傳統推拿“束悗療法”對糖尿病周圍神經病變大鼠坐骨神經傳導速度、超氧化物歧化酶、丙二醛表達的影響

尚　坤　劉明軍　陳飛騰　李　波　王　蕾　陳林青　李躍宗　張　欣

(長春中醫藥大學，吉林　長春　130117)

“束悗療法”的記載首見于《內經》，是一種中醫傳統推拿操作手法〔1〕。該手法選取四肢大血管或大神經干走行線路為施術部位，以手指或手掌按壓局部并停留一定時間為主要操作手法，然后采用“緩按快放”或“快按緩放”的方式放開按壓部位以推動局部氣血運行，達到疏通經絡、活血止痛的治療目的。課題組曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療糖尿病性周圍神經病變(DPN)取得滿意療效〔1〕。本研究以傳統推拿“束悗療法”為主要干預手段，通過觀察DPN模型大鼠坐骨神經傳導速度(SNCV)、坐骨神經中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表達的改善情況開展相關機制研究。

1　材料與方法

1.1實驗動物與分組選取雄性Wistar大鼠80只，鼠齡8 w，由長春中醫藥大學實驗動物中心提供。分籠飼養，每籠10只，食用標準顆粒鼠糧。按完全隨機設計法(隨機數字表)將大鼠分為對照組、模型組、推拿組、藥物組，每組20只。

1.2實驗藥品與試劑鏈脲佐菌素(美國Sigma公司，1 g/瓶)；彌可保(甲鈷胺注射液，衛材中國藥業有限公司，500 μg/支)；MDA、SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3實驗儀器推拿手法測定儀(TAP-Ⅱ型，上海益聯醫學發展有限公司)；Medlab-u/4cs生物信號采集處理系統(南京美易科技有限公司)；光學顯微鏡及圖像分析系統(德國Leica公司)；酶標儀(Bio-rad,美國)。

1.4方法

1.4.1動物模型的制備取實驗大鼠60只，將鏈脲佐菌素臨用前用pH值4.2～4.5的0.1 mol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液避光條件下配成1%濃度溶液，按劑量50 mg/kg于實驗大鼠左下腹腔內單次注射，72 h后取尾血測血糖，凡血糖>16.7 mmol/L作為糖尿病大鼠。血糖未達標的造模大鼠，補打30 mg/kg 0.1%鏈脲佐菌素，72 h后測血糖，不足要求則棄去。如此在1 w后血糖仍>16.7 mmol/L，且從形態上有周圍神經病變出現，SNCV明顯降低時，即制成周圍神經病變模型大鼠。另取實驗大鼠20只，用0.1 mol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液(pH4.2、4℃)按同體積左下腹腔內單次注射，72 h后取尾血測血糖，作為對照組。實驗中的模型組、藥物組各死亡2只，推拿組死亡1只。

1.4.2干預方法①推拿組:將實驗大鼠仰臥，固定其頭部與上肢。施術者以左手牽拉大鼠一側下肢，使下肢伸直呈水平位，以右手拇指指腹緩慢按壓于大鼠腹股溝處，力量經推拿手法測試儀測定約為1 kg，持續30 s左右，然后突然抬手，停止按壓，即“緩按快放”；間隔60 s左右，再次以右手拇指指腹快速按壓于大鼠腹股溝處，力量經推拿手法測試儀測定約為1 kg，持續30 s左右，然后緩慢抬手，停止按壓，即“快按緩放”。如此操作3次。以上治療方法每日早晚操作2次，共治療8 w。②藥物組：將實驗大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10 min。根據人與動物體表面積計算法換算注射彌可保，大鼠用藥量為50 μg/kg，隔日注射于下肢肌肉，左右腿交替注射，以利于吸收，共治療8 w。③對照組和模型組:將實驗大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10 min，共8 w。

1.4.3檢測指標及方法將實驗大鼠治療8 w后尾靜脈取血以檢測血糖。以電子秤稱取每只大鼠體重后，腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg)進行麻醉，將大鼠俯臥固定于固定架上，暴露出坐骨神經，用無菌玻璃剝離器輕輕剝離坐骨神經并游離下來，應用生物信號采集處理系統，測得SNCV，然后迅速將坐骨神經放入液氮中，放入-70℃冰箱中存放，以備勻漿。

1.5統計學方法采用SPSS17.0軟件進行方差分析、秩和檢驗。

2　結　果

2.1各組SNCV比較與對照組SNCV〔(35.47±2.65)m/s〕比較、模型組SNCV明顯降低〔(25.66±2.84)m/s〕(P<0.01)，證明實驗造模成功。與模型組比較，推拿組SNCV明顯增加〔(33.82±2.29)m/s〕(P<0.01)，藥物組也明顯增加〔(32.17±2.73)m/s〕(P<0.01)，提示推拿“束悗療法”和藥物療法能夠有效改善DPN大鼠SNCV；推拿組與藥物組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2各組坐骨神經SOD、MDA水平比較與對照組比較，坐骨神經SOD水平顯著降低、MDA水平顯著增高(P<0.01)，證明實驗造模成功。與模型組比較，推拿組坐骨神經SOD水平顯著增加、MDA水平顯著降低(P<0.01)，與模型組比較，藥物組坐骨神經SOD、MDA水平差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　各組坐骨神經SOD、MDA表達比較

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.01

3　討　論

“束悗療法”是一種中醫傳統推拿操作手法〔1〕，其最早記載見于《內經》。在《靈樞·雜病篇》中記載：“痿厥為四末束悗，乃疾解之，日二，不仁者，十日而知，無休。病已止。”主要的意思是在治療痿厥癥病人時，將患者四肢捆綁起來，待其產生憋悶脹痛感覺后，迅速解開，每天治療2次，原本四肢沒有知覺的患者在治療10 d之后就會產生知覺，這種治療方法不要停止，直到患者痊愈為止。可見，“束悗療法”中的“束”，意為約束，束縛；“悗”，《辭海》解釋為“煩悶”，《靈樞·五亂》中記載有“清濁相干，亂于胸中，是謂大悗”。由此引申束悗具有約束阻滯之意。《靈樞集注》中曾批注“夫按之束之，皆導引之法，猶尺蠖之欲伸而先屈也”。可見，在治療氣機不暢、麻痹不仁的病癥時，可以在四肢脈位運用束悗按抑的手法，達到通郁開閉、導氣通達的治療目的。然而，現代推拿臨床中，源于中醫傳統古籍的束悗療法卻鮮有應用，僅散見于個別理論性的文獻探討中〔2〕。

現代醫學認為，DPN的病理表現一是營養神經的血管出現病變，表現為毛細血管的內皮細胞增生或基底膜增厚；二是神經本身出現病變，主要表現為神經纖維軸索的損傷或構成髓鞘或神經內膜的施萬細胞的變性壞死〔3，4〕。中醫則認為，DPN屬于“痹證”、“痿證”之范疇，多由于氣虛失運、血虛不榮、痰瘀阻滯或風濕痹阻等原因導致局部血流緩慢，瘀阻脈道，皮肉經脈失去氣血濡養而痿廢不用〔5，6〕。這與DPN所表現出來的臨床癥狀是相吻合的。課題組在也曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療DPN并取得滿意療效〔1〕。

鏈脲佐菌素是一種廣譜抗菌素，不但具有抗菌、抗腫瘤的功效，還由于其對胰島β細胞高度選擇性的毒性作用而具有致糖尿病的副作用〔7～9〕。同時，由于鏈脲佐菌素對組織毒性相對較小，動物存活率高，是國內外經常使用的制備糖尿病動物模型的成熟方法。神經電生理檢查是早期診斷DPN的敏感指標，神經傳導速度減慢是糖尿病出現神經病變的一個先兆，常常用于評價臨床療效與預后情況。

有研究表明，當機體出現高血糖后，高糖引起線粒體中的超氧陰離子增多，誘發周圍細胞發生氧化應激，最終造成糖尿病的各種慢性并發癥〔10〕。自由基是反映機體氧化應激的直接指標，但是自由基具有短瞬即逝的特性，實驗中難以測定。但是一些蛋白質、脂質和DNA自由基損傷的終產物作為反映氧化應激的可靠指標和間接指標則能夠檢測到。MDA是脂質過氧化的最終產物，其在坐骨神經中表達的高低能夠反映出脂質過氧化反應的程度，也反映出機體細胞受到自由基攻擊的嚴重程度；SOD是機體細胞內部重要的自由基清除酶，其表達的高低直接反映了機體清除自由基的能力〔11，12〕。因此，神經組織內MDA、SOD表達的高低能夠直接反映神經組織損傷及修復狀態。

本研究發現，傳統推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN大鼠模型下肢SNVC，表明對周圍神經功能恢復具有有效的促進作用；同時“束悗療法”能夠提高坐骨神經中SOD的表達，降低MDA的表達，表明具有抗氧化的作用從而發揮保護坐骨神經形態功能的療效。

1劉鵬,張燕,李躍宗.“束悗療法”治療糖尿病性周圍神經病變〔J〕.長春中醫藥大學學報,2013;29(5):880-1.

2曠時恩,曠晉.束悗療法在傷病治療的臨床應用〔J〕.中華推拿療法雜志,2004;2(4):15-6.

3沈薇,董繼宏,汪聽.糖尿病周圍神經病的發病機制及治療展望〔J〕.中國臨床神經科學,2008;16(2):204-7.

4Laybutt DR,Kaneto H,Hasenkam PW,etal.Increased expression of antioxidant and antiapoptotic genes in islets that may contribute top-cell survival during chronic hyperglycemia〔J〕.Diabetes,2002;51(2):413-23.

5逄紫千,謝占峰,閻慧.針刺對糖尿病周圍神經病變大鼠尾神經超微結構的影響〔J〕.長春中醫藥大學學報,2011;27(4):523-5.

6逄紫千,閻慧,解占峰.針刺對糖尿病周圍神經病變大鼠坐骨神經組織病理學的影響〔J〕.長春中醫藥大學學報,2012;28(4):594-6.

7Raekietan N,Raekietan ML,Nadkarni MR.Studies on diabetogenic action of Stre-Ptozotoein(NSC-37917)〔J〕.Cancer Chemother Rep,1963;29:91-8.

8于德民,吳銳,尹雑,等.實驗性鏈脲佐菌素糖尿病動物模型的研究〔J〕.中國糖尿病雜志,1995;3(2):105-9.

9黃繼漢,黃曉陣,陳志揚,等.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算〔J〕.中國臨床藥理學與治療學,2004;9(9):1069-72.

10Brownlee M.The pathobiology of diabetic complieations:a unifying methanism〔J〕.Diabeties,2005;54(6):1615-25.

11Ceriello A,Bortolotti N,Falleti E,etal.Total radicaltrapping antioxidant parameter in NIDDM,patients〔J〕.Diabetes Care,1997;20:194-7.

12Blaszczak R,Klljawski K,Kedziora-Kornatowska K,etal.The total antioxidant capacity and low-molecular antioxidant concentration in plasma of type-2 diabetes patients with different stage of metabolic compensation and concomitant diabetic nephropathy〔J〕.Pol Merkuriusz Lek,2005;18(103):29-32.