金蛭方對缺血性中風大鼠血清及腦組織SOD活性和MDA含量的影響

1.河北省遷安市中醫醫院，河北 遷安 064400；2.河北省遷安市人民醫院，河北 遷安 064400；3.河北中醫學院，河北 石家莊 050000

缺血性中風約占中風病的30%，其發病率高、致殘率高和死亡率高，給家庭及社會造成極大負擔。氧化應激學是缺血性腦血管病的病理生理機制之一[1]。金蛭方系課題組經過10余年臨床篩選出的治療缺血性中風的效方，擬通過建立大鼠急性腦缺血再灌注模型，觀察金蛭方對大鼠血清及腦組織中SOD活性及MDA含量的影響，以探討其抗氧自由基水平方面的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 健康雄性SD大鼠60只，清潔級，體重250～300 g，由河北省實驗動物中心提供，合格證號：1119069。

1.2 藥物與試劑 金蛭方組成：水蛭、郁金、川芎、冰片(由遷安市中醫醫院制劑室制備)，上4味除冰片外水提濃縮成高、低劑量后加入相應研磨冰片，所含生藥分別為：0.30 g/mL(高劑量)、0.15 g/mL(低劑量)。尼莫地平片(國藥準字：H41022175，規格：20 mg/片，鄭州瑞康制藥有限公司)配制成0.001 g/mL水溶液。

水合氯醛注射液(批號：20120206，上?；瘜W試劑公司)；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(批號：20130704)、丙二醛(MDA)試劑盒(批號：20130709)均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 MSE-25型高速冷凍離心機(上海安亭科學儀器廠)，LAUDA-C3型循環恒溫水浴箱(泰克儀器有限公司)，F6/10型超細勻漿機(上海弗魯克流體機械制造有限公司)，AR1140型電子分析天平(Ohaus USA)，722型光柵分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)。

1.4 造模方法 參考改良的Longa法[2]：頸部正中切口，用3-0手術絲線結扎頸外動脈(ECA)遠端及枕動脈，在結扎線距分叉部2 mm處剪斷ECA，將一端已加工成光滑球形的尼龍線從ECA殘端插入進行結扎，將尼龍線經頸總動脈(CCA)分叉部插入頸內動脈(ICA)，此時松開CCA，ICA套線恢復血流，線栓推送順滑，無出血。將線栓向上深入至分叉以上18～19 mm達到大腦中動脈開口處，將頸總動脈連同尼龍線一起結扎，縫合切口后外留尼龍線0.5 cm，放到單籠中，2 h后外拉尼龍線使其球端回至ECA進行缺血后再灌注。

1.5 分組與給藥[3]60只大鼠自由進食飲水，飼養于18～22 ℃明暗各12 h的清潔級動物實驗室內，喂養1周后，隨機分為5組。①假手術組：手術時僅作頸部手術切口，鈍性分離頸前肌，游離暴露頸總、頸外、頸內動脈，術后當日灌服蒸餾水。②模型對照組(簡稱模型組)：造模當日灌服蒸餾水。③金蛭方低劑量組(簡稱低劑量組)：造模當日灌服金蛭方，每日用藥劑量為1.5 g/kg(相當于成人劑量的10倍)。④金蛭方高劑量組(簡稱高劑量組)：術后當日灌服金蛭方，每日用藥劑量為3.0 g/kg(相當于成人劑量的20倍)。⑤性藥尼莫地平片對照組(簡稱對照組)：術后當日灌服尼莫地平片，每日用藥劑量為0.01 g/kg(相當于成人劑量的20倍)。各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1 mL/100g計算，連續給藥2周。

1.6 檢測方法 實驗2周末，于最后一次給藥禁食12 h后，戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血5 mL，注入離心管中待凝固后，4 ℃，3000 r/min離心，10 min，分離血清，-20 ℃保存備用。取血后，迅速斷頭冰浴中取右側大腦額葉皮層同一位置取腦組織100 g，濾紙吸干血跡，盡快加入預冷的生理鹽水碾磨，制成組織勻漿，4 ℃3000 r/min離心，15 min，取上清液，-20 ℃保存備用。放免法檢測血清及腦組織中SOD活性和MDA的含量，具體操作嚴格遵照試劑盒說明書。

2 結 果

模型組大鼠血清、腦組織中SOD活性較假手術組明顯降低(P<0.01)；MDA含量均較假手術組明顯升高(P<0.01)。用藥后各治療組大鼠血清和腦組織中SOD活性明顯升高(P<0.05，P<0.01)；MDA含量明顯降低(P<0.05，P<0.01)。高、低劑量組在增強SOD活性和降低MDA含量方面的作用優于對照組(P<0.05)。詳見表1。

組別鼠數 血清 腦組織勻漿 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot假手術組12281.33±10.24**3.88±0.57**88.61±6.66**166.38±16.19**模型組11187.12±9.888.16±0.9937.89±3.91240.71±15.86高劑量組10264.84±9.65**▲3.92±0.64**▲79.19±5.49**▲172.52±16.05**▲

組別鼠數 血清 腦組織勻漿 SOD/U/mLMDA/nmol/mLSOD/NU/ngprotMDA/nmol/mgprot低劑量組11258.67±9.47**▲4.10±0.78**▲70.12±4.88**▲185.63±15.94**▲對照組12237.14±8.14*4.55±0.84**55.61±4.67*200.38±15.67*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與對照組比較，▲P<0.05。

3 討論

中風病臨床癥候學研究認為，缺血性中風患者多是在氣血內虛的基礎上，加之勞倦內傷、憂思惱怒、嗜食厚味、煙酒等誘因，導致氣血逆亂，直沖犯腦，致氣血瘀滯，腦脈痹阻。氣滯、血瘀、絡阻為本病的主要病機，“氣行則血行”，行氣、活血、通絡為其有效治則。院內制劑“金蛭膠囊”(制劑號：冀藥制字Z20051013)治療缺血性中風10余年，療效滿意。方中水蛭破血逐瘀、通經活絡，《本草匯言》曰：“水蛭逐惡血、散瘀血之要藥也”；郁金行氣活血，化痰降火，《本草匯言》曰：郁金其性清揚，能散郁滯，順逆氣，上達高巔，善行下焦；川芎行氣活血，歷代醫家認為其善治中風病，稱為治風圣藥[4]；冰片醒神通竅，《本草衍義》：“芳香走竄，引藥上行，獨行則勢弱，佐使則有功”，四藥合用，共奏活血、化瘀、通絡之功。

氧自由基損傷是缺血性卒中發生發展最重要且肯定的因素之一[5]。正常機體內自由基水平保持相對穩定，當腦缺血缺氧時，體內自由基產生、清除的平衡狀態遭到破壞，使得自由基迅速大量產生，細胞膜的膽固醇含量耗竭，從而破壞神經細胞膜的完整性，最終導致細胞壞死、腦水腫及其他并發癥[6]。SOD為主要的抗氧化酶之一，通過催化超氧陰離子自由基發生歧化反應阻斷自由基毒性反應[7]，清除超氧陰離子自由基，保護細胞免受損傷。MDA是脂質過氧化的代謝終產物，存在于細胞膜的不飽和脂肪酸受到自由基的作用而產生的過氧化脂質中[8]。MDA的含量間接反映出機體細胞氧自由基的受損程度[9]。

研究表明，采用線栓法復制的缺血性中風大鼠模型腦組織中SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加。用藥干預后，各治療組大鼠血清、腦組織中SOD的活性降低及 MDA的含量升高，說明金蛭方減少自由基的產生，減輕脂質過氧化反應，起到腦保護作用。在此基礎上，將對金蛭方對腦缺血再灌注損傷大鼠在抗氧自由基水平方面進行深入系統地研究。

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