測(cè)量和記錄樣品和對(duì)照的吸光度。檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)為：S/P<0.3為陰性；S/P≥0.4為陽(yáng)性；0.3≤S/P<0.4為可疑。

1.5　試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1　試驗(yàn)?zāi)肛i的豬傳染性胸膜肺炎抗體水平

經(jīng)豬胸膜肺炎放線桿菌抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)后，不同廠家生產(chǎn)的豬傳染性胸膜肺炎疫苗在二次免疫后14 d均能產(chǎn)生合格的免疫抗體。

2.2　試驗(yàn)仔豬傳染性胸膜肺炎感染情況

經(jīng)ApxIV-ELISA抗體檢測(cè)，對(duì)照組有3頭仔豬血清呈陽(yáng)性，其余試驗(yàn)豬均呈陰性(表1)。

2.3　試驗(yàn)仔豬傳染性胸膜肺炎母源抗體檢測(cè)結(jié)果

由表2、表3可知，試驗(yàn)仔豬在10日齡時(shí)均可獲得Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體(抗體陽(yáng)性率均為100.00%)，大部分仔豬可獲得Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體(抗體陽(yáng)性率為91.67%、83.33%)，且抗體均維持在較高水平。但是，隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)，抗體水平和陽(yáng)性率整體上持續(xù)下降。其中，Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在A組仔豬42日齡、B組仔豬50日齡時(shí)，處于抗體保護(hù)臨界值(40%)，抗體陽(yáng)性率低于合格率(70%)；至70日齡，所有仔豬的Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在試驗(yàn)仔豬28日齡時(shí)已略低于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽(yáng)性率低于合格率；至60日齡，所有仔豬的Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體僅在B組的9頭10日齡仔豬體內(nèi)被檢測(cè)到，抗體陽(yáng)性率為37.50%，且隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，至35日齡所有仔豬的Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。

表1　試驗(yàn)豬PCP的情況統(tǒng)計(jì)

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。

表2　不同日齡試驗(yàn)仔豬胸膜肺炎放線桿菌抗體水平

注：同日齡同型抗體不同組間標(biāo)有不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

表3　不同日齡試驗(yàn)仔豬胸膜肺炎放線桿菌抗體陽(yáng)性率

3　討論與結(jié)論

由于豬傳染性胸膜肺炎的治療難度較大，多數(shù)情況難以完全治愈，目前最為有效的辦法就是進(jìn)行免疫預(yù)防[4]。研究發(fā)現(xiàn)，仔豬首次免疫時(shí)間的確定除了要考慮疫病的流行情況外，主要取決于仔豬的母源抗體水平[5-6]。母源抗體的被動(dòng)免疫對(duì)新生動(dòng)物十分重要，既能保護(hù)幼齡動(dòng)物免受病原菌侵襲，又具有干擾疫苗免疫的副作用。當(dāng)母源抗體過(guò)高時(shí)進(jìn)行接種，中和疫苗抗原，使抗體上升不明顯，不能產(chǎn)生免疫效果，甚至?xí)鹈庖呤7-8]。因此，在首免前對(duì)仔豬進(jìn)行母源抗體檢測(cè)尤為重要。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，免疫合格的試驗(yàn)?zāi)肛i所產(chǎn)仔豬在10日齡時(shí)均可獲得較高水平的Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，絕大部分仔豬可獲得Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，少數(shù)仔豬可獲得Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體。但是，試驗(yàn)仔豬所產(chǎn)生的各型胸膜肺炎放線桿菌母源抗體的水平和消長(zhǎng)規(guī)律存在差異。如Ⅰ型豬胸膜肺炎放線桿菌抗體在42～50日齡時(shí)，處于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽(yáng)性率低于合格率，故仔豬的首免時(shí)間應(yīng)確定在42～50日齡。Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在試驗(yàn)仔豬28日齡時(shí)已略低于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽(yáng)性率低于合格率，故仔豬的首免時(shí)間應(yīng)確定在28日齡左右。雖然仔豬中有檢測(cè)到Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，但其水平較低，不能對(duì)仔豬起到較好的保護(hù)作用，還須深入研究以獲得免疫效果較好的Ⅱ型豬胸膜肺炎疫苗。

由于目前市場(chǎng)上常售的豬傳染性胸膜肺炎疫苗一般多為二價(jià)和三價(jià)疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型或Ⅰ、Ⅶ型)，且豬場(chǎng)豬傳染性胸膜肺炎常為多血清型胸膜肺炎放線桿菌感染，故需針對(duì)性地同時(shí)免疫多價(jià)豬傳染性胸膜肺炎疫苗。但從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型豬傳染性胸膜肺炎疫苗適宜的首免時(shí)間并不相同，且不同廠家的疫苗免疫母豬后，仔豬獲得的母源抗體水平和消長(zhǎng)也存在差異。這就要求養(yǎng)豬者必須了解其豬場(chǎng)豬傳染性胸膜肺炎的血清型及仔豬的母源抗體水平，根據(jù)豬場(chǎng)的實(shí)際情況來(lái)選擇適宜的疫苗和免疫程序，才能減少免疫失敗，有效防控豬傳染性胸膜肺炎。而試驗(yàn)結(jié)果也提示我們現(xiàn)有疫苗還存在一些不足，如多價(jià)疫苗的首免時(shí)間如何統(tǒng)一以獲得最佳的免疫效果，有待進(jìn)一步研究。

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