黃連降糖片對2型糖尿病模型大鼠IL-6及TNF-α的影響*

閆 鏞 ，龐國明 ，苗明三 ，陳倩倩 ，張瑞帥 ，朱 璞 ，武 楠

（1.開封市中醫院內分泌科，開封 475000；2.河南中醫藥大學，鄭州 450046）

2型糖尿?。═2DM）是一種常見的內分泌疾病，其發病機制尚未完全闡明，一直是研究的重點內容。近年來越來越多的研究證明炎癥因子在糖尿病的發病過程中起著至關重要的作用，炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α)、白介素-6（IL-6）是重要的糖尿病相關炎癥因子，多個研究提示TNF-α、IL-6參與了糖尿病的發生。本院自主研發的黃連降糖片，在以往的臨床研究中證實具有調節糖脂代謝，改善胰島素抵抗的作用[1-2]，但其對2型糖尿病血清炎癥因子是否有影響還未經研究證實。本實驗通過觀察黃連降糖片對T2DM模型大鼠血清IL-6、TNF-α的影響，探討其降糖機制。

1 材料

1.1 動物 健康SPF級SD雄性大鼠120只，體質量（200±25）g。購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，室溫 20～25℃，濕度 50%～65%，每日光照 12 h。

1.2 藥品與試劑 黃連降糖片（黃連、生地、知母、麥門冬、牡丹皮、酒大黃等，每片包含生藥0.3 g）由開封市中醫院制劑中心提供。鹽酸二甲雙胍片（中美上海施貴寶制藥有限公司提供）。高脂高糖飼料:南京盛民科研動物養殖場提供。鏈脲佐菌素（STZ）：美國Sigma公司。大鼠葡萄糖測試盒（由上海復興長征醫學科學有限公司提供），TNF-α、IL-6測試盒（由南京建成生物工程研究所提供）。羅氏卓越金銳血糖試紙。

1.3 儀器 奧林巴斯AU400全自動生化分析儀，BioTek Cytation3酶標儀，羅氏卓越型血糖儀等。

2 方法

2.1 造模、分組與給藥 所購大鼠普通飼料適應性喂養1周，隨機分為造模組及空白組。造模組大鼠高脂高糖飼料喂養4周，禁食12 h，腹腔注射新鮮配制的STZ溶液（45 mg/kg）以誘導T2DM?？瞻捉M注射同體積的檸檬酸緩沖液。給藥6 d后，剪尾取血，用血糖儀測空腹血糖（FBG）值，大于16.7 mmol/L為造模成功。將造模成功的大鼠隨機分為：模型組、黃連降糖片9個不同劑量組（按照成人1次1片-9片，每日3次的服用劑量分組）、陽性對照組（鹽酸二甲雙胍片）。按照人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比值（0．018）計算大鼠給藥量，最終確定黃連降糖片灌胃給藥量分別為生藥0.081、0.162、0.243、0.324、0.405、0.486、0.567、0.648、0.729 g/kg，陽性對照組予鹽酸二甲雙胍片0.2 g/kg，模型組與空白組給以等劑量的蒸餾水。

2.2 指標檢測 實驗期間，每周剪尾取血，用血糖儀測量FBG（禁食12 h，不禁水）。實驗結束后，大鼠禁食12 h后稱體質量，以水合氯醛（30 mg/kg）腹腔注射麻醉，大鼠仰臥位固定，沿腹正中線打開腹腔，經腹主動脈取血，3 500 r/min離心15 min，分離血清，置-40℃冰箱保存。采用生化儀測FBG，酶標儀測 TNF-α、IL-6水平。

2.3 統計學方法 采用SPSS 17.0軟件包進行數據統計分析，計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 黃連降糖片對T2DM大鼠血清TNF-α、IL-6的影響 灌胃治療4周后，模型組TNF-α、IL-6明顯高于空白組（P＜0．05），黃連降糖片不同劑量組，除1片組外，其余劑量組大鼠的TNF-α、IL-6水平均明顯低于模型組（P＜0．05）。說明糖尿病大鼠存在TNF-α、IL-6的升高，足量的黃連降糖片能降低2型糖尿病大鼠的血清TNF-α、IL-6含量。見表1。

3.2 不同劑量黃連降糖片對T2DM大鼠FBG的影響 造模成功后，模型組FBG明顯高于正常組（P＜0.05）。造模成功后，黃連降糖片不同劑量組與模型組FBG 無統計學差異（P＞0.05）。灌胃1、2、3周后，黃連降糖片除1、2片組外，其余組FBG明顯低于模型組（P＜0.05）。灌胃4周后黃連降糖片除1片組外，其余組FBG明顯低于模型組空腹血糖（P＜0.05）。見表2。

4 討論

糖尿病患者長期痰濕不化、血瘀不行，導致炎癥的發生，隨著炎癥的加劇，一些病理產物如痰瘀等也逐漸增多。炎癥因子既是病理產物又是致病因素，毒邪內盛是消渴病及其并發癥發生發展的基本病理機制。IL-6和TNF-α是與糖尿病相關的炎癥因子，其中IL-6可促進超敏C-反應蛋白等急性時相蛋白的合成，促進炎癥和胰島素抵抗（IR）的發生，并且在控制體重指數及體脂含量后，IL-6水平仍然與IR呈正相關，另外IL-6還可誘導胰島β細胞凋亡，對β細胞產生細胞毒效應[3]。TNF-α與糖尿病的相關性主要表現在：TNF-α可減少胰島素受體底物-1（IRS-1）的表達，并抑制IRS-1與胰島素受體結合；可減少葡萄糖轉運體4（GLUT4）的表達，直接導致IR，可促進脂解，使游離脂肪酸增加，肌細胞糖代謝降低，肝糖原合成增多，間接引起IR[4]。祁燕等[5]發現糖尿病大鼠血清中的 TNF-α、IL-6、C-反應蛋白和纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）均明顯高于空白對照組。邢茂娟等[6]研究表明在肥胖的T2DM患者血漿TNF-α與糖化血紅蛋白呈正相關，血漿IL-6與空腹血糖呈正相關。崔思遠等[7]認為高血糖可通過氧化應激反應，促進炎癥反應，增加炎癥因子的分泌，高血糖與炎癥反應是相互作用的過程。

表1 黃連降糖片不同劑量組對大鼠TNF-α、IL-6的影響（x±s）Tab.1 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on TNF-α and IL-6 level in rats（x±s）

表2 黃連降糖片不同劑量組對大鼠FBG水平的影響（x±s）Tab.2 Effect of different dosage groups of Huanglian Jiangtang tablets on FBG level in rats（x±s）

黃連降糖片以黃連為君藥，配伍酒大黃、知母、麥門冬、生地、牡丹皮等清熱滋陰、活血化瘀為主的中藥組成，方中的藥物除具有清熱解毒作用外，現代藥理研究還表明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫抑制和調節血糖等作用。研究發現，黃連素有降低糖尿病患者或糖尿病模型大鼠IL-6、TNF-α的作用[7-8]，中藥黃連復方及加減配伍可通過抑制炎癥因子（IL-6、TNF-α）的表達而發揮降糖作用，如三黃湯[9]、黃連蒼薏四味方及其配伍[10]。本研究顯示，一定量黃連降糖片有顯著降糖作用，且能顯著降低TNF-α、IL-6水平，故證實黃連降糖片具有較好的抗炎作用，其降糖機制可能與抗炎作用有關。

[1] 閆 鏞，李 霄，李亞歡，等.黃連降糖片干預糖調節受損患者糖脂代謝的臨床研究[J].中醫研究，2016,29(5):27-30.

[2] 閆 鏞，王銀珊，李亞歡，等.黃連降糖片干預糖調節受損患者胰島素抵抗的臨床研究[J].四川中醫，2016,34(5)：94-96.

[3] 張黎明，高 凌.炎癥細胞因子在2型糖尿病發病機制中的研究進展[J].重慶醫學,2016,45(8):1113-1116.

[4] 王 穎，王興亞.抗炎藥物用于2型糖尿病預防與治療的研究進展[J].藥學進展,2016,40(3):178-188.

[5] 邢茂娟，袁志剛，張海文，等.Visfatin、LI-6、TNF-α與2型糖尿病的相關研究[J].現代生物醫學進展,2011,24(29):4908-4911.

[6] 崔思遠，李 芳.IL-6與2型糖尿病關系的研究進展[J].中國微生態學雜志,2012,24(11):1051-1054.

[7] 戴建峰,陳美娟，郭 睿，黃連素對2型糖尿病大鼠CRP、LI-6、TNF-α、脂聯素的影響[J].中國傷殘醫學，2014,22(5):34-36.

[8] 孟曉軍，曾映娟，孔紅娟，等.黃連素對新診斷2型糖尿病患者內皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國慢性病預防與控制，2011,19(5):504-508.

[9] 葉麗芳，王 旭，尚文斌，等.三黃湯對肥胖2型糖尿病胰島素抵抗和炎癥因子的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2013,19(7):289-292.

[10]翁 捷，頓文亮.黃連蒼薏四味方及其配伍對2型糖尿病大鼠血糖、血脂及血清炎性因子水平的影響[J].現代中西醫結合雜志，2017,26(1):18-20.