注射用血栓通對2型糖尿病GK大鼠視網(wǎng)膜病理結(jié)構(gòu)的影響*

李芮琳，孫作艷，王金鑫，王富江，賈壯壯，王少峽，胡利民

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津市中藥藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，方劑學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

隨著中國經(jīng)濟(jì)水平的不斷發(fā)展，國民生活質(zhì)量的提高，糖尿病的發(fā)病率也有逐年提高的趨勢，目前已經(jīng)成為慢性非傳染性疾病中繼心腦血管疾病、腫瘤、呼吸道疾病之后的第4位致死性疾病。糖尿病是一種內(nèi)分泌性疾病，主要是由于胰島素分泌不足或胰島素作用缺陷引起以血糖升高為特征的代謝性內(nèi)分泌病，整個病程過程中伴隨著多種急慢性的并發(fā)癥，臨床中最常見的有心腦血管、腎、眼及神經(jīng)病變等[1-2]。糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，是糖尿病最常見最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥。其病理機(jī)制廣泛被認(rèn)為是增殖的微血管易破裂而致視網(wǎng)膜和玻璃體出血、視網(wǎng)膜脫離等從而導(dǎo)致失明[3]。糖尿病視網(wǎng)膜病變以預(yù)防為主，臨床治療中主要以改善視網(wǎng)膜微循環(huán)為主[4]。

三七為五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk．）F．H.Chen]的干燥根和根莖，主要產(chǎn)于云南、廣西、四川等地，是中醫(yī)施治中的常用藥。《本草綱目》記載其功效為：止血，散血，定痛。現(xiàn)代研究表明，皂苷類是三七的主要生物活性成分，總含量高達(dá)12%，其主要成分有有人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Ra、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh 等。現(xiàn)代化學(xué)和藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷具有鈣通道阻斷作用、抗自由基損害作用和增加器官血流量、擴(kuò)張血管、降低動脈血壓、降低心肌耗氧量、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、降低血黏度、降血脂作用。且三七總皂苷和部分單體皂苷在血液系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、物質(zhì)代謝以及抗炎等方面均有較好活性，因而被廣泛用于治療缺血性心、腦血管疾病。

注射用血栓通（凍干）為采用三七主根為原料制成的注射用粉針劑，其主要成份包括多種單體皂苷成份：人參皂苷Rg1（40%）、人參皂苷Rb1（30%）、人參皂苷 Rd（10%）、人參皂苷 Re（5%）、三七皂苷R1（5%）[1-2]。注射用血栓通具有活血祛瘀，通脈活絡(luò)，擴(kuò)張血管，改善血液循環(huán)的功能，主要用于瘀血阻絡(luò)，中風(fēng)偏癱、胸痹心痛、腦血管病后遺癥、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、內(nèi)眼病、眼前房出血等，臨床應(yīng)用廣泛。但其對糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用機(jī)制研究鮮見報道。因此本課題組對注射用血栓通防治糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用進(jìn)行了初步探索，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組 SPF級別Goto-Kakizaki（GK）大鼠購自維通利華；8周齡GK大鼠共分為3組：GK模型組5只，腹腔注射生理鹽水；血栓通50 mg組（XST-50組）5只，腹腔注射血栓通，50 mg/（kg·d）；血栓通100 mg組（XST-100組）5只，腹腔注射血栓通，100mg/（kg·d）。另設(shè)Wistar對照組6只，腹腔注射生理鹽水。

1.1.2 主要試劑與設(shè)備 注射用血栓通（凍干）（批號：Z200025652，廣西梧州制藥集團(tuán)股份有限公司）；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（北京索萊寶）；0.9%氯化鈉注射液（批號：140916YT，安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司）；20×PBS（批號：20161216，北京索萊寶生物科技有限公司）；全自動封閉脫水機(jī)（型號：ASP300S，德國LEICA公司）；生物組織包埋機(jī)（型號：BMJ-1，天津航空機(jī)電公司）；病理切片機(jī)（型號：RM2135，德國LEICA公司）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 血糖檢測 一次性采血針扎破尾尖取血，用強(qiáng)生穩(wěn)豪型血糖儀配合穩(wěn)豪型試紙檢測血糖濃度，檢測后干棉球壓迫止血，并清理傷口。

1.2.2 視網(wǎng)膜病理結(jié)構(gòu)檢測 血栓通治療60 d后，取材，對部分大鼠進(jìn)行心臟灌流、眼球固定、脫水、石蠟包埋、切片。選取視網(wǎng)膜完整的切片進(jìn)行HE染色。普通光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜各亞層的細(xì)胞形態(tài)、排列及各亞層厚度，拍照，采用ImageJ軟件進(jìn)行厚度測量。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較，若方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Dunnett’s T3檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血栓通對GK大鼠體質(zhì)量和血糖的影響 表1顯示，GK模型組大鼠的體質(zhì)量在實(shí)驗(yàn)前后都明顯低于對照組（P＜0.01）；各治療組與模型病組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。GK模型組大鼠血糖在實(shí)驗(yàn)前后都明顯高于對照組（P＜0.01）；經(jīng)治療后，與模型組相比，血栓通組有血糖降低的趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。表明尚不能認(rèn)為血栓通對模型組大鼠的體質(zhì)量和血糖造成影響。見表1。

圖1 視網(wǎng)膜切片的HE染色Fig.1 HE staining of retinal slices

2.2 血栓通對GK大鼠視網(wǎng)膜病理結(jié)構(gòu)的影響 視網(wǎng)膜完整切片的HE染色如圖1所示。采用Image J測量視網(wǎng)膜整體及各亞層（感光層、內(nèi)核層、外核層、內(nèi)網(wǎng)層、外網(wǎng)層）的厚度，如表2所示，與對照組比較，GK模型組視網(wǎng)膜明顯變薄，各亞層的厚度也明顯變薄（P＜0.01）；與GK模型組比較，經(jīng)過治療后，血栓通組感光層、內(nèi)核層、外核層和內(nèi)網(wǎng)層的厚度顯著增加，視網(wǎng)膜病變速度明顯變慢，視網(wǎng)膜皺縮程度明顯減輕（P＜0.01），且XST100組效果明顯優(yōu)于XST50組。說明血栓通可改善GK2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病理結(jié)構(gòu)。

3 討論

糖尿病已成為影響人類生活水平的重要原因，隨著糖尿病病程的延長，并發(fā)癥的發(fā)生在所難免，臨床中也主要以延緩疾病發(fā)展作為防治的主要方向。注射用血栓通是由三七主根為原料制成的粉針劑，主要成分為三七總皂苷。常用于治療中風(fēng)偏癱胸痹心痛、腦血管病后遺癥、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞等。藥理學(xué)研究表明血栓通注射液具有改善腦供血、增加腦灌注、減輕缺血所致病理損害、降低膽固醇、抑制血小板聚集、降低血黏度等多種作用[5-6]。本課題組前期研究也表明，血栓通單體成分人參皂苷Rd抑制激活的小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（iNOS）、白介素－1（IL－1）、白介素－6（IL－6）mRNA的表達(dá)，具有神經(jīng)保護(hù)作用[7]。注射用血栓通相比口服用藥，藥液可直接注入人體血管，無吸收過程及首過效應(yīng)，因而血藥濃度可迅速到達(dá)高峰發(fā)揮作用，藥效迅速，作用可靠。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)及臨床治療發(fā)現(xiàn)，很少報道三七總皂苷對糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治作用。本研究證實(shí)注射用血栓通對糖尿病視網(wǎng)膜病變有防治作用，為臨床治療提供理論依據(jù)，但其機(jī)制還需更進(jìn)一步的深入研究。

表1 血栓通對GK大鼠體質(zhì)量、血糖的影響（x±s）Tab.1 Effect of thrombosis on body weight and postprandial plasma glucose of GK rats（x±s）

表2 血栓通對GK大鼠視網(wǎng)膜病理結(jié)構(gòu)的影響（x±s）Tab.2 Effect of thrombosis on retinal pathology of GK rats（x±s）

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