高效液相色譜法測定食品中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉

◎ 馮民賢

（柳州市產品質量檢驗所，廣西 柳州 545006）

食品是人類賴以生存和發展的物質基礎，食品安全則是影響人體健康和國計民生的重大問題。近年來，隨著食品工業快速發展，食品質量問題越來越突出，尤其是在食品加工中，超量或違規使用添加劑現象屢禁不止[1]。食品中防腐劑主要以苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽為主。防腐劑可以抑制食品中微生物的繁殖或殺滅微生物，但添加過量防腐劑，不僅會部分破壞食物中維生素B1，還能夠使鈣形成不溶性物質，影響機體對鈣的吸收，同時對胃腸有刺激作用，過量食用防腐劑還可誘發癌癥[2]。GB/T 5009.28-2003等[3-5]只能檢測一種或幾種添加劑，測定多種時需要變換儀器條件，耗時費力。為提高檢測效率，對食品安全質量進行有效控制，建立同時檢測多種食品添加劑的方法顯得尤為重要。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

SHIMADZU LC-20ATvp高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，SHIMADZU LCsolution色譜工作站；安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉（國家標準物質，濃度均為1.0 mg/mL）；色譜甲醇，天津化學試劑廠；乙酸銨、氫氧化鈉、亞鐵氰化鉀和乙酸鋅等均為分析純，實驗用水均為二次水。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱，SHIMADZU-PACK VP-ODS（250 L×4.6，5 μm）；流動相，V（甲醇）∶V（0.02 mol/L乙酸銨）=8∶92；檢測波長，230 nm；流速，1.0 mL/min；進樣量，10 μL。

1.2.2 主要溶液配制

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉為國家標準物質，濃度均為1.0 mg/mL，分別配制成濃度為0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL的標準使用液。

0.02 mol/L乙酸銨溶液：稱取1.54 g乙酸銨溶于1 000 mL容量瓶，溶解后加水稀釋至刻度，調節pH值為6.5。

0.02 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取0.8 g氫氧化鈉，用水溶解，定容至1 000 mL容量瓶中。

亞鐵氰化鉀溶液：稱106.0 g亞鐵氰化鉀，加水溶解并定容至1 000.0 mL。

乙酸鋅溶液：稱219.0 g二合水乙酸鋅，加水溶解并定容至1 000.0 mL。

實驗樣品：紅茶飲料、鹽漬蕨菜、綠豆餅、牛臘巴。

1.2.3 樣品制備

稱取5.00 g樣品，用熱水溶解，用氫氧化鈉調節pH值至中性，分別加5 mL亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液，用水定容至100 mL。靜置，離心過濾，取上清液用0.45 μm濾膜過濾，進樣。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

實驗中選用的流動相為甲醇和乙酸銨溶液，分別采用不用比例的流動相，如5∶95、8∶92、10∶90、15∶85，分別在流速1.0 mL/min進樣分析。結果表明，在體積比為8∶92的分配比下，運行時間為13 min，時間較短，各組分分離效果好，故本實驗采用此流動相體系對樣品進行測定。標準溶液中各組分出峰時間的先后順序為安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉。標準濃度為0.1 mg/mL的譜圖、樣品譜圖，分別如圖1、2所示。

圖1 4種標準液相色譜圖（從左依次為甜蜜素、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉）

圖2 牛臘巴樣品液相色譜圖（山梨酸檢出）

2.2 線性范圍及檢出限

在本實驗條件下，安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉在0～0.10 mg/mL具有良好的線性關系，見表1。按3倍基線噪聲（S/N=3）計算，該方法的檢出限分別為 0.004、0.001 8、0.001 2、0.003 g/kg。

表1 4種添加劑的線性范圍表

2.3 重復性實驗

準確稱取6份樣品加標回收，分別按照1.2.3方法進行供試品前處理，并按1.2.1設定的色譜條件進行色譜分析。對安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的峰面積的重現性進行分析，結果各組分的RSD（n=6）分別為 1.56%、2.13%、1.13%、1.82%。

2.4 加標回收率實驗

取紅茶飲料樣品5 g，分別在0.15、1.20 mg兩個加標水平下平行測定3次，加標回收率和相對標準偏差見表2。由測定結果可知，1.20 mg加標水平的回收率高于0.15 mg，4種添加劑的回收率為86.7%～100.0%，相對標準偏差（RSD）均小于4%。

表2 回收率實驗結果表

2.5 樣品的測定

對本所常檢測的紅茶飲料、鹽漬蕨菜、綠豆餅、牛臘巴分別按照1.2.3方法進行供試品前處理，并按1.2.1設定的色譜條件進行分析，每個樣品平行測定2次，結果見表3。

表3 樣品的測定結果表（單位：g/kg）

3 結語

本文建立了同時檢測食品中4種添加劑（安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸和山梨酸）的高效液相色譜法，通過流動相比例的優化，選定了合適的流動相比例，確定了色譜條件。測定結果表明，該方法分離度好，對稱性好，結果準確，操作簡單，可用于食品中多種添加劑使用的測定，大大提高了工作效率。

[1]許旭傳，劉 華.高效液相色譜法測定飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉[J].分析儀器，2008（4）：67-69.

[2]馬紅梅，王 靜.高效液相色譜法測定熟悉中山梨酸[J].中國衛生檢驗雜志，2007（11）：1936-1937.

[3]中華人民共和國衛生部.GB/T5009.28-2003 食品中糖精鈉的測定[S].北京：中國標準出版社，2003.

[4]中華人民共和國衛生部.GB/T5009.29-2003 食品中苯甲酸、山梨酸的測定[S].北京：中國標準出版社，2003.

[5]中華人民共和國衛生部.GB/T5009.140-2003 食品中安賽蜜的測定[S].北京：中國標準出版社，2003.