QuEChERS法動態監測及評價山西省韭菜中12種農藥殘留

郭麗麗　花　錦

（1山西中醫藥大學制藥與食品工程學院，山西晉中 030619；2山西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，山西太原 030024）

韭菜是我國的特色蔬菜，味道鮮美、香味獨特，具有豐富的營養價值。韭菜含有VC、VB1等多種維生素及礦物質，還含有豐富的纖維素，可以促進腸道蠕動。韭菜中硫化物的獨特辛香味具有一定的殺菌消炎作用，有助于提高人體免疫力（商飛飛，2012）。然而韭菜生產中韭蛆、灰霉病等病蟲害多發，種植過程中需要適量使用農藥以減少病蟲害損失（Farha et al.，2017）。但是一些菜農為了追求產量，經常采用灌根的方法將一些高毒農藥用于韭蛆的防治（宋丹 等，2016），造成韭菜中農藥殘留超標，中毒事件頻頻發生（王文嬌 等，2011）。2017年11月1日起，山東省全面啟動實施韭菜產品“雙證制”管理，嚴禁無《合格證》和《市場銷售憑證》的韭菜產品進入食用農產品市場、生產加工、餐飲服務環節。這一舉措反映出韭菜農藥殘留問題的日益嚴重性，相關部門應加強韭菜中農藥殘留的監測及監管。

目前韭菜中農藥殘留的檢測方法已有很多研究和報道，相關的國家食品安全標準、農業標準及行業標準等也陸續出臺。Xu等（2017）以薄層色譜作為凈化方式，結合超高效液相色譜-Qtrap串聯質譜檢測韭菜中的有機磷農藥殘留；Shi等（2013）采用固相萃取結合氣質聯用技術檢測韭菜中毒死蜱的用量；Rahman等（2012）利用氣相色譜-微電子捕獲法檢測溫室種植條件下韭菜中的溴蟲腈；Song等（2007）以凝膠滲透色譜法作為凈化方式檢測了韭菜中有機磷和有機氯的殘留；Zou等（2016）以快速多插頭式過濾為凈化方式檢測了韭菜中183種農藥殘留。近年來，一種被稱為QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged，safe） 的樣品凈化方法在農藥殘留檢測中逐漸流行起來，該方法在韭菜農殘檢測中的應用也有很多報道（Pay á et al.，2007；Qu et al.，2010；Han et al.，2015；He et al.，2015；馬杰 等，2016）。本試驗采用QuEChERS法，依據農業部GB 2763—2016 《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》選擇韭菜種植中重點關注的12種農藥（吡蟲啉、敵敵畏、毒死蜱、多菌靈、腐霉利、甲胺磷、甲氰菊酯、克百威、六六六、氯丹、氯氟氰菊酯和高效氯氟氰菊酯、阿維菌素），采用超高效液相色譜串聯質譜或氣相色譜串聯質譜檢測農藥殘留情況，旨在驗證方法可行性的同時對山西省60批韭菜進行農藥殘留監測及評估分析，并從樣品的采樣時期、采樣區域和銷售方式3個方面進行相應的分類、總結和歸納，從不同角度比較了韭菜中農藥殘留量與不同采樣時期、采樣區域和銷售方式之間的關系，以期為山西省韭菜農產品種植工藝的改進提供實踐基礎，同時也為質量監督管理部門加強食品安全監管重點工作的實施提供科學指導。

1　材料與方法

1.1　儀器與試劑

ACQUITY Ultra Performance LCTM超高效液相色譜儀（美國Waters公司）；TQD串聯四極桿質譜儀（美國Waters公司）；Agilent 6890N+5975B型氣相色譜串聯質譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；HC-3518型離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）；Advanced Vortex Mixer渦旋混合器（美國Talboys公司）；KQ-500DB型超聲波（成都康宇科技有限公司）。

十八烷基三甲氧基硅烷（Trimethoxyoctadecylsilane，C18） 和 乙 二 胺 -N-丙 基 硅 烷（Primary secondary amine，PSA）（ 天津博納艾杰爾公司）；12種農藥標準物質（德國Dr.Ehrenstorfer公司）；甲醇、乙腈（美國Fisher公司）；甲酸（天津科密歐有限公司）；試驗用水均為蒸餾水。

標準儲備液：自配，分別稱取5～10 mg（精確至0.1 mg）農藥及相關化學品標準物質于10 mL容量瓶中，用甲醇、乙腈或丙酮等溶劑溶解并定容至刻度，避光4 ℃保存，6個月內可用。

混合標準中間溶液：自配，分別準確移取一定體積的每種標準儲備液，用水∶乙腈為1∶1（體積比）定容成1.0 μg?mL-1的混合標準中間液，避光4 ℃保存，1個月內可用。

1.2　試驗方法

1.2.1抽樣2017年6～11月，分別從山西省大同、忻州、朔州、太原、呂梁、晉中、晉城、長治、臨汾等地的農貿市場或超市隨機抽取韭菜樣品，共計60份。每個樣品均采取非無菌采樣方式（即采樣過程未在無菌條件下進行）抽取1.5 kg，封裝于塑料袋內。所抽取的樣品具體信息如表1所示。

1.2.2提取分別取適量韭菜樣品，用研缽研磨成糊狀后，準確稱取5 g（精確到0.01 g）置于50 mL的具塞離心管中，加入少許氯化鈉，再加入10 mL乙腈，渦旋混勻，超聲提取15 min，4 000 r?min-1離心10 min后取上清液。每個樣品平行提取3次。

1.2.3凈化取上述提取液1 mL于試管中，分別加入25 mg C18和25 mg PSA，充分渦旋混合后，用0.22 μm濾膜過濾，供液相色譜質譜儀、氣相色譜串聯質譜儀測定。

1.2.4檢測條件液相色譜條件：色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相：0.1%甲酸和乙腈，梯度洗脫，具體程序見表2；流速：0.3 mL?min-1；進樣量：10 μL；柱溫：35 ℃。

氣相色譜條件：不分流進樣，進樣量1 μL；進樣口溫度280 ℃；HB-5MS色譜柱（30 m×250 μm，0.25 μm）， 載 氣 為 高 純 He， 流 速 1.0 mL?min-1；程序升溫至90 ℃，以60 ℃?min-1升至180 ℃，以10 ℃?min-1升至240 ℃，再以80℃?min-1升至320 ℃，保持6.25 min；MSD傳輸線溫度280 ℃。

液相色譜串聯質譜條件：電離方式：電噴霧電離（ESI+）；掃描方式：正離子掃描；離子源溫度110 ℃；脫溶劑氣溫度380 ℃；錐孔氣流，氮氣，流速50 L?h-1；去溶劑氣流，氮氣，流速600 L?h-1；碰撞氣，氬氣，碰撞氣壓3.50×10-4MPa；檢測方式，多反應監測（MRM）。

氣相色譜串聯質譜條件：自動調諧；溶劑延遲2 min；電子轟擊（EI）離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃；多反應監測模式（MRM）；四極桿MS1和MS2溫度均為150 ℃；碰撞池淬滅氣（He）2.25 mL?min-1，碰撞氣（N2）1.5 mL?min-1。

表1　所抽取的韭菜樣品信息

表2　梯度洗脫程序

1.3　數據統計

采用Origin 9.0軟件對試驗數據進行統計計算和分析，并進行圖表的繪制。

2　結果與分析

2.1　韭菜中12種農藥殘留檢測方法的評價

2.1.1方法的線性范圍和靈敏度選取不含上述12種農藥的韭菜為樣品，按照1.2.2和1.2.3步驟進行空白基質溶液的制備，然后以此配制基質匹配標準溶 液（2.5、5.0、20、50、100 μg?L-1）， 測 定 后繪制標準曲線，得到線性回歸方程，相關系數R為0.995 1～0.999 9，表明各目標農藥線性關系良好。12種農藥在韭菜中的檢出限（LOD）均為0.001 5 mg?kg-1，定量限（LOQ）均為 0.005 mg?kg-1（表 3）。本方法檢出限、定量限遠遠低于農業部GB 2763—2016《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》的最高殘留量（MRL值），能夠滿足檢測要求。

表3　12種農藥的線性回歸方程、相關系數、線性范圍、檢出限和定量限

2.1.2方法的回收率和精密度在空白韭菜樣品中添加3個水平（LOQ、2倍LOQ及1個共性的農殘限量點，分別對應于0.005、0.010和0.100 mg?kg-1）的農藥混合標準溶液，進行添加回收試驗，6次重復。各目標農藥的平均回收率為75%～110%，相對標準偏差（RSD）為5.2%～11.6%，符合我國殘留檢測相關標準和法規要求（中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，SN/T 0001—2016，GB/T 27417—2017）。

2.1.3市售韭菜樣品中12種農藥殘留的檢測利用所建立的QuEChERS快速法對60份韭菜樣品中的12種農藥殘留進行檢測。結果表明，60份韭菜樣品中只有12份未檢出農藥殘留，其余48份樣品均檢出至少1種農藥殘留，檢出率為80%，其中有12份樣品農藥殘留超標，總體超標率為20%（表4）。超標樣品中有9份為腐霉利，占總超標率的75%，是韭菜產品不合格的主要因素，其中1份樣品的殘留檢測濃度達到4.22 mg?kg-1，超標高達20多倍；有1份樣品為甲氰菊酯超標，超標1.3倍；有2份樣品為（高效）氯氟氰菊酯超標，其中1份樣品超標近2倍。值得注意的是，六六六是國家明令禁止使用的農藥，但它的檢出率高達26.70%；甲胺磷和克百威也屬于蔬菜生產中禁用的高毒高殘留農藥，然而這兩種農藥均有檢出，檢出率分別為8.33%和1.67%（表4）。以上數據說明在山西省韭菜生產過程中，仍有多種高毒高殘留農藥在違規使用。

表4　60份韭菜樣品中12種農藥殘留的檢測結果

2.2　韭菜農藥殘留量隨不同采樣時期的變化

以不同采樣時期為劃分標準，對60份韭菜樣品的農殘檢測數據進行整理，比較3個地區（太原及周邊、晉北和晉南）韭菜中農藥殘留量隨種植和收獲期的變化規律。結果表明，多菌靈、腐霉利、甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯是太原及周邊地區韭菜種植過程中容易使用的4種農藥，6～11月期間，這4種農藥的檢出率分別為9.1%、24.2%、15.2%和21.2%，超標率分別為0、18.2%、3.0%和3.0%。其中（高效）氯氟氰菊酯和腐霉利的超標均發生在10～11月，多菌靈的檢出主要發生在10月，甲氰菊酯的檢出和超標發生在8～9月。可見多菌靈和腐霉利的使用高峰期為10～11月，主要用于殺菌；甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯用于殺蟲殺螨，但前者使用高峰期為8～9月，后者使用高峰期為10月。

相似的情況也出現在晉北地區，該地區腐霉利的檢出和超標均發生在10月，且腐霉利的檢出率為38.5%，超標率為23.1%。對于晉南地區來說，6～8月以（高效）氯氟氰菊酯的使用為主，用于殺蟲殺螨，但平均使用量并未超標。其次，該地區在夏季還會適量配合使用腐霉利，還存在使用禁用農藥六六六的現象。

綜上所述，山西省韭菜種植中使用比較多的農藥是吡蟲啉、敵敵畏、多菌靈、腐霉利、甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯，且一般來說夏季韭菜在生長過程中以使用殺蟲劑為主，而冬季則多使用殺菌劑。本試驗發現，韭菜種植過程中農藥的殘留超標主要發生在10～11月期間，應當加強此期間內市售韭菜的質量安全管理。

2.3　韭菜農藥殘留量隨不同采樣區域的變化

以不同采樣區域為劃分標準，以韭菜中使用較多的6種農藥〔吡蟲啉、敵敵畏、多菌靈、腐霉利、甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯〕為目標，比較同一采樣時期內韭菜中平均農藥殘留量隨不同采樣區域（太原及周邊、晉北和晉南）的變化規律。由圖1可知，6～7月，太原及周邊地區的農藥殘留量與晉南地區相近，但使用的農藥種類明顯不同：6月太原及周邊地區以使用甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯2種殺蟲殺螨劑為主，而晉南地區以使用腐霉利殺菌劑為主；7月后，太原及周邊地區將甲氰菊酯、（高效）氯氟氰菊酯和敵敵畏三者配合使用，而晉南地區則以使用（高效）氯氟氰菊酯為主。8月后，太原及周邊地區的農藥殘留水平明顯高于晉南地區，但均未超出標準規定的最大允許限。10月太原及周邊地區與晉北地區的腐霉利殘留量均超標，但前者的超標量遠高于后者。

2.4　韭菜農藥殘留量隨不同銷售方式的變化

以不同銷售方式為依據，以韭菜中使用較多的6種農藥〔吡蟲啉、敵敵畏、多菌靈、腐霉利、甲氰菊酯和（高效）氯氟氰菊酯〕為目標，比較太原及周邊地區在同一采樣時期內韭菜中農藥殘留量隨不同銷售方式（農貿市場和超市）的變化規律。不同銷售方式下韭菜農藥殘留量無明顯規律，即農貿市場與超市韭菜樣品中農藥殘留的檢出率相近（圖2），但農藥殘留的超標率差別較大，其中前者超標率為27.3%，后者超標率為9.1%，說明農貿市場與超市所流通的韭菜中均存在農藥殘留，但超市中韭菜的安全性要略高于農貿市場。

圖2　韭菜中農藥殘留量隨韭菜銷售方式的變化

3　結論與討論

本試驗發現，對于太原及周邊地區（包括榆次、汾陽、離石、陽泉）來說，10～11月為農藥使用投入最多的月份，其中以腐霉利的使用最多，使得10～11月該地區有6份樣品腐霉利超標，有的超標高達數十倍。而9月使用比較多的是甲氰菊酯，這就提示質量監督部門應當于每年9～11月，加強太原及周邊地區市售韭菜中腐霉利和甲氰菊酯的檢測，同時也提示該地區內的消費者在此期間內選購韭菜時，要額外注意韭菜的清洗。腐霉利屬于低毒性殺菌劑，兼具保護和治療作用，可用于防治韭菜的灰霉病，灰霉病會隨著晝夜溫差和濕度的加大而加重，隨著10月后氣候的轉變，為了有效預防灰霉病，菜農會適度使用腐霉利（石鳳梅，2014；余婧和周彬彬，2017）。但山西省種植韭菜的菜農在合理和安全使用農藥方面尚缺乏有效的指導，存在超量用藥的不良現象。雖然腐霉利屬于低毒農藥，但隨著該農藥用量的逐年增多，其殘留量勢必會得到一定程度的蓄積，終將給人類及生存環境帶來極大的危害，因此并不可因其毒性低而在使用時隨意加大劑量和使用次數。

本試驗還分析了韭菜中農殘量與銷售方式之間的關系，發現農貿市場韭菜的超標率高于超市，這可能與2個環節管理與監管模式的不同有關。農貿市場運行機制不健全，監管難度較大，因此導致蔬菜農藥殘留超標率較為嚴重；超市有健全的管理和行政體制，要求進入賣場的農產品提供有效的檢驗報告，在一定程度上保證了產品的質量。需要說明的是，本試驗所采集的韭菜樣品均為普通食品，并未涉及到綠色、有機或無公害等認證食品，因此本試驗的結論僅適用于普通的韭菜產品。

本試驗建立了韭菜中12種農藥的QuEChERS快速檢測方法，該方法快速、高效，且可一步式完成定性與定量。利用所建立的方法對流通于山西省農貿市場與超市中的60批韭菜樣品進行了檢測，著重從不同采樣時間、采樣區域和銷售方式3個方面對所得結果進行分析，結果顯示市售韭菜樣品中農藥殘留的總檢出率為80%，超標率為20%，腐霉利超標是韭菜產品不合格的主要因素。農業相關部門應當加強韭菜種植環節的管理，加大安全用藥的宣傳和指導，同時加強在流通環節對韭菜農藥殘留的監管，建立健全相關的管理和運行機制，保障市售韭菜產品的安全，促進韭菜產業的健康可持續發展。

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