胃泌素釋放肽在腦膠質瘤中的表達與臨床意義

趙 波 趙 萍 關新明

膠質瘤(glioma)是中樞神經系統最常見的腫瘤，起源于神經外胚層細胞，約占人類腦腫瘤的40%～60%，具有廣泛的侵襲性及低級別向高級別轉化的趨勢，手術中全切比較困難，術后復發率高，預后差，病人生存期短，死亡率高，治療困難，是1種嚴重影響人類健康的疾病[1-2]。胃泌素釋放肽(gastrin releasing peptide,GRP)作為1種新的腫瘤標志物正逐漸應用于臨床[3]。本研究通過檢測腦膠質瘤患者GRP的表達水平變化，分析其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月在我院住院的膠質瘤患者60例作為試驗研究對象，男性30例，女性30例，年齡30～70歲，平均年齡(52.5±4.8)歲，包括Ⅰ級12例，Ⅱ級18例，Ⅲ級19例，Ⅳ級11例；同時取入組患者距離腫瘤組織5 mm處的瘤旁組織60例。正常對照組30例，包括男性15例，女性15例，年齡31～70歲，平均年齡(54.2±4.5)歲，均取自于顱腦損傷患者術中內減壓而切除的額、顳葉腦組織。所有入組患者術前均未接受過放療、化療、免疫等抗腫瘤治療，均經顯微手術全切除腫瘤。患者在性別、年齡等方面無明顯差異(P<0.05)，具有可比性。

1.2 試劑及器材

GRP ELISA試劑盒，GRP封閉液加一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)；離心機(上海飛鴿)；顯微鏡(日本Olympus)；酶標儀(英國TECNA)；脫水機(日本TIYODA)；切片機(德國Leica)；計算機圖像分析系統(美國惠普)。

1.3 觀察指標及檢測方法

1.3.1 ELISA法檢測入組患者血液中GRP含量 入組患者于術前、術后及預后過程中抽取空腹靜脈血，1 500 r/min離心10 min后吸取上清，保存于低溫冰箱中。計算板孔數；試劑盒常溫放置30 min；標準品稀釋；每個濃度均設5個復孔，加樣；配液；洗滌；顯色；終止；酶標儀以450 nm的波長處測量吸光值；繪制線性回歸方程，計算樣品濃度。

1.3.2 IHC法檢測組織中GRP的表達 福爾馬林液固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗(濃度1∶100)50 μl靜置1 h；加二抗(濃度1∶100)50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復染、分化；封片。

1.3.3 判斷標準 GRP陽性結果判定：細胞核不染色，胞膜或胞質出現棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞數≤10%為陰性(-)；11%～25%為弱陽性(+)；26%～50%為陽性(++)；>50%為強陽性(+++)。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 ELISA法檢測入組患者血清中GRP含量

膠質瘤組術前GRP含量為(1.25±0.14) ng/ml，均較正常對照組升高，差異有統計學意義(P<0.05)；膠質瘤組術后及預后期間GRP水平均較術前下降，差異有統計學意義(P<0.05)；具體結果見表1。

表1 ELISA法檢測入組患者血液中GRP含量

注：*為與正常對照組比較，P<0.05；#為與術前比較，P<0.05。

2.2 免疫組織化學法檢測入組患者腦組織中GRP的表達

膠質瘤組中14例GRP強陽性表達，30例陽性表達，陽性率為73.3%，均較瘤旁組織、正常對照組升高，差異有統計學意義(P<0.05)；且瘤旁組織GRP陽性表達率較正常對照組升高，差異有統計學意義(P<0.05)，具體結果見表2。

表2 IHC法檢測入組患者腦組織中P53、VEGF表達情況/例

注：*為與瘤旁組織比較，P<0.05；#為與正常對照組比較，P<0.05。

2.3 膠質瘤組GRP表達水平與其臨床病理特征的關系

GRP表達水平與膠質瘤病理類型、WHO分級、遠處轉移、生存時間有關(P<0.05)，與年齡、性別、PS評分無關(P>0.05)；對于膠質母細胞瘤、分級為Ⅳ級者、出現遠處轉移、生存時間≤5年的膠質瘤患者，GRP表達升高，具體結果見表3。

表3 GRP表達水平與膠質瘤臨床病理特征的關系/(例，%)

3 討論

膠質瘤是顱內最常見的惡性腫瘤，其成人發病率約為6/10萬，5年生存率約為20%～30%，具有高發病率、高復發率、高死亡率、低治愈率的特點[4]。膠質瘤預后差的主要原因在于膠質瘤大多數呈浸潤性生長，與周圍腦組織邊界不清，手術難以全部切除，術后易復發，盡管采取了放療或化療等綜合治療措施，目前為止療效仍不夠理想[5]。GRP最早在1978年由McDonald等從豬的胃組織中分離出來的，具有促胃泌素分泌的作用，是有效的促分泌素或調節肽，由27個氨基酸組成，普遍存在于非胃竇組織、神經纖維腦、肺組織的神經內分泌細胞中，通過自分泌、異常分泌、神經內分泌等方式作用于特異性的受體GRPR[6]。在本研究中，檢測膠質瘤患者CRP的表達變化，分析其臨床意義。

在本研究中，抽取入組患者外周靜脈血檢測血清GRP含量，膠質瘤組患者于術前的血清GRP水平高于正常對照組，而在術后、預后期間CRP水平較術前有所下降，但仍高于正常對照組。進一步檢測入組患者腦組織中GRP的表達，膠質瘤組患者的瘤組織中GRP陽性率顯著高于瘤旁組織、正常對照組，且瘤旁組織中GRP陽性表達率較正常對照組升高。這表明，在膠質瘤患者的血清及腦組織中均存在GRP的表達水平升高。Flores對正常人腦組織和人腦膠質瘤組織進行研究發現，正常人腦組織神經膠質細胞中未檢測到GRP的特異性受體GRPR表達，GRPR在人腦膠質瘤組織中的陽性表達率為100%[7]。在腫瘤組織中，兩者結合后通過影響信號轉導途徑刺激腫瘤的發生、增殖、血管形成及侵襲、轉移[8]。

本研究進一步對入組膠質瘤患者GRP的表達水平與性別、年齡、PS評分、病理類型、WHO分級、遠處轉移、生存時間等臨床病理特征進行比較，GRP表達水平與膠質瘤的病理類型、WHO分級、遠處轉移、生存時間有關，與年齡、性別、PS評分無關；對于膠質母細胞瘤、分級為Ⅳ級、出現遠處轉移、生存時間≤5年的膠質瘤患者，GRP的表達水平明顯升高。有實驗指出，膠質瘤組織GRP呈現高表達，隨著膠質瘤惡性分級的增加，其表達強度也隨之增加。GRP通過GRPR發揮作用，除促進生長、調節胃腸運動和激素分泌外，也參與調節晝夜節律、記憶、焦慮、恐懼反應、并與炎癥、類風濕性關節炎、退行性病變、神經精神性疾病、腫瘤相關[9]。GRP可能為與其特異性受體體GRPR結合，啟動相應的信號轉導途徑，刺激某些原癌基因的轉錄、翻譯，抑制瘤細胞凋亡，促進癌細胞增殖、新生血管生成、浸潤、轉移的發生，最終導致腫瘤的生長、侵襲、轉移[10]。

綜上所述，在膠質瘤患者血清及組織中均存在GRP的高度表達，與膠質瘤的病理類型、WHO分級、遠處轉移、生存時間有關，對于膠質母細胞瘤、分級為Ⅳ級、出現遠處轉移、生存時間≤5年的膠質瘤患者，GRP的表達水平明顯升高。GRP涉及腫瘤發生發展的各個步驟，以GRP為靶點的靶向免疫治療、靶向化療、靶向分子生物治療都是有效的抗腫瘤手段。研究者們可進一步深入探索，以GRP為靶點的各種抗腫瘤治療有望在臨床中得到應用。

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