Caspase—3在不同分期翼狀胬肉上皮細胞中表達的研究

唐彥慧　彭子春　唐琪

摘 要：目的 探討Caspase-3在不同臨床分期的翼狀胬肉中的表達和意義。方法 采用免疫組化Elibision法檢測20例靜止期翼狀胬肉、20例活動期翼狀胬肉、10例正常結膜中上皮細胞中Caspase-3的表達。結果 Caspase-3在翼狀胬肉上皮細胞中為低表達，和正常對照組差異有統計學意義（P<0.05），靜止期和活動期翼狀胬肉組間差異無統計學意義（P>0.05）。結論 Caspase-3在翼狀胬肉上皮細胞中為低表達，提示翼狀胬肉的發生、發展有可能和上皮細胞凋亡和增殖異常有關。

關鍵詞：Caspase-3；翼狀胬肉；臨床分期；免疫組織化學

中圖分類號：R777.33 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.03.022

文章編號：1006-1959（2018）03-0071-02

Abstract：Objective To investigate the expression and significance of Caspase-3 in pterygium at different clinical stages.Methods 20 cases of quiescent pterygium and 20 cases of active pterygium were detected by immunohistochemical Elibision method. Expression of Caspase-3 in epithelial cells of 10 cases of normal conjunctiva.Results The expression of Caspase-3 was low in pterygium epithelial cells.There was significant difference between pterygium group and normal control group（P<0.05），but there was no significant difference in pterygium between static and active stage（P>0.05）.Conclusion The low expression of Caspase-3 in pterygium epithelial cells suggests that the occurrence and development of pterygium may be related to the abnormal apoptosis and proliferation of pterygium cells.

Key words：Caspase-3；Pterygium；Clinical staging；Immunohistochemistry

翼狀胬肉（pterygium）是一種只發生在人類的常見眼表疾病，是臨床上最為常見的眼科疾病之一[1]。研究表明，翼狀胬肉的發生發展在一定程度上來說與腫瘤的病因——異常增生與凋亡的失衡有相近之處[2]，過度增殖和凋亡的減弱導致了結膜上皮細胞的增生和翼狀胬肉的生長。我們應用免疫組織化學方法檢測翼狀胬肉組織中凋亡相關基因Caspases-3表達，旨在探討凋亡基因產物在翼狀胬肉發病機理中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2015年1月～2017年6月住院的20例靜止期翼狀胬肉和20例活動期翼狀胬肉患者的手術標本。本研究課題已經過醫院倫理委員會審核。活動期為組織肥大并充血，血管增粗增大，頭部區隆起，角膜有浸潤；靜止期為組織菲薄，無充血，無或存在少許纖維血管，頭部平坦，角膜透明。對照組為10例正常結膜組織，采集于視網膜脫離、外傷等患者，年齡40～60歲，所有病例均無其他角膜、結膜疾患。

1.2方法 標本經10%中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋。取組織蠟塊制成3～5 μm的切片。以PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照購自公司。

1.3結果判斷 陽性細胞為呈棕黃色顆粒的陽性反應產物。每例標本光鏡下任取5個視野進行細胞計數，至少計數500個細胞，以陽性細胞占細胞總數的百分比表示陽性表達程度。0%～5%為陰性（-），6%～10%為弱陽性（+），>10%為陽性（++）。

1.4統計學方法 所有統計學資料使用SPSS16.0軟件統計，計數資料采用χ2檢驗，等級資料采用非參數檢驗中的Mann-Whitney U法，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 HE染色 正常結膜的上皮層由非角化復層鱗狀上皮構成，上皮下見疏松的結締組織，可見排列規整的毛細血管組織、淋巴組織和散在少量的炎性細胞。翼狀胬肉的上皮層鱗狀上皮增生明顯，纖維結締組織、新生血管組織增多且排列紊亂，這些特征在活動期翼狀胬肉組織中表現得更加明顯。

2.2 Caspase-3在翼狀胬肉及正常結膜中的表達 光鏡下，棕黃色陽性顆粒位于細胞核，陽性細胞呈隨機分布。片狀分布于上皮層及上皮下纖維層，但主要見于上皮基底層。正常結膜中未見到表達，見圖1。圖2為翼狀胬肉細胞上皮中低表達Caspase-3的典型樣本。靜止期組和活動期組中，Caspases-3表達與正常對照組對比差異有顯著性，蛋白表達在兩組組間對比則差異無顯著性，表明翼狀胬肉中存在Caspases-3表達失衡，見表1。

3討論

翼狀胬肉是一種慢性增生性眼病。翼狀胬肉在臨床上分為活動期和靜止期[3]，越來越多研究表明，翼狀胬肉的發生發展在一定程度上來說與腫瘤的病因——異常增生與凋亡的失衡有相近之處。我們通過對Caspases-3在冀狀胬肉上表達的觀察，旨在進一步探討其發病機制。作為凋亡機制中重要的效應子成分，Caspase家族參與多種與凋亡有關的生理和病理過程[4-6]，這是一個一旦被激活便不可逆的啟動細胞程序性死亡程序的執行階段，所以說Caspase蛋白家族是細胞程序性死亡的主要“執行者”。