老年非瓣膜性心房顫動與C反應蛋白和膽固醇酯轉運蛋白基因多態性的關系

畢勇志 馬 芬

(河南大學第一附屬醫院急診科,河南 開封 475000)

老年人心房顫動(房顫)的發生率較高，冠心病、高血壓、風濕性瓣膜病、心力衰竭等是老年房顫的危險因素。房顫包括瓣膜性房顫和非瓣膜性房顫。非瓣膜性房顫是由充血性心肌病、冠心病、高血壓等并發的心房顫動，但并不是所有的上述疾病患者都并發房顫，房顫和上述疾病的嚴重程度也沒有直接關系，因此推測非瓣膜性房顫可能存在遺傳異質性〔1〕。房顫的發生和炎癥有一定關系，C反應蛋白(CRP)基因C1444T基因多態性和炎癥時的CRP水平有一定關系。有研究〔2～6〕發現CRP基因多態性和一些心腦血管疾病有相關性；心肌梗死、糖尿病、高血壓等是非瓣膜性房顫的危險因素，膽固醇酯轉運蛋白(CETP)基因TaqIB多態性和上述疾病關系密切。本研究擬探討老年非瓣膜性房顫與CRP基因C1444T和CETP基因TaqIB多態性的相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇河南大學第一附屬醫院2014年5月至2016年5月漢族老年非瓣膜性房顫患者112例作為觀察組，同期漢族老年無房顫患者112例作為對照組。本研究經該院醫學倫理委員會批準，患者在納入研究前均簽署知情同意書，同意研究的所有測試。觀察組年齡(69.3±11.4)歲，男61例，女51例，吸煙31例，飲酒34例，體重指數(25.1±1.5)kg/m2；對照組年齡(70.1±9.8)歲，男59例，女53例，吸煙35例，飲酒42例，體重指數(24.9±1.3)kg/m2。兩組年齡、性別、吸煙、飲酒、體重指數等比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

排除標準：非漢族者，年齡<60歲，研究對象之間有血緣關系者，有炎癥反應者，患有惡性腫瘤、風濕性疾病、肝腎疾病者，合并瓣膜性心臟病者等。

1.2主要試劑 DNA提取試劑盒，Taq聚合酶，DNA合成緩沖液(上海生工生物有限公司)；Mix dNTP，TaqQI限制性內切酶(天根生物有限公司)等。

1.3方法 血液采集：受試者在住院第2天清晨時采集靜脈血5 ml，抽取到EDTA抗凝管中。低溫冰凍保存，并于7 d內完成DNA提取。

制備基因組DNA：按DNA提取試劑盒步驟進行操作，將收集的全血加入細胞裂解液進行裂解，加入蛋白沉淀溶液沉淀，收集含有DNA的上清液，加入異丙醇，離心得到白色DNA沉淀，加入DNA裂解液進行DNA裂解。電泳時選擇的電泳溫度不應超過30℃，電壓80～100 V。本研究選擇 500 Ladder DNA Marker 條帶。

CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB多態性檢測：將裂解的DNA采用PCR進行擴增，CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB均進行酶切，瓊脂糖凝膠電泳確定基因型，CPR基因C1444T三種基因型為CC、TT、CT；CETP基因TaqIB三種基因型為B1B1、B1B2、B2B2。CETP基因TaqIB位點引物序列：5′-CACTAGCCCAGAGAGAGGAGTGCC-3′；3′-CTGAGCCCAGCCGCACACTAA-5′；CETP TaqIB多態性 RS 號碼為RS708272，RS序列為ACCTGGCTCAGATCTGAACCCTAACT〔C/T〕GAACCCCAGTGATTCTGGGTCTCAG。

1.4統計學方法 采用SPSS20.0軟件，組間均數比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，Logistic回歸分析CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型與老年非瓣膜性房顫的關系，非條件Logistic回歸用于校正其他危險因素可能對結果的影響。

2 結 果

2.1CPR基因C1444T基因型電泳結果 CPR基因C1444T多態性是C點-T點的突變，T為突變位點時為等位基因T，C為突變位點時為等位基因C，由此形成三種基因型，151、313 bp兩條片段為CC型；462 bp單條片段為TT基因型；151、313、462 bp三條片段為CT基因型。見圖1。

2.2CETP基因TaqIB基因型電泳結果 CETP基因TaqIB多態性是C點-T點的突變，T等位基因為突變位點時為等位基因B1，C等位基因為突變位點時為等位基因B2，由此形成三種基因型，173、353 bp兩條片段為B1B1型；532 bp單條片段為B2B2基因型；173、353、532 bp三條片段為B1B2基因型。見圖2。

1 為CC基因型，2為TT基因型，3為CT基因型圖1 CPR基因C1444T基因型酶切電泳圖

1為B2B2基因型，2為B1B1基因型，3為B1B2基因型圖2 CETP基因TaqIB基因型酶切電泳圖

2.3CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗結果 CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗，均P>0.05，表明本實驗樣本群體代表性好。見表1，表2。

2.4兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較 兩組CPR基因C1444T基因型之間比較差異有統計學意義(P<0.05)，觀察組TT基因型高于對照組。觀察組患者CPR基因C1444T T等位基因頻率高于對照組(P<0.05)。見表3。

2.5兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較 兩組CETP基因TaqIB基因型之間比較差異有統計學意義(P<0.05)，觀察組B1B1基因型高于對照組。觀察組CETP基因TaqIB B1等位基因頻率高于對照組(P<0.05)。見表4。

2.6Logistic回歸分析 將CPR基因C1444T基因型CC取值為0，CT基因型取值為1，TT基因型取值為2；將CETP基因TaqIB基因型B1B1取值為0，B1B2基因型取值為1，B2B2基因型取值為2；調整房顫的危險因素，如高血壓、糖尿病、性別、年齡、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等，兩組之間CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型比較差異有統計學意義(P<0.05)，表明漢族人群中CPR基因C1444T(T為危險因子)和CETP基因TaqIB(B1為危險因子)多態性可能和非瓣膜性房顫有相關性。見表5。

表1 CPR基因C1444T基因型Hardy-Weinberg檢驗〔n(%),n=112〕

表2 CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗〔n(%),n=112〕

表3 兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表4 兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表5 各指標Logistic回歸分析

3 討 論

人CRP基因編碼與細胞間信號傳遞及免疫系統關系比較密切。CRP水平是心血管事件的預測因子，房顫心肌組織中氧化應激和炎癥反應增加，損傷內皮功能。CRP水平是房顫的危險因素，房顫時CRP水平升高。CRP基因C1444T多態性和CRP水平關系密切，有研究〔7～9〕，發現CRP基因多態性和缺血性腦卒中等心腦血管疾病有一定的相關性。劉威等〔8〕發現，急性腦梗死患者的血清CRP升高，但急性腦梗死和CRP基因rs1205基因多態性沒有相關性；姜玉章等〔2〕結果發現，缺血性腦卒中和CRP基因變異呈負相關。但關于CRP基因C1444T多態性和老年非瓣膜性房顫相關性的研究不多。考慮到非瓣膜性房顫患者CRP水平增高，CRP基因C1444T多態性和CRP水平關系密切，那么CRP基因C1444T多態性是否和老年非瓣膜性房顫有相關性呢？本文研究發現，老年非瓣膜性房顫可能和CPR基因C1444T(T為危險因子)多態性具有相關性。

CETP基因含有15個內含子和16個外顯子，CETP的主要功能是轉運脂質，介導高密度脂蛋白膽固醇被脂肪組織攝取，參與機體對炎癥的反應〔10，11〕。CETP基因TaqIB多態性在心血管疾病中具有保護作用，CETP基因TaqIB的B2等位基因能夠引起血液中CETP水平降低，使CETP對高密度脂蛋白中膽固醇酯的轉移作用降低，血液中低密度脂蛋白水平下降，高密度脂蛋白水平升高，減弱血管壁的炎癥反應〔12〕。血脂和心血管疾病的發生有一定的相關性，時曉遲等〔13〕對冠心病和CETP基因TaqIB多態性的相關性進行研究，發現冠心病的發病和CETP基因TaqIB多態性沒有相關性；徐曉玉等〔10〕對腦出血與CETP基因I405V、D442G多態性的關系進行研究，發現漢族人群腦出血和CETP基因I405V多態性可能沒有關系，CETP基因D442G多態性和腦出血患者的血脂水平有一定相關性；劉欣等〔4〕對頸動脈粥樣硬化斑塊穩定性和CETP基因D442G多態性的關系進行研究，發現頸動脈粥樣硬化斑塊不穩定性和CETP基因D442G突變有一定關系。本研究結果發現：老年非瓣膜性房顫可能和CETP基因TaqIB(B1為危險因子)多態性具有相關性。CETP基因TaqIB B1等位基因為危險因子，B2等位基因為保護因子，B2等位基因可以降低血液中低密度脂蛋白水平，減輕血管壁的炎癥反應，和非瓣膜性房顫的發生呈負相關；B1等位基因和B2等位基因的作用相反，B1等位基因和高血壓、冠狀動脈疾病的發病關系密切，而房顫的發生和高血壓、冠狀動脈疾病關系密切。因此，考慮CETP基因TaqIB B1等位基因通過升高低密度脂蛋白水平促進血管壁的炎癥反應，進而和老年非瓣膜性房顫的發生相關。

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