蛋雞H7N9亞型禽流感抗體監測與分析

白 曉 ，張 誠 ，崔 歡 ，王學靜 ，高 磊 ，陳立功 ?，董世山 ，劉聚祥 ?

（1河北農業大學動物醫學院/農業部動物疫病病原生物學華北科學觀測實驗站，河北保定071001；2.遷安市農業畜牧水產局，河北遷安064400；3.河北省畜牧獸醫研究所，河北保定071000）

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒所引起的各種家禽及野生禽類的感染和/或疾病綜合征[1]。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)屬于正黏病毒科、A型流感病毒屬，是一種分節段的負鏈RNA病毒，由8個基因節段組成，根據AIV表面糖蛋白血凝素蛋白 (Hemagglutinin，HA)和神經氨酸酶(Neuraminidase，NA)的抗原性分為不同的亞型，迄今為止，已經出現了18種HA亞型和11種NA亞型[2、3]。根據AIV致病性不同可將AI分為高致病性、中致病性和非致病性三類。家禽感染AIV后，有的不表現明顯的癥狀，有的表現為呼吸道感染和產蛋嚴重下降，嚴重者甚至引起全身性感染，導致100%死亡[4]。2013年以前，H7N9亞型 AIV曾在國外禽類中偶有檢出[5]。2013年3月中國出現了可感染人并造成較為嚴重臨床后果的H7N9亞型AIV[6]，截止到2017年3月8日，人感染該病毒確診病例達1476例，其中1473例來自中國[7]。研究表明，該病毒的 HA基因來源于鴨群中流行的H7亞型流感病毒，NA基因來源于鴨群或者野鳥中的 N9亞型流感病毒，內部基因來源于 H9N2病毒[6、8]。然而，我國早期發現的H7N9亞型AIV對家禽具有低致病性特點[9、10]，感染的禽類表現輕微的癥狀或不表現臨床癥狀，該病毒能在人類毫無察覺和防范的情況下進行傳播，僅通過臨床癥狀觀察不能了解家禽的感染情況，因此對非免疫雞群進行血清學調查至關重要。本研究對2013年～2016年間河北省部分地區蛋雞場進行了H7N9亞型AI抗體監測及分析，以為蛋雞H7N9亞型AI的防控提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 監測樣品

于2013年～2016年，在河北省石家莊、保定、滄州3個地區71個蛋雞場隨機采集血清，共計1414份。采樣雞場均未免疫H7N9亞型AIV滅活疫苗。

1.2 試劑

禽流感病毒H7N9亞型HI試驗用抗原及陽性血清來自哈爾濱維科生物技術開發公司。無菌采取健康公雞血并用肝素抗凝，按常規制備1%紅細胞懸液，4℃保存備用。

1.3 監測方法

1.3.1 血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)試驗

所有血清經56℃滅活30min，參照禽流感病毒H7N9亞型HI試驗抗原與陰、陽性血清說明書規定的微量法，進行血清中H7N9 AIV抗體檢測。

1.3.2 判定標準

以能完全抑制4個單位抗原的血清最高稀釋倍數作為HI滴度，即血清效價。當陽性對照血清的HI效價與已知效價誤差不超過1個滴度，陰性對照血清效價不高于2 log2時，試驗方可成立。被檢血清HI效價≤3 log2判為陰性；=4 log2判為可疑（可疑樣品應重檢，重檢效價≥4 log2判為陽性，≤3 log2判為陰性）；≥5 log2判為陽性。

2 結果與分析

2013年～2016年共檢測71個蛋雞場，結果顯示H7N9抗體陽性雞群共23個，占總檢測雞群的32.39%。其中保定地區雞群H7N9抗體陽性率最高，為36.36%，滄州地區雞群H7N9抗體陽性率最低，為28.57%。3個地區不同年份，雞群H7N9抗體陽性率也不一致，2014年最高，為42.86%，2015年最低，為 18.75%，詳見表1。

表1 2013-2016年河北省3個地區雞群H7N9抗體檢測結果

2013年～2016年共檢測1414份樣品，H7N9抗體陽性血清共43份，占總檢測樣品的3.04%。監測的4年中，保定地區血清H7N9抗體陽性率最高，為3.42%，石家莊地區血清H7N9抗體陽性率最低，為2.64%。3個地區不同年份，血清H7N9抗體陽性率也不一致，2014年最高，為4.75%，2015年最低為0.94%，詳見表2。

表2 2013-2016年河北省3個地區血清H7N9抗體檢測結果

3 討論

H7N9亞型禽流感1988年首先報道在美國流行，此后幾年內被多次發現，但都是在部分地區禽類的小范圍流行。后來在歐洲的野鳥及鵝群中也發現了該病毒，但均為低致病性病毒[5]，禽類感染后無任何臨床癥狀，僅在血清檢測結果陽性時短期出現病毒排泄，也不會引起人的感染。本研究用HI方法從臨床健康非免疫蛋雞群采集的樣品中檢測到了H7N9亞型陽性血清，從血清學角度證實了調查期間河北省部分蛋雞群曾感染過H7N9亞型AIV。本次調查中曾采集雞群的咽喉拭子和泄殖腔拭子，用熒光定量RT-PCR檢測雙拭子中的H7N9亞型AIV，然而病原學檢測結果均為陰性。

病原學研究證實，2013年～2015年間我國少數養禽場存在著低致病性H7N9亞型流感病毒感染[10]。2017年1月以來，關于從我國家禽或環境采集樣本中檢測到H7N9亞型高致病性AIV的報道陸續增多[11、12、13]，這無疑對我國養禽業構成了巨大的威脅。由于高致病性禽流感具有傳播速度快、波及范圍廣、防控難度大及對人類危害嚴重等特點，所以應對本病采取嚴格的綜合性防控措施，尤其是指導養殖場戶及時提高其生物安全水平。鑒于AIV存在變異風險，相關部門應對我國禽類間傳播的所有流感病毒亞型從血清學、病原學等方面進行持續監控，以保障動物和人類健康。