腎型谷氨酰胺酶在小兒鼻咽癌中表達的臨床意義

劉志建

【摘要】 目的 探討腎型谷氨酰胺酶（GLS1）在小兒鼻咽癌中的臨床意義。方法 66例原發性鼻咽癌患兒， 采用免疫組化法檢測腫瘤組織中GLS1的表達， 分析其表達情況與小兒鼻咽癌患兒的各臨床病理特征之間的關系及預后。結果 GLS1表達與鼻咽癌的TNM分期密切相關（χ2=7.547， P<0.05）；GLS1高表達組患兒的總體生存率和無病生存率均明顯低于GLS1低表達患兒（P<0.05）。結論 GLS1的高表達在小兒鼻咽癌的發生發展中起到重要作用， 且與患兒的預后密切相關。

【關鍵詞】 腎型谷氨酰胺酶；鼻咽癌；預后；小兒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.08.020

腫瘤細胞代謝具有特異性， 表現為對谷氨酰胺的明顯依賴， 即“噬谷氨酰胺性”。谷氨酰胺酶（GA）是谷氨酰胺代謝過程中的關鍵酶， 在調節細胞代謝中起著關鍵作用[1]。在人體內存在兩種GA， 即GLS1和谷氨酰胺酶2型（GLS2）。GLS1在各組織器官普遍存在， 而GLS2僅在肝臟中表達；并且GLS1已經被證實在多種惡性腫瘤中表達上調[2]。因此， GLS1很有可能是多種腫瘤相關的共同蛋白。本文主要探討GLS1與鼻咽癌患兒的臨床病理特征和預后之間的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集本院耳鼻咽喉科2014年5月～2017年8月收治的66例原發性鼻咽癌患兒， 行鼻咽癌切除且經術后病理診斷為原發性小兒鼻咽癌的標本70例（失訪4例）。年齡5～15歲， 平均年齡（8.5±3.2）歲。所有患兒手術前均未接受放、化療等抗腫瘤治療。病理學分級根據Edmondson方法， TNM臨床分期按照2010年國際抗癌聯盟（UICC）制定標準。

1. 2 主要試劑 谷氨酰胺酶抑制劑968（美國Sigma公司）、兔單克隆抗體GLS1（美國Epitomics公司）、通用型免疫組化試劑盒（中國中杉金橋公司）、DAB顯色試劑盒（中國中杉金橋公司）。

1. 3 免疫組織化學檢測 GLS1檢測采用免疫組織化學SP兩步法， 二甲苯、酒精梯度脫臘， 高溫高壓熱修復抗原。3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶， 加入一抗兔單克隆抗體， 4℃過夜。通用型二抗37 ℃孵育30 min， 然后DBA和蘇木精染色。

1. 4 免疫組織化學染色結果評價 組織切片由病理科醫生盲法閱片。其評分標準基于染色的強度和比例。染色強度評分如下：0分（陰性）， 1分（弱）， 2分（中）， 3分（強）；染色比例評分如下：1分（≤5%）， 2分（5%～50%）， 3分（≥50%）。綜合評分為強度和比例分數的乘積。<5分為低表達， >5分為高表達。

1. 5 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier曲線， 生存預后影響因素采用單因素COX和多因素COX回歸模型進行分析。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 GLS1在鼻咽癌中的表達及其與臨床病理特征的關系

GLS1在鼻咽癌中的表達見圖1。GLS1表達與TNM分期具有相關性（χ2=7.273， P<0.01）， 與性別、年齡、甲胎蛋白等其他指標無關。

2. 2 GLS1表達與鼻咽癌患兒預后的關系 總體生存率Kaplan-Meier曲線顯示兩組患兒的總體生存率差異具有統計學意義（log-rank 檢驗χ2=12.646， P<0.05）， GLS1高表達總體生存率低于GLS1低表達患兒；無病生存率Kaplan-Meier曲線顯示兩組患兒的無病生存率差異具有統計學意義（log-rank 檢驗χ2=11.2， P<0.01）， GLS1高表達患兒無病生存率低于GLS1低表達患兒（P<0.05）。

2. 3 Cox風險回歸模型分析 對GLS1及相關臨床病理特征進行單因素分析顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達是影響鼻咽癌患兒總體生存率的危險因素；將三者納入多因素回歸模型， 結果顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達是影響患兒總體生存的獨立危險因素。

3 討論

鼻咽癌是世界上常見的惡性腫瘤之一， 尤其多見于我國南方地區， 目前， 每10萬人中發病人口可高達50例。近20年來， 鼻咽癌的發病率及死亡率正逐年上升， 有關流行病學調查顯示， 僅在2008年全球新發病例已達至8萬余例， 死亡率達61.1%。盡管近年診斷及治療手段發展迅速， 鼻咽癌術后5年生存率仍然較低。由于鼻咽癌的發生、發展、侵襲轉移是一個多步驟、多因素參與的復雜過程， 因此影響其上述過程和預后的因素尚未完全明確。研究發現， 代謝在腫瘤的增殖、進展、轉移等過程起到舉足輕重的作用[3]。腫瘤代謝表現為對谷氨酰胺的明顯依賴， 由于對谷氨酰胺的大量消耗， 有學者將其稱之為“氮陷阱”[4]。而GLS1是其代謝過程中的關鍵酶， 本文即研究了GLS1對小兒鼻咽癌患兒的預后。

GLS1已經被證明在多種腫瘤中表達上調， 例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結腸癌、鼻咽癌、神經膠質瘤等[5]。GLS1在多種腫瘤中上調， 因此其可能是一種致癌基因的蛋白產物。有學者[3]發現GLS1在正常肝組織、肝不典型增生結節、鼻咽癌中GLS1表達水平逐步上升， 認為GLS1的表達水平上調有可能是鼻咽癌進展的原因之一。

本研究GLS1表達與鼻咽癌臨床病理特征的相關性及患兒預后的關系。結果顯示GLS1表達與鼻咽癌的TNM 分期密切相關；總體生存率和無病生存率的預后分析結果顯示GLS1高表達患兒預后明顯差于低表達患兒（P<0.05）。COX回歸單因素和多因素模型結果顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達是影響小兒鼻咽癌患兒總體生存的獨立危險因素。

GLS1高表達與在小兒鼻咽癌的發展過程中起到重要作用。其影響患兒預后的原因可能與調節腫瘤細胞的遷移、增殖、凋亡等生物學行為有關[6]；但其表達上調的原因以及具體的調節機制仍待明確， 進一步探索其在腫瘤發生發展中的作用及機制將對腫瘤的研究起到一定的推動作用， 為抗腫瘤治療和臨床轉化提供理論依據[7-10]。

總之， GLS1的高表達在小兒鼻咽癌的發生發展中起到重要作用， 且與患兒的預后密切相關。

參考文獻

[1] 陳向軍， 黃健健， 余茲中， 等. 谷胱甘肽S 轉移酶M1和T1基因多態性與鼻咽癌遺傳易感性的Meta分析. 浙江臨床醫學， 2014（8）：1331-1333.

[2] 于秀冰， 崔剛.鼻咽癌的臨床病理分型特點及臨床意義.臨床醫學研究與實踐， 2016， 1（13）：87.

[3] 丁靜華， 蘇法仁， 薄琳， 等.鼻咽癌研究進展.國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志， 2017， 41（1）：43-46.

[4] 楊紅茹， 任培蓉， 吳敬波， 等.谷氨酰胺預防鼻咽癌化療引起的口腔黏膜反應的效果觀察.廣西醫學， 2006， 28（12）：1916-1918.

[5] 廖偉偉， 唐鎖勤， 劉英， 等.兒童鼻咽癌臨床治療研究.中國當代兒科雜志， 2013， 15（4）：273-276.

[6] Huang F， Zhang Q， Ma H， et al. Expression of glutaminase is upregulated in colorectal cancer and of clinical significance. International Journal of Clinical & Experimental Pathology， 2014， 7（3）：1093.

[7] 韓露， 林少俊， 潘建基， 等. 305例鼻咽癌調強放療預后因素分析. 癌癥， 2010， 29（2）：153-158.

[8] 韋霖， 岑信棠， 付維， 等. 鼻咽癌研究進展. 中國醫學文摘（耳鼻咽喉科學）， 2006（4）：212-215.

[9] 馬駿. 鼻咽癌治療的研究進展. 中山大學學報（醫學科學版）， 2010， 31（2）：179-185.

[10] 黃慧強. 鼻咽癌化療的研究進. 廣東醫學， 2002， 23（4）：335-337.

[收稿日期：2017-11-24]