IGF-1在乳腺癌中的表達與臨床意義

薛 晶，趙 楊，程 玉，徐樹蕾，嚴 鵬，申興斌△

（1.承德醫學院，河北承德 067000；2.承德醫學院附屬醫院）

研究表明，全球乳腺癌的發病率正以3%的速度遞增，且患者年齡正趨于年輕化[1-2]。而在中國女性惡性腫瘤中，乳腺癌發病率最高[3]。有研究表明，胰島素樣生長因子（IGF）信號系統在細胞的生長、分化、增殖、遷移及凋亡等方面發揮著極為重要的作用[4-5]。作為IGFs家族成員，IGF-1的作用主要是促進有絲分裂，調節體內激素的合成和分泌，并且還能對細胞趨化、免疫及遷移產生影響[6]。國內外的研究均表明，IGF-1在多種惡性腫瘤中高表達。為探討IGF-1在乳腺癌發生發展中的作用，本研究觀察了不同乳腺組織IGF-1的表達情況，以期豐富乳腺癌的臨床研究。

1 材料與方法

1.1 材料 承德醫學院附屬醫院2013年6月至2013年11月手術治療后經病理證實為乳腺癌的組織標本80例，乳腺纖維腺瘤60例，癌旁正常乳腺組織50例，全部患者術前均未接受放化療及藥物治療。乳腺癌患者年齡26歲-73歲，中位年齡49.5歲，均為乳腺浸潤性導管癌，病理組織學分型10例Ⅰ級、56例Ⅱ級、14例Ⅲ級，33例有淋巴結轉移、47例無淋巴結轉移，原發灶≤2.5cm的16例、原發灶＞2.5cm的64例。60例乳腺纖維腺瘤患者，年齡19歲～54歲，中位年齡48歲；50例癌旁正常乳腺組織，年齡30歲～56歲，中位年齡48歲。癌旁正常乳腺組織標本為乳腺癌術后距癌組織邊緣＞10cm以上且外觀正常的腺體組織；所有標本的收集避開炎癥部位、壞死組織，且經病理醫師確診。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色及結果評判：采用免疫組化（MaxVision）法檢測IGF-1蛋白表達。兔抗人IGF-1多克隆抗體（1：100）購自武漢博士德生物工程有限公司，即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒（羊抗鼠/兔）購自福州邁新生物技術開發有限公司。陰性對照由PBS代替，細胞質及細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性。結果判定采用Volm雙評分法[7]。

1.2.2 RT-PCR法檢測IGF-1mRNA的表達：采用Trizol一步法提取RNA，用反轉錄酶（AMV）將RNA反轉錄成cDNA。IGF-1基因上游引物（5’to3’）：TGG AGT TGG TAG ATT GCT GTT G，下游引物（5’to3’）：TAT GAA GGG AGG TGG TGG GTA T，產物大小233bp；β-actin作為內參，上游引物（5’to3’）：AGC GGG AAA TCG TGC GTG AC，下游引物：（5’to3’）ACA TCT GCT GGA AGG TGG AC，產物大小453bp。取擴增產物行2%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后，紫外熒光數字成像儀下攝像，并進行吸光度定量分析，以IGF-1與相應β-actin擴增產物條帶累積吸光度（IOD）的比值作為IGF-1 mRNA的相對表達量。

1.3 統計分析 采用SPSS 21.0統計軟件進行統計學分析，等級數據資料采用秩和檢驗，計量數據資料采用兩獨立樣本的t檢驗和單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 IGF-1蛋白及mRNA的表達情況 乳腺癌組織IGF-1蛋白及mRNA的表達均明顯高于乳腺纖維腺瘤和癌旁正常乳腺組織（P＜0.01）。見表1：

表1 不同乳腺組織IGF-1的表達情況

2.2 IGF-1表達與乳腺癌臨床病理特征的關系 乳腺癌組織IGF-1蛋白和mRNA的表達與年齡無關（P＞0.05）；與腫瘤大小、淋巴結轉移和組織學分級有關（P＜0.05）：＞2.5cm明顯高于≤2.5cm，有淋巴結轉移明顯高于無淋巴結轉移，隨著乳腺癌組織學分級的升高IGF-1蛋白和mRNA的表達逐漸升高。見表2：

表2 IGF-1表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

3 討論

乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著女性的身心健康。據統計，每年全國乳腺癌患者增加120萬，而每年因乳腺癌死亡的女性患者約50萬[8]。在全球每年新確診的病例中，中國患者占12.2%[9]。

IGF-1是由肝臟合成，由12號染色體編碼、70多個氨基酸組成，具有內分泌、自分泌及旁分泌功能的多肽單鏈[10-11]。已有研究表明，在炎癥和腫瘤的發生發展過程中IGF-1異常分泌，且在前列腺癌、卵巢上皮性癌及胃癌等多種腫瘤中，IGF-1在促進腫瘤細胞轉移及侵襲方面發揮重要作用[12-13]。另外，有研究發現，血漿中IGF-1的水平越高，發生乳腺癌的危險性越大[14]；Rollison等[15]在對美國184例女性乳腺癌的研究中也證實，患者血清IGF-1的含量與發生乳腺癌的風險性呈正相關。上述研究提示，IGF-1在多種惡性腫瘤的發生發展過程中具有重要作用。

本研究采用免疫組織化染色法和RT-PCR法檢測了不同乳腺組織IGF-1蛋白和mRNA的表達情況，并分析了IGF-1表達與乳腺癌臨床病理特征的關系。結果發現，乳腺癌組織IGF-1的表達強度明顯高于乳腺纖維腺瘤和癌旁正常乳腺組織，且蛋白水平和基因水平結果一致，推測IGF-1可能通過某種途徑參與了乳腺癌的發生、發展，其差異性表達在轉錄水平就已發生；同時本研究發現，乳腺癌組織IGF-1蛋白和mRNA的表達與腫瘤大小、淋巴結轉移和組織學分級有關，與何楊等[16]的研究結果類似，推測IGF-1可能與乳腺癌的生長、惡性程度和轉移有關。

綜上所述，IGF-1可能在乳腺癌的發生發展中發揮重要作用，提示IGF-1可能作為判斷乳腺發生發展、惡性程度和遠處轉移的標志物用于臨床，但尚需進一步地深入研究。

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