鎖陽多糖的抗衰老作用

尚　林　李建菊　尚　軍

(青海省紅十字醫院藥劑科，青海　西寧　810008)

《本草綱目》記述：“鎖陽性溫、味甘、無毒、有補腎、益精血、潤燥養精治痿弱之用”。臨床用鎖陽補陽氣，治陽痿精虛，陰衰血竭，老年氣弱陰虛，大便燥結等。近年研究證明，它還有防癌、抗癌，免疫調節，延緩衰老，對防治心血管疾病有明顯效果〔1,2〕。鎖陽含有黃酮類、三萜類、甾體類、多糖類、揮發性成分等多種活性成分〔3,4〕。近年來有關鎖陽功能性保健品及藥品的研發越來越受到人們的關注，本研究通過HPD-450型大孔吸附樹脂層析柱富集純化鎖陽多糖，采用D-半乳糖小鼠衰老模型，觀察不同劑量鎖陽多糖對小鼠衰老的影響。

1　材料與方法

1.1實驗材料昆明種小鼠，清潔級，6～8周齡，體重(20±2)g，購于青海省地方病研究中心〔實驗動物生產許可證 SCXK(青)2005-0001〕；雌雄各半，分籠飼養，實驗前適應性喂養1 w，自由進食和飲水。Bio-Rad XMARK全自動酶儀〔伯樂生命醫學產品(上海)有限公司〕；高速冷凍離心機(德國Eppendorf)。鎖陽購于青海省西寧九康藥業有限公司；D-半乳糖〔天津市致遠化學試劑有限公司(批號：20140326)〕；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S轉移酶(GSH-ST)、谷胱甘肽還原酶活性系數(GRAC)、丙二醛(MDA)、過氧化氫(H2O2)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2鎖陽多糖的制備將鎖陽粉碎后，過100目篩，甲醇脫脂。藥渣揮盡甲醇，以水為提取溶劑按料液比1∶6水浴回流3次，每次3 h，合并水提液，濃縮至原體積的1/3。加入85%的乙醇溶液，靜置24 h，4 000 r/min離心，收集沉淀，沉淀經適量蒸餾水溶解后反復凍融，除蛋白，減壓濃縮，60℃真空干燥，得深棕色鎖陽粗多糖。將上述鎖陽粗多糖配制成100 mg/ml水溶液，經HPD-450型大孔吸附樹脂層析柱富集純化，70%乙醇洗脫，減壓回收溶劑，得灰白色鎖陽多糖，以葡萄糖為對照品，分光光度法測得含量為72.4%。

1.3動物分組及造模給藥將實驗小鼠隨機分成6組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組、衰老模型組、鎖陽多糖低劑量組(100 mg/kg)、中劑量組(200 mg/kg)、中高劑量組(400 mg/kg)和高劑量組(800 mg/kg)。衰老模型組和鎖陽多糖各劑量組每天均頸背部皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg)；正常對照組頸背部皮下注射等量的0.9% 氯化鈉溶液，造模1 w后試藥組同時灌胃給予不同劑量鎖陽多糖；正常對照組和衰老模型組蒸餾水灌胃，連續給藥49 d。期間各組小鼠每7天稱重1次，按體重確定相應的給藥量。

1.4生理指標測定末次給藥后，實驗小鼠禁食不禁水12 h，稱重。眼球取血，分離血清，存放于4℃冰箱，備用。按南京建成試劑盒說明分別測定血清中GSH-Px、GSH-ST、SOD、H2O2、MDA、T-AOC和GRAC等指標。

1.5統計學方法采用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2　結　果

2.1各組小鼠體征和行為比較造模前各組小鼠皮毛光亮、活潑、納食正常。造模1 w后，與正常對照組相比，各組小鼠食欲減退、形體消瘦、體重減輕，毛色灰暗、豎毛，活動減少，呈現明顯的衰老體征。給藥后，隨著給藥時間的延長，與衰老模型組相比，鎖陽多糖各劑量組小鼠皮毛較光亮、活潑、納食正常，與正常對照組小鼠相比，行為體征無明顯差異。

2.2各組血清抗氧化指標比較見表1。與正常對照組比較，衰老模型組血清GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST活性均顯著降低(P<0.01)，而GRAC、MDA及H2O2含量均顯著升高(P<0.01)。與衰老模型組比較，鎖陽多糖低劑量組H2O2含量顯著降低(P<0.01)；T-AOC、SOD、GSH-ST活性顯著升高(P<0.01)；中劑量組、中高劑量組及高劑量組GRAC、MDA及H2O2含量顯著降低(P<0.05或P<0.01)；而GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST活性與衰老模型組比較均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。

表1　各組血清抗氧化指標水平比較

與衰老模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3　討　論

衰老是多種因素綜合作用的結果，是機體生理、病理過程和生化反應的綜合體現，是體內外各種綜合因素共同作用的結果。目前有關衰老機制的代表性學說有自由基學說、非酶糖基化學說等。自由基學說是具有代表性的衰老學說之一，該理論認為，隨著年齡的增長，體內自由基平衡體系逐漸被破壞，造成自由基過剩。過量自由基可通過過氧化作用攻擊細胞膜及核酸、蛋白質和酶類等生物大分子，引起細胞膜上的不飽和脂肪酸產生脂質過氧化反應，核酸及蛋白質分子交聯，DNA基因突變或復制異常及生物酶活力下降，最終導致細胞功能嚴重受損以致衰老、死亡〔5,6〕。非酶糖基化學說認為生理條件下，葡萄糖能與蛋白質、氨基酸和多肽中的氨基發生反應生成阿馬多里，可降解成不飽和醛酮類的中間產物，這些中間產物進而與蛋白質和氨基酸中的氨基發生交聯共軛造成蛋白質交聯損傷，是導致衰老的主要原因，它們能使血管、肺、腎臟等器官提前老化。因為糖基化反應本身的速度相當慢，糖基化的許多實驗是在有氧氣的條件下完成的，與氧自由基相關的氧化過程可加速和促進糖基化反應〔7〕。抗氧化劑以其清除自由基功能，防止自由基破壞生物大分子的特性，而作為延緩衰老的藥物〔8〕。

多糖廣泛存在于生物體中，它不僅是維持生命的基本物質之一，而且現代藥理學研究證明，多糖具有廣泛的生理活性及藥用價值，具有免疫調節、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒、抗衰老、抗胃潰瘍、抗凝血等活性。鎖陽文獻報道，鎖陽粗多糖咀嚼片及鎖陽水提醇沉物咀嚼片可通過調節衰老動物的免疫功能及影響脂質過氧化發揮抗衰老作用〔9，10〕。

過量的D-半乳糖在醛糖還原酶催化下還原成半乳糖醇，進而影響細胞正常滲透壓，導致細胞功能障礙，代謝紊亂，破壞并消耗機體抗氧化防御系統，從而造成機體自由基過剩，生物大分子氧化損傷，最終導致細胞功能嚴重〔11〕。GSH-Px、GSH-ST、SOD及T-AOC活性高低的變化反映了機體抗氧化能力的大小，活性越高，抗氧化能力越強；核黃素在體內以黃素腺聚嘌呤二核苷酸(FAD)的形式與酶蛋白結合成各種黃素蛋白，作為電子轉移系統參與氧化還原過程，核黃素缺乏時，GRAC迅速增高，GRAC的水平能反映機體核黃素營養吸收及利用的能力；而H2O2及MDA含量的高低反映了機體自由基累積及脂質過氧化損傷的程度。

本研究表明D-半乳糖誘導小鼠衰老與機體抗氧化防御體系障礙，核黃素營養吸收與利用能力降低及自由基累積和脂質過氧化損傷加重有關。鎖陽多糖抗衰老作用可能與其提高GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST等抗氧化酶活性，減少MDA等脂質過氧化產物，增強機體清除自由基的能力，抑制脂質過氧化，改善機體對核黃素營養的吸收及利用能力有關，且呈現量效依賴關系。

1田碩,苗明三.鎖陽的化學藥理與臨床應用特點〔J〕.中醫學報,2014;29(189):249-51.

2曾朝珍,張永茂,李新明,等.鎖陽生理活性成分研究進展〔J〕.食品工業科技,2011;32(11)：491-5.

3張莉,裴棟,黃炎如,等.鎖陽化學成分研究〔J〕.中藥材,2016;39(1):74-7.

4王曉飛,李輝,劉銘佩,等.鎖陽化學成分研究〔J〕.中成藥,2015;37(8):1737-9.

5孫曉生,楊柳.抗衰老機制與藥物的研究進展〔J〕.廣州中醫藥大學學報,2009;26(6):593-7.

6員慧萍,楊澤.氧化應激與衰老研究進展〔J〕.中國老年保健醫學,2015;13(5):14-7.

7印大中,陳可冀.衰老機制:生化副反應損變的失修性累積〔J〕.中國老年學雜志,2005;25(1):1-5.

8宋朝春,魏冉磊,樊曉蘭,等.衰老及抗衰老藥物的研究進展〔J〕.中國生化藥物雜志,2015;35(1):163-70.

9蘇韞，劉永琦，張毅，等.鎖陽多糖咀嚼片對衰老模型大鼠NO代謝及免疫功能的影響〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2008；19(6)：458-61.

10劉永琦，蘇韞，吳建軍，等.鎖陽提取物對衰老模型鼠免疫功能及自由基代謝的影響〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2009；25(1)：55-7.

11范紅艷,顧饒勝,王艷春,等.大豆異黃酮抗衰老作用研究〔J〕.中草藥,2010;41(12):2054-7.