蒙古黃芪多糖含量測定的方法學研究

陳虎虎

（隴東學院岐伯醫學院，甘肅 慶陽 745000）

1 儀器及試藥

UV1601分光光度計（日本島津）、AB204-N電子分析天平（METTLER TOLEDO）、電熱恒溫水浴鍋（奧特寶恩斯儀器有限公司）、旋轉蒸發儀（無錫市星海王生化設備有限公司；D-無水葡萄糖對照品（批號：0833-9501中國藥品生物制品檢定所）、甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 多糖含量測定方法建立

照紫外-可見分光光度法《中國藥典》（2010版一部附錄VA）測定[1]。

2.1 對照品溶液的制備：精密稱取無水葡萄糖對照品適量，加水制成每1 mL含0.5 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2 標準曲線的制備：分別精密量取對照品溶液1.0 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、4.5 mL、5.0 mL，置5 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液0.6 mL，混勻，迅速加入80%硫酸3.0 mL，搖勻，于90 ℃水浴中加熱15 min，取出，放入冰浴中冷卻15 min，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在490 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.3 供試品溶液的制備[2-3]：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末（過60目篩）2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，殘渣揮干溶劑后，加水80 mL回流提取2次，每次1.5 h，濾過，取濾液，用適量水洗滌藥渣，合并至200 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用。

2.4 測定法：精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，照標準曲線的制備項下的方法，自“精密加入5%苯酚溶液0.6 mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含葡萄糖的重量（mg），計算，即得。

結果表明，該色譜條件下對照品和供試品吸光度值穩定，陰性對照品在相應吸收波長下無干擾，該色譜條件專屬性良好。

2.5 供試品的制備方法考察：在供試品溶液制備過程中對不同提取方法進行比較：

2.5.1 醇除雜：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末（過60目篩）2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，取80%乙醇索氏提取液，蒸干，殘渣用適量水溶解，濾過至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取濾過液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用。按上述“2.4”中測定法測定，吸光度值為0，表明該除雜方法可行。

2.5.2 提取

2.5.2.1 提取次數考察：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，殘渣揮干溶劑后，加水100 mL回流提取，每次1.5 h，濾過，取濾液，用適量水洗滌藥渣，合并至200 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取濾過液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用，結果提取2次后可將蒙古黃芪中多糖提取完全。

2.5.2.2 提取時間考察：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末3份，每份2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，殘渣揮干溶劑后，分別加水100 mL回流提取1.0 h、1.5 h、2.0 h各2次，濾過，取濾液，用適量水洗滌藥渣，合并至200 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取濾過液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用。按上述“2.4”中測定法測定，結果表明每次提取1.5h與2.0h相比較，多糖含量增加并不明顯，從節約成本及時間角度考慮，每次提取1.5 h即可滿足實驗要求。

2.5.2.3 溶劑用量考察：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末3份，每份2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，殘渣揮干溶劑后，分別加水50 mL、80 mL、100 mL回流提取2次，每次1.5 h，濾過，每次濾液減壓濃縮（0.1 MPa，60 ℃），濃縮液轉移至200 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取濾過液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用。按上述“2.4”中測定法測定，結果表明：以80 mL溶劑提取與100 mL溶劑提取相比，增加溶劑量多糖含量并無明顯變化，所以用水80 mL提取即可。

2.6 供試品溶液的制備方法確定：取60 ℃干燥至恒重的蒙古黃芪藥材粉末（過60目篩）2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，用80%乙醇索氏回流提取2 h，殘渣揮干溶劑后，加水80 mL回流提取2次，每次1.5 h，濾過，取濾液，用適量水洗滌藥渣，合并至200 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，備用。

3 多糖含量測定方法學研究

3.1 標準曲線的繪制：精密量取葡萄糖對照品溶液（0.493 mg/mL）1.0 mL，2.0 mL，2.5 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0 mL分別置5 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液1 mL，置10 mL具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液0.6 mL，混勻，迅速加入80%硫酸3.0 mL，搖勻，于90 ℃水浴中加熱15 min，取出，放入冰浴中冷卻15 min，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在490 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，結果見表1。

表1 標準曲線測定結果

以對照品質量為橫坐標，UV數值為縱坐標作圖，得標準曲線，見圖2。

圖2 葡萄糖標準曲線

結果表明，在對照品質量為98.52～494.60 μg，呈良好的線性關系。回歸方程為：y=0.0011x+0.0276，相關系數：r=0.9991。

3.2 精密度試驗：取供試品溶液，依法處理，連續測定6次，記錄多糖吸光度值，結果表明，本試驗中供試品吸光度值RSD為0.46%，精密度良好。

4 討 論

蒙古黃芪多糖藥理作用明顯，在蒙古黃芪的質量研究中有必要對其加以關注；本實驗采用單因素試驗比較了不同提取溶劑、提取方法和提取時間對多糖含量的影響，確定出最佳前處理方案并建立了紫外分光光度法測定蒙古黃芪多糖含量的方法；對其方法學進行研究，結果表明該含量測定方法穩定可行，受蛋白質等物質影響較小，能方便、快捷、準確的檢測樣品中多糖的含量，能夠對蒙古黃芪中總多糖含量進行控制。

[1] 董群,鄭麗伊,方積年.改良的苯酚-硫酸法測定多糖和寡糖含量的研究[J].中國藥學雜志,1996,31(9):550-553.

[2] 許會生,趙廣榮,張鐵軍等.當歸多糖的提取分離研究進展[J].江西科學,2007,25(1):42-46.

[3] 肖培根,楊世林,趙永華,等.黃芪[M].北京:中國中醫藥出版社,2001:123-124.