比較微生物分析儀法與常規紙片擴散法在細菌耐藥表型檢測中的效果

郭東

（南充市第四人民醫院檢驗科 四川 南充 637000）

隨著越來越多的抗菌藥物在臨床中應用，細菌耐藥性問題日益加劇。在臨床應用中如何快速準確地鑒別細菌的耐藥表型，是抗生素合理使用增強治療效果的重要前提[1]。微生物分析儀法與常規紙片擴散法是臨床較常應用的細菌耐藥表型檢測方法，本研究對兩種檢測方法的細菌藥敏鑒定結果進行對比分析，為評價其臨床應用提供依據。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年6月至2016年6月培養分離的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌各500株為檢測對象。對所選細菌分別使用微生物分析儀法和常規紙片擴散法進行藥敏性檢驗。微生物分析儀法所用儀器為法國梅里埃VITEK 2 Compact全自動微生物分析儀季配套檢測板；藥敏紙片、M-H培養基、血培養基、瓊脂培養基等紙片擴散法所需材料均采購自武漢普諾賽生命科技有限公司。

1.2 治療方法

1.2.1 常規紙片擴散法 超廣譜β-內酰胺酶檢測確證試驗：配置大腸桿菌與肺炎克雷伯桿菌懸濁液，涂置于M-H培養基上按照相應操作規范進行試驗。若抑菌圈直徑的增加值大于6mm為陽性，小于6mm為陰性。

紅霉素耐藥克林霉素誘導試驗：配制相應濃度的金黃色葡萄球菌懸濁液，均勻涂于M-H培養基上。將克林霉素紙片和紅霉素紙片分別貼在M-H培養基上，兩藥邊緣相距12mm。將培養基在35℃條件下孵育24h。觀察兩張藥敏紙片，在靠近紅霉素紙片的一側的克林霉素的抑菌環如果出現截平現象，整個抑菌環形狀如字母D為陽性。若無D形抑菌環則為陰性。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌檢測試驗：制備金黃色葡萄球菌懸濁液，調至0.5麥氏比濁管，均勻涂于制備好的M-H培養基上。將頭孢西丁紙片貼于M-H培養基上，35℃孵育24小時。紙片中抑菌環直徑≥18mm則為陰性，若＜18mm則為陽性。

1.2.2 微生物分析儀法

分別取大腸桿菌及肺炎克雷伯桿菌配制成0.5麥氏單位濃度的懸濁液，使用Vitek-GN13檢測板進行檢測。配制相同濃度的金黃色葡萄球菌，用Vitek-GN67檢測板進行檢測。

1.3 評價標準

觀測記錄兩種檢測方法的檢測結果，對比兩種檢測方法的陽性率。

1.4 統計學分析

對兩種檢測方法所得到的數據采用統計學軟件SPSS 18.0進行分析，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 兩種檢測方法超廣譜β-內酰胺酶檢測陽性率比較

微生物分析儀法的檢測大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌的陽性率分別為69.8%和73.2%，高于常規紙片擴散法的69.2%和72.2%，但兩組數據對比無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種檢測方法超廣譜β-內酰胺酶檢測陽性率比較

2.2 兩種檢測方法克林霉素誘導試驗陽性率比較

兩種檢測方法分別進行克林霉素誘導實驗，微生物分析儀法的檢測陽性率為64.6%，高于常規紙片擴散法的62.2%，但兩組數據對比無顯著差異（P＞0.05）。見表2。

表2 兩種檢測方法克林霉素誘導試驗陽性率比較

2.3 兩種檢測方法耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗陽性率比較

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗中微生物分析儀法的檢測陽性率為48.8%，高于常規紙片擴散法的47.8%，兩組結果無差異（P＞0.05）。見表3。

表3 兩種檢測方法耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗陽性率比較

3.討論

微生物分析儀法和常規紙片擴散法是臨床上常用的兩種細菌耐藥表型檢測方法。微生物分析儀法是使用分析儀器與數據分析軟件的共同作用，依據特定的生物反應現象對細菌鑒定與藥敏的檢測。有研究表明[2-3]，使用全自動微生物分析儀對細菌耐藥表型進行檢測能夠快速準確地得到結果，對部分細菌檢測陽性率達到90%以上。紙片擴散法是將含有定量抗菌藥物的濾濾紙貼于已接種待測試菌的瓊脂培養皿表面，隨著紙片中的抗菌藥物在瓊脂培養基中的擴散距離的增加藥物的濃度呈對數減少，從而在紙片的周圍形成一種濃度梯度在紙片的周圍形成一定的藥物濃度梯度。在藥物擴散的同時，紙片周圍抑菌濃度范圍內的測試菌不能生長，而抑菌濃度范圍外的菌株則繼續生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈。不同抗菌藥物抑菌圈的直徑因受藥物在瓊脂中的擴散速率的影響而可能不同，抑菌圈的大小可反映測試菌對測定藥物的敏感程度。

研究表明，微生物分析儀法的超廣譜β-內酰胺酶試驗、克林霉素誘導耐藥試驗及耐甲氧西林金黃色葡萄球菌試驗檢測的陽性率與常規紙片擴散法無顯著差異（P＞0.05）。表明在細菌耐藥表型檢測中兩種方法的準確性無差別，但微生物分析儀法檢測速度快，具有方便快捷的優勢。

綜上所述，在臨床應用中微生物分析儀法與常規紙片擴散法對細菌耐藥表型檢測均能得到準確有效的檢測結果，但微生物分析儀法可以方便快捷的得到檢測結果，值得在臨床實踐中推廣應用。

[1]袁飛.細菌耐藥表型在醫院感染監測中的預警應用[J].山西醫藥雜志，2014，43(1)：105-107.

[2]孫燕萍.VITEK2Compact全自動微生物分析系統的應用及鑒定結果分析[J].現代預防醫學，2010，37(20)：3890-3893.

[3]王穎，陳芳芳，黃梅.VITEK2Compact專家系統對腸桿菌科碳青霉烯酶耐藥表型分析的問題探討[J].現代檢驗醫學雜志，2017，32(4)：101-103.