汕尾市無償獻(xiàn)血者HBV HIV和HCV核酸檢測(cè)分析

吳漢鐘

無償獻(xiàn)血旨在拯救他人生命，將自身血液無私奉獻(xiàn)給社會(huì)公益事業(yè)。然而，血液傳播是病毒傳播的主要途徑之一，一旦獻(xiàn)血者血液中含有病毒，卻未能經(jīng)過篩查排除危險(xiǎn)，將會(huì)導(dǎo)致血液傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)提升[1]。血液病毒中HIV、HBV、HCV屬于危險(xiǎn)性較高的三類，針對(duì)這三種病毒的血液篩查一直是無償獻(xiàn)血過程血液標(biāo)本檢測(cè)的重點(diǎn)內(nèi)容[2]。本次研究以汕尾市無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本18776份的HBV、HIV、HCV的篩查為課題，探究酶免檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)的應(yīng)用效果。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源研究的18776份標(biāo)本均來自2016年1月—2017年5月汕尾市中心血站的無償獻(xiàn)血者，其中包括單采獻(xiàn)血者與全血獻(xiàn)血者。獻(xiàn)血者的年齡18～53歲，平均(36.7±5.2)歲。所有獻(xiàn)血者均經(jīng)過嚴(yán)格的健康檢查，要求對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行體檢和健康征詢，經(jīng)過初期篩查合格后才允許捐獻(xiàn)，研究所用標(biāo)本均在獻(xiàn)血者知情同意后方可采集留取。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器主要采用包括：URANUS AE150全自動(dòng)酶免儀一體機(jī)，設(shè)備購(gòu)自深圳愛康；浩源血液核酸篩查系統(tǒng)，主要有ABI7500熒光PCR儀，購(gòu)自美國(guó)ABI；EZbead自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)，購(gòu)自美國(guó)TBG。所有設(shè)備均經(jīng)過校驗(yàn)，處于校驗(yàn)合格期限內(nèi)，方可使用。

1.2.2 試劑采用英科新創(chuàng)(廈門)生物科技有限公司與北京萬(wàn)泰藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的2種ELISA試劑進(jìn)行HBsAg、抗-HIV、抗-HCV檢測(cè)。使用的試劑在中國(guó)藥品生物鑒定所檢驗(yàn)合格批準(zhǔn)后，方可投入使用。使用過程需要嚴(yán)格按照試劑盒的說明書執(zhí)行操作，抗HIV陽(yáng)性標(biāo)本需要送交疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行再次確認(rèn)。病毒核酸檢測(cè)采用的HIV、HCV、HBV核酸檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海浩源生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 酶免檢測(cè)18776份血液標(biāo)本均依照我國(guó)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[3], 采用英科新創(chuàng)(廈門)生物科技有限公司與北京萬(wàn)泰藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的2種ELISA試劑進(jìn)行HBsAg、抗-HIV、抗-HCV檢測(cè)。

1.3.2 核酸檢測(cè)所有酶免檢測(cè)合格的標(biāo)本再次進(jìn)行核酸檢測(cè)，采用EZbead自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)處理，取每份標(biāo)本150 μL，每8份標(biāo)本混合成1份匯集池標(biāo)本(1.2 mL/份)。在經(jīng)過EZbead自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)與ABI7500熒光PCR儀對(duì)血液標(biāo)本采取核酸定性篩查，對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行HBV、HIV、HCV核酸檢測(cè)。檢測(cè)中的每批均設(shè)置1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控和1個(gè)陰性質(zhì)控及1個(gè)外部陽(yáng)性質(zhì)控，匯集池中均含有DNA內(nèi)對(duì)照與RNA內(nèi)對(duì)照。病毒核酸檢測(cè)采用的HIV、HCV、HBV核酸檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海浩源生物科技有限公司。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 酶免檢測(cè)判定任一種試劑檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，重新取血樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，若復(fù)試任一孔表現(xiàn)為陽(yáng)性，則判定不合格[4]。所有檢測(cè)結(jié)果均根據(jù)試劑盒說明書通過邁科實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)和Liswell實(shí)驗(yàn)室管理軟件自動(dòng)判讀，其中發(fā)現(xiàn)HIV陽(yáng)性標(biāo)本立即送交疾病預(yù)防中心進(jìn)一步確認(rèn)。

1.4.2 核酸檢測(cè)判定若匯集檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為核酸陰性，匯集池中8份標(biāo)本合格；若匯集檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為核酸陽(yáng)性，則拆分檢測(cè)匯集池中的8份標(biāo)本，拆分檢測(cè)結(jié)果若為表現(xiàn)出核酸陰性，則視為NAT檢測(cè)陰性，若拆分檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)出核酸陽(yáng)性，則視為NAT檢測(cè)陽(yáng)性[5]。所有標(biāo)本接受試驗(yàn)的結(jié)果均需要根據(jù)試劑盒說明書要求由浩源integOne實(shí)驗(yàn)室管理軟件進(jìn)行自動(dòng)判讀。

2 結(jié)果

2.1 酶免檢測(cè)結(jié)果2016年1月—2017年5月采集的18776份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，在酶免檢測(cè)篩查下，存在單項(xiàng)陽(yáng)性標(biāo)本282份，占據(jù)15.02‰。這些單項(xiàng)陽(yáng)性標(biāo)本中，HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性共計(jì)212份，占據(jù)11.29‰；抗-HIV單項(xiàng)陽(yáng)性標(biāo)本8份，占據(jù)0.43‰；抗-HCV單項(xiàng)陽(yáng)性標(biāo)本62份，占據(jù)3.30‰。所有樣本中，有118份血液樣本的其他檢測(cè)指標(biāo)不合格，因此，可進(jìn)行核酸檢測(cè)的HBsAg、抗-HIV、抗-HCV酶免檢測(cè)合格血液樣本數(shù)量為18376份。見表1、表2。

表1 各時(shí)間段酶免檢測(cè)結(jié)果

2.2 核酸檢測(cè)結(jié)果經(jīng)常規(guī)檢測(cè)合格的18376份血液標(biāo)本，經(jīng)過核酸檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)存在34份匯集檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.85‰。其中經(jīng)拆分檢測(cè)中病毒核酸陽(yáng)性的有17份，另外17份拆分檢測(cè)呈陰性。而拆分核酸檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本中，HBV DNA陽(yáng)性17份，陽(yáng)性率為1.85‰。見表3。

3 討論

臨床輸血安全一直是人們關(guān)心的重點(diǎn)問題，直接關(guān)系著用血患者的生命健康。有關(guān)輸血安全的研究有很多，大部分均在血液配型輸送方面的探索，對(duì)血液來源的安全性考慮不夠充分。我國(guó)血液質(zhì)量管理在不斷的完善，無償獻(xiàn)血質(zhì)量管理也同樣在不斷完善，尤其是針對(duì)血液樣本中的病毒篩查，更是成為血液檢測(cè)合格與否的重點(diǎn)[6]。但病毒窗口期、免疫沉默、病毒變異等因素容易造成血液樣本酶免檢測(cè)發(fā)生漏檢，導(dǎo)致血液樣本存在病毒風(fēng)險(xiǎn)[7]。核酸檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，在一定程度上彌補(bǔ)了ELISA法檢測(cè)存在的不足，有助于進(jìn)一步提升血液樣本中HBV、HIV、HCV病毒的檢出率，從而保證無償獻(xiàn)血血液樣本安全，為臨床輸血安全打下基礎(chǔ)[8]。

表2 各時(shí)間段常規(guī)檢測(cè)合格份數(shù)

表3 各時(shí)間段核酸檢測(cè)結(jié)果

采用酶免檢測(cè),可有效篩查獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中的不合格血液標(biāo)本,在本次研究中經(jīng)酶免檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),共有282份標(biāo)本不合格,其他檢測(cè)不合格血液標(biāo)本有118份，因此，初步篩查樣本HBV、HIV、HCV的酶免檢測(cè)合格樣本數(shù)為18376份。但實(shí)際上，經(jīng)酶免檢測(cè)后的樣本中仍然可能存在含有HBV、HIV、HCV病毒的血液樣本，主要是因?qū)ρ簶颖具M(jìn)行酶免檢測(cè)過程可能產(chǎn)生漏檢，造成血液樣本中仍然包含不合格血樣，這會(huì)對(duì)血液的使用造成嚴(yán)重影響，可能對(duì)臨床用血安全帶來極大隱患[9]。

核酸檢測(cè)是檢測(cè)血液中是否存在病毒核酸，采用PCR技術(shù)，通過擴(kuò)增試劑及引物，覆蓋常見病毒毒株，存在較高的靈敏度。該方法能夠提升檢測(cè)特異性，有助于降低假陽(yáng)性的概率[10]。在酶免檢測(cè)后結(jié)合使用核酸檢測(cè)，有助于提升血液樣本中HBV、HIV、HCV的檢出率，降低漏檢發(fā)生率。在本次研究中，酶免檢測(cè)后采用核酸檢測(cè)，仍然測(cè)得1.85%的病毒陽(yáng)性血液樣本，這說明采用酶免檢測(cè)篩查中存在了漏檢樣本，給血液使用者帶來了病毒傳播風(fēng)險(xiǎn)。通過核酸檢測(cè)將漏檢的病毒樣本檢測(cè)出來，發(fā)現(xiàn)為17份HBV DNA陽(yáng)性。研究結(jié)果說明，針對(duì)無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本采取核酸檢測(cè)，有助于解決酶免檢測(cè)漏檢問題，提升了血液樣本的病毒檢出率，從而保證了臨床用血的安全。

綜上所述，汕尾市無償獻(xiàn)血者HBV、HCV、HIV的酶免檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)，在很大程度上提升了血液病毒檢出率，降低了病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)，提升了臨床輸血的安全性。

[1] 段學(xué)云，左江濤，焦東麗，等．輸血傳播人類免疫缺陷病毒及乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J]．中國(guó)醫(yī)藥，2015，10(4)：606-608．

[2] 李微，溫馨娜，鄭慧麗．齊齊哈爾市無償獻(xiàn)血者血液HBV、HCV、HIV酶免檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J]．中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2016，8(21)：35-36．

[3] 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)．GB18467-2011獻(xiàn)血者健康檢查要求[S]．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012．

[4] 林詩(shī)雅，王淏，李仲平，等．2015年廣州地區(qū)無償獻(xiàn)血者核酸和ELISA檢測(cè)結(jié)果分析[J]．臨床輸血與檢驗(yàn)，2017，19(2)：137-141．

[5] 王立林，盧亮，聶冬梅，等．2種核酸篩查系統(tǒng)對(duì)血清學(xué)陽(yáng)性獻(xiàn)血者檢測(cè)結(jié)果的分析[J]．中國(guó)輸血雜志，2015，28(9)：1090-1093．

[6] 陳錦艷，黃伯全，黎世杰，等．開展HBV和HCV核酸檢測(cè)條件下獻(xiàn)血者ALT篩查的意義探討[J]．中國(guó)輸血雜志，2015，28(6)：669-671．

[7] 王霞，許曉絢，吳桂丹，等．深圳地區(qū)2003—2014年獻(xiàn)血者 HIV 血液篩查結(jié)果及其窗口期確認(rèn)[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016(3)：299-302．

[8] 王勝藍(lán)，吉克春農(nóng)，魏祿川，等．開展核酸檢測(cè)后涼山地區(qū)獻(xiàn)血者HIV/HBV/HCV篩查策略探討[J]．中國(guó)輸血雜志，2016，29(7)：679-681．

[9] 劉祎，傅立強(qiáng)，朱守兵．無償獻(xiàn)血者血液病原體ELISA與核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J]．預(yù)防醫(yī)學(xué)，2017，29(6)：579-581，584．

[10] 楊剛，馬曉軍，楊文勇，等．核酸檢測(cè)技術(shù)在基層血站血液篩查中的應(yīng)用[J]．中國(guó)輸血雜志，2016，29(11)：1249-1251．