甘草浸膏對(duì)小鼠免疫功能的影響研究*

徐海星，胡 偉

（1．武漢理工大學(xué)化學(xué)化工與生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430070； 2．江西省衛(wèi)生計(jì)生監(jiān)督所，江西 南昌 330006）

甘草為豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch．、脹果甘草 Glycyrrhiza inflata Bat．或光果甘草Glycyrrhiza glabra L．的干燥根和根莖，春、秋季采挖，除去須根，曬干而得。甘草屬多年生草本，是一種補(bǔ)益中藥。中醫(yī)認(rèn)為，甘草有益氣補(bǔ)中、緩急止痛、潤(rùn)肺止咳、瀉火解毒、調(diào)和諸藥的功效。近代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，甘草及其提取物具有抗細(xì)菌、病毒的作用[1－3]。近來的一些研究表明，甘草具有增強(qiáng)免疫力的作用[4]。甘草提取物中，研究最多的有效成分為甘草酸及其鹽類（即甘草甜素）和甘草多糖。但關(guān)于甘草提高機(jī)體免疫力量效關(guān)系的研究不多。本研究中擬以人體推薦日攝入量的10倍、20倍、30倍設(shè)置低、中、高3個(gè)劑量組，以小鼠為模型進(jìn)行試驗(yàn)，以系統(tǒng)研究甘草提高機(jī)體免疫力作用的劑量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種雌性小鼠40只，體質(zhì)量18～22 g，湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK ＜鄂 ＞2003－0005）。在溫度為 22～26℃、相對(duì)濕度為40%～70%的環(huán)境下飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK＜鄂＞2003－0014。

表1 甘草提取物對(duì)淋巴器官／體質(zhì)量比值的影響（n＝10）

表2 甘草提取物對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（n＝10）

1．2 方法

甘草浸膏提取：取甘草飲片，加水煎煮3次，每次2 h，合并煎液，放置過夜，沉淀，取上清液，濃縮至稠膏狀，干燥，磨成細(xì)粉，即得。所得原料為棕褐色的塊狀固體或粉末，有微弱的特殊臭氣和持久的特殊甜味，甘草提取得率為24%。

分組與處理：將提取所得甘草浸膏直接溶于水，配成適宜濃度，按人群推薦日攝入量 0．02 g ／kg（1．2 g ／d）擴(kuò)大10倍、20倍、30倍，設(shè)置低、中、高3個(gè)劑量組，即0．2，0．4，0．6 g／kg，將 40 只小鼠均分為空白對(duì)照組及低、中、高劑量組，對(duì)各組小鼠連續(xù)灌胃30 d，給藥體積為每10 g體質(zhì)量0．20 mL。

免疫功能檢測(cè)：根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）中的功能學(xué)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)對(duì)小鼠免疫功能進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)包括遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、淋巴器官／體質(zhì)量比值測(cè)定、碳廓清實(shí)驗(yàn)、小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、自然殺傷(NK)細(xì)胞活性測(cè)定、血清溶血素的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞檢測(cè)。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SAS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行 t檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1至表4。各組動(dòng)物間胸腺／體質(zhì)量比值和脾臟／體質(zhì)量比值無明顯差異（P＞0．05）。與空白對(duì)照組比較，甘草浸膏高劑量組小鼠刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)（P＜0．05），二硝基氟苯(DNFB)誘發(fā)的 DTH 顯著增強(qiáng)（P＜0．05），血清溶血素含量顯著升高（P＜0．05），吞噬率、吞噬指數(shù)明顯提高（P ＜0．05），小鼠碳廓清吞噬指數(shù)顯著提高（P ＜0．01），抗體生成細(xì)胞能力明顯增強(qiáng)（P＜0．05）。甘草浸膏各劑量組小鼠自然殺傷(NK)細(xì)胞活性未明顯增強(qiáng)（P＞0．05）。

表3 甘草提取物對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能及體液免疫功能的影響（n＝10）

表4 甘草提取物對(duì)小鼠碳廓清功能、抗體生成細(xì)胞功能及NK細(xì)胞活性的影響(n＝10)

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，人體精力旺盛，正氣存內(nèi)，邪不可干。甘草和中益氣，有調(diào)補(bǔ)勞損內(nèi)傷、脾氣虛弱、元陽不足、肺氣衰虛之功效，其甘溫平補(bǔ)，可增強(qiáng)免疫功能。甘草作為一種食藥兩用的原料，在食品和保健食品中已得到廣泛應(yīng)用。甘草浸膏人體推薦用量為1．2 g／d，甘草提取得率為24%，折合每人每天食用甘草飲片5 g。按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，每人每天5 g甘草對(duì)正常動(dòng)物具有增強(qiáng)免疫力的作用；《中華人民共和國藥典(一部)》規(guī)定，成人每天服用甘草的劑量為2～10 g。本研究結(jié)果表明，藥典推薦用量中位數(shù)具有免疫調(diào)節(jié)功能，為藥典的用量制訂提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

甘草含三萜類、黃酮類、生物堿類和多糖類物質(zhì)。甘草的根和根莖含三萜皂苷甘草酸，即甘草甜素，是甘草甜味的主要來源。其加水分解后可產(chǎn)生2分子葡萄糖醛酸和1分子18β－甘草次酸。甘草次酸是甘草甜素結(jié)構(gòu)中的活性部分。甘草尚含24－羥基甘草次酸等，亦含有甘草皂苷 A3，B2，C2，D3，F(xiàn)3，G2，H2，J2，K2。雖然甘草水提制得的甘草浸膏標(biāo)志性成分非常復(fù)雜，包括三萜類（甘草酸）、黃酮類（甘草黃酮）、生物堿類和多糖類物質(zhì)（中性多糖）[5－9]，但主要為甘草酸。大量研究表明，甘草酸和甘草多糖可增強(qiáng)免疫功能[8－10]。

本研究中，甘草浸膏的提取采用水煎煮3次，再經(jīng)沉淀、濃縮、干燥制成，該工藝能有效提取甘草中的多糖和甘草酸有效成分。

本研究結(jié)果顯示，高劑量甘草浸膏能明顯增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、DNFB誘導(dǎo)的小鼠DTH、小鼠血清溶血素水平、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能、小鼠碳廓清能力、抗體生成細(xì)胞能力。

但本研究中未采用免疫功能低下動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而用免疫功能低下模型更能證明甘草的扶正作用能力。

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