液基細胞學及細胞蠟塊聯合免疫細胞化學檢測在胸腹水細胞病理診斷中的臨床價值*

傅春玲，劉定榮，吳 彤，衛惠杰，張世瓊，李 偉，方 靜，楊 艷，劉 鳳

(重慶市涪陵中心醫院病理科 408000)

胸腹水在臨床中較為常見，通過細胞學檢查判斷其良惡性對疾病的診斷、治療及預后有重要意義。而間皮細胞形態多變，有時與惡性腫瘤細胞難以鑒別，易造成診斷困難、漏診或誤診。本文通過對胸腹水標本行液基細胞學、細胞蠟塊制片聯合免疫細胞化學檢測，探討其在細胞病理診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本科2014年6月至2016年9月胸腹水標本114例，其中胸水98例，腹水16例，男60例，女54例，年齡25～90歲，中位年齡61歲。送檢細胞量大于200 mL，同時可以做液基細胞學和細胞蠟塊制備。

1.2方法

1.2.1液基細胞學 按BD液基細胞學非婦科制片技術操作步驟制片。新鮮胸腹水標本，加入50 mL離心管1 200 r/min離心10 min,傾去上清液，加入細胞保存液混勻、固定。將固定后的細胞混懸液轉移至10 mL離心管，1 200 r/min離心10 min，傾去上清液，加入2～5倍緩沖液，吹打2～3次，取2～5滴加到固定好沉降艙的玻片上，進行常規巴氏染色。

1.2.2細胞蠟塊的制備 新鮮胸腹水標本，50 mL離心管1 200 r/min 10 min,傾去上清液，加入95%乙醇固定10～30 min，2 800 r/min離心10 min。將離心沉淀物用濾紙包裹后置于4%中性甲醛中固定，常規處理，石蠟包埋切片，HE染色。

1.2.3免疫細胞化學 即用型試劑購自福州邁新生物技術開發公司。細胞蠟塊3～4 μm切片，烤片，脫蠟、水化。EDTA高壓熱修復，冷卻，洗滌。3%過氧化氫+甲醇封閉過氧化氫酶10 min，滴加一抗，4 ℃過夜。第2天，復溫，洗滌，滴加二抗37 ℃恒溫孵育30 min。復溫，洗滌，蘇木素復染，分化，返藍。乙醇脫水，封片。

1.3統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件進行分析。計數資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1液基細胞學 液基細胞學染色對比清晰，細胞分布均勻，形態好。良性胸水中常常見淋巴細胞和間皮細胞；腺癌細胞常常成團聚集，邊緣光滑的三維立體的細胞球最常見，也可以呈梅花狀、乳頭狀和腺腔狀，核漿比增大，核異型，核染色質細膩，核仁明顯，有時可見巨核和多核瘤巨細胞，胞漿內有時可見黏液空泡。小細胞癌細胞較一致，單個或成串排列，胞漿少，細胞核小，染色深。淋巴造血系統腫瘤細胞缺乏黏附性，常常單個散在分布，胞漿稀少，核圓形或卵圓形，染色質深，異型大。增生間皮細胞三五成群，成排或成片狀、球狀、菊團狀、假腺泡狀，細胞相互擁擠，有開窗現象，細胞可以增大、核質比升高、多核、核深染、核分裂增多、核仁明顯，有時與惡性腫瘤細胞很難鑒別。114例胸腹水標本中，陰性病例37例(含炎細胞和增生細胞)，可疑陽性41例(含疑癌和疑惡性腫瘤細胞)，陽性36例(含癌和惡性腫瘤細胞)，陽性率31.58%。

2.2細胞蠟塊制片 細胞蠟塊制片背景干凈，染色對比清晰，細胞數目明顯富集，厚薄均勻，形態與液基細胞學無明顯差異。114例胸腹水標本中，陰性病例37例，可疑陽性22例，陽性55例。

2.3惡性胸腹水的細胞類型及來源分布 對細胞蠟塊可疑陽性和陽性的病例行免疫細胞化學檢查，最終確定惡性胸腹水55例，陽性率48.24%，見表1。細胞蠟塊制片結合免疫細胞化學陽性檢出率明顯高于液基細胞學制片(P<0.01)。

2.4典型病例 病例1，女，48歲，肺腺癌術后化療后。送檢胸水(圖1)及細胞蠟塊制片(圖2)查見癌細胞。免疫細胞化學顯示NapsinA(圖3)、TTF1(圖4)、CK7陽性；P40、P63陰性；CK5/6、CR、D2-40、WT1、Desmin陰性；Glut-1陽性。病例2，女，75歲。送檢腹水(圖5)及細胞蠟塊(圖6)查見癌細胞。免疫細胞化學顯示CA125(圖7)、WT1(圖8)、PAX8(圖9)、Glut-1、CK7陽性，CR、D2-40、CK5/6、CEA、CK20、Villin、CA19.9陰性。腹腔穿刺活檢示卵巢高級別漿液性乳頭狀癌。

表1 55例惡性胸腹水的細胞類型分布及組織來源

圖1 肺腺癌的液基細胞學(×100)圖2 肺腺癌的細胞蠟塊(×200)圖3 肺腺癌NapsinA表達(×200)

圖4 肺腺癌TTF1表達(×200)圖5 卵巢癌的液基細胞學(×100)圖6 卵巢癌的細胞蠟塊(×200)

圖7 卵巢癌CA125表達(×200)圖8 卵巢癌WT1表達(×200)圖9 卵巢癌PAX8表達(×200)

3 討 論

液基細胞學背景干凈，細胞分布均勻，結構清晰，染色鮮艷，是腫瘤細胞篩查的重要方法之一。現代醫學的發展，對細胞學診斷提出了更高的要求，不僅要判斷細胞良惡性，還要判斷腫瘤的來源及分型。對于無法獲取組織學標本的患者，細胞學標本還可用于腫瘤耐藥及基因檢測，為臨床提供治療依據。然而細胞學由于缺少組織學結構的支持，易受各種因素的影響，常給診斷帶來困擾，有時增生的間皮細胞形態上很類似惡性腫瘤細胞，液基細胞學又難于鑒別[1]。將漿膜腔積液制成細胞蠟塊進行切片，使細胞更接近于組織結構，并根據需求做免疫細胞化學是細胞蠟塊最大的優點。

胸腹水細胞蠟塊和免疫細胞化學檢測常常需要聯合應用抗體。calretinin、mesothelial、D2-40、CK5/6、WT1、Vim是間皮細胞的標記物[2]。Glut-1是目前已知體內最為廣泛的葡萄糖轉運蛋白，在反應性間皮細胞中不表達或低表達，在惡性間皮瘤和上皮原性腫瘤中陽性表達[3-7]。因此，在胸水中Glut-1表達陽性提示腫瘤轉移或惡性間皮瘤。胸腹水中常見的惡性腫瘤有轉移性癌、淋巴瘤、惡性間皮瘤等，其中以肺腺癌的轉移最為多見[8-11]。TTF1、Napsin A和CK7的聯合應用有助于肺腺癌的診斷[10-13]，TTF1、CgA、Syn、CD56陽性常提示轉移性肺小細胞癌[10,14]，CK7、CK20、CDX2、Villin陽性提示消化系統來源腫瘤[15-16]，卵巢漿液性癌表達CK7、CA125、PAX8、WT1[15-16]。本研究顯示，細胞蠟塊結合免疫細胞化學檢測，可有效提高細胞學陽性檢出率，為腫瘤的來源、組織學分型提供幫助。

近年來，隨著個體化治療理念的深入，應用病理組織標本進行腫瘤突變基因或蛋白表達的檢測，已成為指導靶向治療或化療藥物篩選的最可靠方法，對于無法獲取組織學標本，利用細胞學進行相應的檢測，對腫瘤的臨床治療也具有重要意義[13,17]。

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