三顆針顆粒的急性和亞慢性毒性試驗報告

李超，房春林，楊海涵

（1.四川省新獸藥工程技術研究中心，四川 溫江 611130；2.成都農業科技職業學院，四川 溫江 611130）

目前，由大腸桿菌等細菌導致的腹瀉是畜禽養殖場廣泛流行的疾病，腹瀉嚴重者甚至脫水死亡，給養殖戶造成了較大的經濟損失。為防治畜禽細菌性腹瀉，常選用喹諾酮類、氨基糖苷類、硝基呋喃類、喹惡啉類及磺胺類等化學藥物。但由于長期不規范用藥，造成臨床上產生了大量的耐藥菌，這給臨床控制此類疾病帶來巨大的困難，人們迫切需要療效較好、快速緩解癥狀、對腸道有較好保護作用，尤其能治療耐藥性細菌引起的畜禽腹瀉的藥物。三顆針顆粒是純中藥制劑，其主要有效成分為小檗堿，有清熱燥濕、抗菌消炎、瀉火解毒等功效。實驗室前期臨床應用發現，該中藥制劑對細菌性腹瀉和胃腸炎等有不錯的療效。本試驗旨在研究三顆針顆粒對小鼠的急性、亞慢性毒性，觀察該制劑的毒性作用，以對藥物的安全性做出客觀評價，為其臨床應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試劑與設備 谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、尿酸氨（BUN）、肌酐（CRE）試劑盒，清洗液，稀釋液；主要設備包括BS-180全自動生化分析儀、BC-2800Vet獸用全自動血液細胞分析儀。以上產品均來自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司。

1.2 試驗藥物 三顆針顆粒，含1g生藥/g顆粒，由四川省新獸藥工程技術研究中心自制。

1.3 實驗動物 SPF級昆明系小白鼠120只，雌雄各半，體重18～22g，由四川省醫學科學院實驗動物研究所養殖研究室公司提供，實驗動物許可證號為：SYXK（川）2013-16。動物檢疫馴化時間為7d，室溫20～25℃，相對濕度60%，自然光照。

1.4 急性毒性試驗 根據文獻報道[1]，采用上下法測定三顆針顆粒的LD50，詳細記錄動物毒性反應情況和死亡情況，用AOT425StatPgm軟件計算半數致死量（LD50）及其近似置信區間。

1.5 亞慢性毒性試驗

1.5.1 劑量與分組 將小鼠隨機均分為4組，即三顆針顆粒高、中、低劑量組和生理鹽水對照組。根據三顆針顆粒的用藥原則，采用口服灌胃，按體重和分組計算給藥量并定時給藥，每日1次，連續給藥42d，要及時按體重變化調整給藥量。具體劑量和分組見表1。

表1 亞慢性毒性試驗分組

1.5.2 檢查項目 （1）一般指標：每天觀察小鼠的采食、飲水及健康狀況，及時記錄和分析小鼠出現的各種變化。

（2）體重：飼養期間，每周稱量小鼠體重，詳細記錄。

（3）血常規和血清生化指標：42d給藥結束后，測定紅細胞數（RBC）、白細胞數（WBC）、血紅蛋白量（HGB）、紅細胞比積（HCT）、血小板數（PLT）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）和肌酐（CRE）。

（4）臟器指數：42d給藥結束后，對照組和高劑量組分別取5只雌鼠、5只雄鼠處死，稱重。剖檢處死的小鼠，取主要器官——心、肝、脾、肺、腎，稱重，計算各臟器的相對重量（臟器重/體重），即臟器指數。

（5）組織病理學：對取下來的小鼠心、肝、脾、肺、腎進行取樣、包蠟、切片，進行組織病理學觀察。

（6）數據處理：所有數據均采用SPSS軟件進行統計學處理。

2 結果

2.1 急性毒性試驗 本實驗條件下，三顆針顆粒對小鼠灌胃給藥的LD50為149.9g生藥/kg，95%的近似置信區間為88～175g生藥/kg。給藥后，小鼠的急性毒性癥狀主要表現為自發活動減少、俯臥、呼吸急促，嚴重的死亡，解剖和病理檢查發現主要臟器無異常。

2.2 亞慢性毒性試驗

2.2.1 一般狀況 試驗期間，藥物各個劑量組和陰性對照組的小鼠，其外觀體征、行為活動、糞便性狀均正常，口、耳、眼、生殖器無異常分泌物，也未見其他異常癥狀，未出現死亡。體重與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），結果見表2。

表2 亞慢性毒性試驗中小鼠的體重變化g

2.2.2 血常規及血液生化指標 42d給藥結束后，三顆針顆粒各劑量組小鼠的血常規和血液生化指標與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。結果見表3。

表3 亞慢性毒性試驗中小鼠血常規和血清生化指標的變化情況

2.2.3 剖檢觀察和臟器指數 42d給藥結束后剖檢小鼠，未發現可疑病變，三個不同劑量組的各臟器指數與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05）。結果見表4。

表4 亞慢性毒性試驗中小鼠的臟器指數變化

2.2.4 組織病理學 將三顆針顆粒高劑量組和對照組小鼠的心、肝、脾、肺、腎組織進行病理學切片檢查，發現各器官形態結構正常，無異常的病理學變化。

3 討論

3.1 急性毒性試驗 急性毒性試驗是指短時間內對動物單次或多次給藥，觀察給藥后動物產生的毒性反應及死亡情況，引起半數致死的劑量為半數致死劑量，用LD50表示，這是評價獸藥急性毒性的常用方法[2]。進行藥物急性毒性試驗評價的一個重要指標就是評價半數致死量與藥物毒性大小的相關性[3]，本次試驗LD50為149.9 g生藥/kg，大于15 g生藥/kg，根據毒性物質等級劃分，屬于無毒性。

3.2 亞慢性毒性試驗 評價某種藥物的毒性，除了進行急性毒性試驗外還要進行亞慢性毒性試驗。通過該試驗可獲得實驗動物連續多日接觸較大劑量藥物所出現的中毒效應，為臨床使用提供參考依據[4]。體重和臟器指數值的升高或降低可以不同程度地反映藥物對動物的影響，也是衡量藥物毒性的一個重要指標。在連續用藥42d后，各組小鼠的體重與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05），說明三顆針顆粒對小鼠體重和臟器指數的影響很小。

血常規檢測主要是對血液中的紅細胞、白細胞及血小板這三個系統進行量和質的檢測與分析，是最基本的血液檢驗，其數值高低能反映動物在營養、感染或組織損傷方面的情況。肝臟和腎臟是機體重要的代謝器官，多數藥物都要經過肝臟轉化然后經過腎臟代謝排出體外，ALT、AST和TP活性是反映肝功能的重要指標[5]，肌酐和尿素氮是反映腎功能的兩個重要指標。本試驗中各給藥組小鼠的血常規和血液生化指標跟對照組相比無顯著性差異，各項指標和藥物劑量也沒有呈現出規則變化，說明三顆針顆粒對小鼠肝、腎無損傷。

4 結論

通過急性和亞慢性毒性試驗，得出三顆針顆粒屬于實際無毒級，說明該中藥制劑在臨床長期使用時不會對動物產生毒性作用。

[1] 張方舟，王益，顏文君，等.上下法與傳統急性毒性法測定薄荷油LD50的試驗研究[J].河南科技大學學報（醫學版），2012，30（4）：268-271.

[2] 農業部獸藥審評委員會.獸藥試驗技術規范匯編[M].北京：化學工業出版社，2012：84.

[3] 易愛玲，鄒福生，魏盈盈，等.復方金沙利膽顆粒藥效學及急性毒性研究[J].中國臨床藥理學雜志，2015，31（7）：560-562.

[4] 郭迎春，邸靜，胡松華，等.人參葉口服液對大鼠的亞慢性毒性試驗[J].動物醫學進展，2011，32（5）：59-63.

[5] 王貴波，王東升，謝家聲，等.射干地龍顆粒對雞的亞慢性毒性試驗[J].湖北農業科學，2013，52（4）：878-882.