子宮內膜樣腺癌組織中緊密連接蛋白Occludin和ZO-1的表達及關聯性

梁曉紅 段廣庭 袁 穎

(青海省交通醫院婦科，青海 西寧 810001)

子宮內膜癌是常發生于中老年女性，是與子宮內膜上皮不典型增生相關的腫瘤。病變可呈侵襲性生長，并可以伴有轉移〔1〕。細胞間緊密連接具有維持細胞極性、黏附性、運動性及調節分化的功能〔2，3〕。Occludin和ZO-1是與緊密連接相關的蛋白，主要位于人上皮細胞和內皮細胞連接的復合體中，正常組織細胞中表達增高，而在腫瘤中的表達下降，尤其是惡性程度高的腫瘤中表達常丟失，這為腫瘤離開原發部位提供了重要條件〔4，5〕。本實驗分析子宮內膜樣腺癌術后組織中Occludin和ZO-1的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2015年1月至2016年12月青海省交通醫院經病理學確診為子宮內膜樣腺癌，并行手術根治的患者69例為觀察組，年齡42～85歲，平均59.6歲。排除標準：①多原發癌；②伴有生殖系統先天畸形；③有遺傳性疾病。同期確診為子宮內膜復雜性增生伴不典型增生患者28例為對照組，年齡40～78歲，平均56.8歲。28例因子宮肌瘤行子宮全切后的增生期子宮內膜組織為正常對照組，年齡43～75歲，平均54.9歲。3組均留取術后蠟塊組織和臨床資料，一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2Occludin和ZO-1的檢測 術后石蠟包埋組織均切取4 μm切片，應用免疫組化方法檢測3組中Occludin和ZO-1的表達，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，均由臨床實驗室的技師進行操作，嚴格按說明書進行，做好質量控制工作，減少誤差。

1.3結果判定 Occludin和ZO-1的陽性表達部位是細胞膜，以呈現淡黃色-褐色為陽性反應細胞。依據染色強度不同分為4個等級：0分，無顯色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。根據同樣物鏡下(400倍視野)陽性細胞數的不同分為5個等級：0分，<5%；1分，5%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。將得分相乘定為最終陽性結果，以0～3分定為陰性，以>3分定為陽性。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.13組Occludin和ZO-1陽性率比較 3組Occludin和ZO-1陽性率差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

2.2觀察組不同臨床特征中Occludin和ZO-1陽性率的比較 觀察組中Occludin和ZO-1表達與腫瘤轉移密切相關，Occludin的表達與腫瘤的浸潤深度密切相關，二者均與患者的年齡、分化程度無明顯相關性。見表2。

表1 3組中Occludin和ZO-1陽性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中Occludin和ZO-1陽性率的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中Occludin和ZO-1的相關性 Occludin和ZO-1呈正相關(r=0.49，P=0.038)。

3 討 論

子宮內膜樣腺癌是來源于子宮內膜上皮細胞的惡性腫瘤，是腫瘤性演變較為典型的腫瘤，即由不典型增生到癌變到浸潤性病變，并繼發腫瘤性的轉移。在轉移前腫瘤細胞的黏附性降低，細胞連接的程度下降，細胞間的固有結構可能因黏附性下降而引發破壞，使腫瘤細胞易于離開原發灶形成轉移瘤〔6，7〕。Occludin是第一個被克隆的緊密連接跨膜蛋白，其基因定位于5q13.1，分子質量為64 kD，其表達的蛋白由504個氨基酸構成，具有4個跨膜結構域〔8，9〕。ZO-1 是第一個被確定的緊密連接相關蛋白，是膜相關鳥苷酸激酶蛋白家族成員，可以和ZO-2、ZO-3 形成復合體，并與Occludin的羧基端相互作用，將跨膜蛋白和細胞骨架連接在一起傳遞各類信號〔10，11〕。目前普遍認為，腫瘤細胞的浸潤和轉移與細胞間連接力的喪失有關〔12〕。Occludin 和 ZO-1 蛋白表達的下調或缺失，是腫瘤細胞浸潤和轉移的重要步驟〔13，14〕。Occludin 和 ZO-1在對腫瘤進展的作用過程中也可能對細胞外基質進行調節，主要通過調節基質金屬蛋白酶(MMPs)的分泌發揮這種調控作用，這時細胞外基質形成有效的降解，使腫瘤轉移的屏障形成有效的破壞，細胞在松解后穿過基底膜，形成轉移性腫瘤病灶。

本研究提示Occludin和ZO-1二者低表達時可以促進腫瘤的轉移。Occludin表達下降后可以促進腫瘤的浸潤性生長。因此兩種蛋白丟失意味著腫瘤性的病變和腫瘤不良的生物學行為。朱克超等〔15〕通過觀察食管鱗癌中Occludin和ZO-1的表達，發現二者表達下調，認為其與腫瘤的增殖、侵襲和轉移密切相關，這與腫瘤細胞緊密連接的完整性破壞有關，為腫瘤侵襲和轉移提供了可能〔16〕。本實驗說明二者不是細胞分化過程中的調節蛋白，二者在結構上可能具有同源性，在功能上具有協同作用〔10〕。也有觀點認為Occludin和ZO-1表達的變化使腫瘤的浸潤模式發生改變，即二者表達丟失后引起細胞極性紊亂，可能促進功能性腺管狀結構的丟失，使腫瘤細胞的形態更加彌漫，細胞的體積更小，易于浸潤和遷移〔17〕。

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