中越進(jìn)出口水果擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)分析

譚 靈，凌經(jīng)昌，蔣新英，何成偉

（憑祥出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西憑祥 532600）

擬除蟲菊酯是一類仿生合成的殺蟲劑，是改變天然除蟲菊酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)衍生的合成酯類，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和日常生活中的一類殺蟲劑，具有高效、低毒、廣譜的特點(diǎn)，近年來擬除蟲菊酯類殺蟲劑的中毒事件發(fā)生較頻繁，已引起人們關(guān)注。殘留在水果中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥對人體健康危害較大，國際食品法典委員會(huì)（CAC）、農(nóng)藥殘留法典委員會(huì)（CCPR），以及歐美國家對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留限量都有具體要求，我國在GB 2763—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留量》中也明確對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在水果中的最大殘留限量要求[1]。憑借中國-東盟自貿(mào)區(qū)的建成與“一帶一路”建設(shè)的契機(jī)，中越邊境貿(mào)易水果進(jìn)出口量呈現(xiàn)迅猛增長勢頭，2011年以來我國經(jīng)廣西憑祥口岸進(jìn)出口的水果均超過100×104t，2016年更是超過了200×104t，同比增長超過40%，進(jìn)出口量占同期我國對東盟水果貿(mào)易總量的首位。由于邊境貿(mào)易具有區(qū)域性、民族性、傳統(tǒng)性和貿(mào)易方式簡單、近距離運(yùn)輸?shù)忍攸c(diǎn)，與一般貿(mào)易相比，具有多、小、快、雜的特征，疫病疫情、有毒有害物質(zhì)、不合格商品進(jìn)出境的風(fēng)險(xiǎn)程度較高。因此，應(yīng)當(dāng)建立一種適合中越進(jìn)出口水果擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測方法，以適應(yīng)口岸檢驗(yàn)檢疫把關(guān)的需求[2-4]。用擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留快速檢測儀篩查水果中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，產(chǎn)生陽性結(jié)果的樣品再通過氣相色譜法定性定量，該方法能對中越進(jìn)出口水果進(jìn)行擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留實(shí)施有效檢驗(yàn)監(jiān)管。

1 試驗(yàn)內(nèi)容

1.1 薄層色譜快速檢測法

1.1.1 材料與方法

（1） 儀器設(shè)備。GDYN-402SD型菊酯類農(nóng)殘快速檢測儀，吉大小天鵝公司產(chǎn)品。

（2） 試劑。石油醚（60～90℃）、丙酮、正己烷，均為分析純；試劑盒。

（3）試樣。憑祥口岸進(jìn)出口水果。

1.1.2 測試步驟

（1）試樣的制備。取有代表性水果可食部分樣品，切成直徑1 cm左右小塊，然后用組織搗碎機(jī)打碎。

（2） 試樣的提取。稱取5.0 g試樣放入100 mL塑料樣品提取管中，加入石油醚+丙酮（1+1） （以剛好浸沒樣品為準(zhǔn)，約15 mL），用金屬攪拌棒攪拌1～2 min，抽濾溶液全部流出后，再用5 mL石油醚+丙酮（1+1）淋洗樣品，合并提取溶液于濃縮瓶中，棄去下層溶液，保留上層溶液。

濃縮至近干，加入2 mL石油醚淋洗內(nèi)壁，倒入凈化柱，加入菊酯洗脫試劑，用5 mL濃縮瓶接取凈化液，濃縮至近干，加入0.5 mL石油醚淋洗內(nèi)壁，準(zhǔn)備點(diǎn)樣。

（3） 測試。在層析缸內(nèi)加入約13 mL菊酯展開劑，蓋好上蓋，鎖死四角。選取一張完整的薄層板，在中間位置5 cm處輕劃一鉛筆線，放入檢測儀的薄層板定位槽內(nèi)（白色薄層面朝向點(diǎn)樣器）。取出7根長度接近一致無破損的毛細(xì)管，用鑷子夾取1根毛細(xì)管，放入裝有標(biāo)準(zhǔn)溶液的玻璃瓶中，使溶液充滿整個(gè)毛細(xì)管，然后放在點(diǎn)樣器的0號通道內(nèi)，蓋緊玻璃瓶蓋，標(biāo)準(zhǔn)溶液上樣完畢，樣品上樣方式同標(biāo)準(zhǔn)溶液，6個(gè)樣品按順序從1～6排列，合上點(diǎn)樣器的保護(hù)板。設(shè)置點(diǎn)樣溫度37℃，點(diǎn)樣間隔6 s，啟動(dòng)點(diǎn)樣開關(guān)，開始點(diǎn)樣。將點(diǎn)樣后的薄層板放入層析缸內(nèi)（點(diǎn)樣端朝下，白色薄層面朝上），蓋好上蓋，鎖死四角，待溶劑前沿到達(dá)薄層板中間標(biāo)記鉛筆線時(shí)，取出薄層板，揮干試劑。

1.1.3 結(jié)果與判定

將薄層板放進(jìn)檢測儀，啟動(dòng)譜圖分析按鈕，若檢出與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)顏色、位置一致，判斷該結(jié)果可能含有菊酯類農(nóng)藥，需要進(jìn)一步進(jìn)行假陽性排除。取出薄層板，噴灑顯色劑，揮干后將薄層板置于檢測儀紫外光下照射5～10 min，取出后若斑點(diǎn)顏色與背景一致為假陽性，樣品中含有菊酯類農(nóng)藥時(shí)斑點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色（注：氯菊酯呈現(xiàn)淺黃色斑點(diǎn)）。也可以不噴顯色劑，保留薄層板，1 h后再次檢測，若發(fā)生斑點(diǎn)區(qū)域擴(kuò)大或斑點(diǎn)密度變大，可以直接判定為假陽性。

薄層背景呈綠色，菊酯農(nóng)藥呈灰色或黑色斑點(diǎn)，含量高時(shí)斑點(diǎn)變大，顏色變深。每一個(gè)陽性結(jié)果都需要用氣相色譜法進(jìn)一步定性和定量。

各種菊酯相對位置比較見圖1。

圖1 各種菊酯相對位置比較

1.2 氣相色譜檢測法

薄層色譜快速檢測法產(chǎn)生陽性結(jié)果的樣品用氣相色譜法定性和定量。

1.2.1 材料與方法

（1） 儀器設(shè)備。島津GC-2014型氣相色譜儀，配電子捕獲檢測器（ECD），日本島津公司產(chǎn)品；TDL-5-1型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；LBM-1型氮吹儀，美國產(chǎn)品；RE5299型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品。

（2）試劑。4種菊酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)：甲氰菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯，質(zhì)量濃度為100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所研制；正己烷、丙酮，均為色譜純；無水硫酸鈉，于650℃條件下灼燒4 h，干燥器內(nèi)冷卻至室溫，密封備用；弗羅里硅土，于650℃條件下灼燒4 h，使用前于130℃條件下活化4 h，干燥器內(nèi)冷卻至室溫，加1%的水脫活，備用；凈化柱，200 mm×15 mm（內(nèi)徑）玻璃柱，底部墊約5 mm脫脂棉和約20 mm無水硫酸鈉，5 g弗羅里硅土，頂端加約20 mm無水硫酸鈉，使用前用30 mL正己烷淋洗；水為二次蒸餾水或去離子水。

（3）試樣進(jìn)出口水果樣品。

1.2.2 測試步驟

（1）試樣的制備。取可食部分，用組織搗碎機(jī)搗碎。

（2） 試樣的保存。將試樣于-18℃以下保存，在制樣過程和保存過程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生待測物殘留含量的變化。

（3） 試樣的提取與凈化。稱取5 g（精確至0.01 g）試樣于50 mL離心管中，加入15 mL正己烷-丙酮（1+1）混合溶劑，以轉(zhuǎn)速5 000 r/min均質(zhì)1 min。加入4 g氯化鈉，搖勻，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心3 min，將上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移入濃縮瓶中，殘?jiān)性偌尤?5 mL正己烷-丙酮（1+1）混合溶劑，重復(fù)提取1次，合并上層有機(jī)相，在45℃以下水浴減壓濃縮至近干，待凈化。

濃縮瓶中殘留物用3 mL正己烷溶解洗滌2次，提取液移入凈化柱中，棄去流出液，用100 mL正己烷-乙醚（7+3） 混合溶劑洗脫，流速為3 mL/min，收集洗脫液，在45℃以下水浴減壓濃縮至約1 mL，轉(zhuǎn)移入離心管中，用氮吹儀吹干，加入正己烷溶解并定容至1.0 mL，供氣相色譜測定。

需要注意的是進(jìn)行空白試驗(yàn)及加標(biāo)回收試驗(yàn)時(shí)，除了不加試樣和取完試樣加標(biāo)外均按上述步驟進(jìn)行。

（4） 色譜條件。色譜柱：DB-5型石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 mm （內(nèi)徑），膜厚0.25 μm，或相當(dāng)者；柱溫：160℃保持10 min，以10℃/min升至230℃保持15 min；載氣：氮?dú)猓兌取?9.999%；流速：0.78 mL/min，尾吹氣流速60 mL/min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測器溫度：300℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系和方法檢出限

2.1.1 薄層色譜快速檢測法

根據(jù)儀器對各種農(nóng)藥響應(yīng)及菊酯類農(nóng)藥在水果中限量的情況，此快速檢測方法可以檢測聯(lián)苯菊酯、氟氰戊菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、順式氰戊菊酯、氟胺氰菊酯共11種菊酯類農(nóng)藥，檢出限均為0.5 mg/kg，結(jié)合樣品的稱樣量及定容體積，確定以上11種菊酯類農(nóng)藥方法檢出限（MDL） 均為0.05 mg/kg。

2.1.2 氣相色譜法

取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別稀釋成10，20，50，100，200 μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接進(jìn)行氣相色譜測定，峰面積對濃度作線性回歸曲線，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。甲氰菊酯線性方程為Y=691.97X+9.245 6，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；氯菊酯線性方程為Y=3 463.4X-14.043，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；氰戊菊酯線性方程為Y=1.31.6X+160.76，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；溴氰菊酯線性方程為Y=1 731.6X+1.355，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，表明4種農(nóng)藥在10～200 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

根據(jù)儀器對各種農(nóng)藥的響應(yīng)情況，以3倍信噪比確定檢出限（LOD），10倍信噪比確定定量限（LOQ），結(jié)合樣品的稱樣量及定容體積確定方法檢出限（MDL）。甲氰菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯4種菊酯類農(nóng)藥的方法檢出限均為10 μg/kg。

2.2 氣相色譜法的回收率及精密度

選擇新鮮紅毛丹、柑橘樣品，做加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)，添加10，20，100 μg/kg 3個(gè)不同質(zhì)量濃度水平，每個(gè)水平重復(fù)測定5次。同時(shí)，做樣品空白試驗(yàn)，利用保留時(shí)間定性，采用外標(biāo)法定量，扣除空白后計(jì)算加標(biāo)的回收率。

紅毛丹樣品回收率及精密度試驗(yàn)見表1，柑橘樣品回收率及精密度試驗(yàn)見表2，回收率及精密度試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)見表3，空白紅毛丹樣品色譜見圖2，空白紅毛丹樣品添加10 μg/kg混合標(biāo)樣色譜見圖3。

表1 紅毛丹樣品回收率及精密度試驗(yàn)/%

表2 柑橘樣品回收率及精密度試驗(yàn)

3結(jié)論

邊貿(mào)進(jìn)出境水果批量小、批次多，需要快速通關(guān)，而使用氣相、氣質(zhì)聯(lián)用等方法檢測農(nóng)藥殘留檢測周期較長，成本也較高，該方法結(jié)合口岸特點(diǎn)，建立了一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測方法，產(chǎn)生陽性結(jié)果的樣品再通過氣相色譜法定性定量，該方法較為科學(xué)有效地對憑祥出入境口岸進(jìn)出口水果的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行篩查。通過加標(biāo)試驗(yàn)，用快速檢測法產(chǎn)生的陽性樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗(yàn)證陽性結(jié)果的符合率達(dá)100%，加標(biāo)回收率在80.23%～96.24%，精密度也達(dá)到要求，說明這是一種能對邊貿(mào)進(jìn)出口水果擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留實(shí)施有效檢驗(yàn)監(jiān)管的方法。

表3 回收率及精密度試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)

圖2 空白紅毛丹樣品色譜

圖3 空白紅毛丹樣品添加10 μg/kg混合標(biāo)樣色譜

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[2] 劉運(yùn)龍，陳睿，李煒.擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展 [J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（10）：1 076-1 078.

[3] 沈鴻，張飛宇.快速檢測果蔬中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥含量 [J].科技促進(jìn)發(fā)展，2010（6）：159.

[4] 楊劍飛，楊張青，蘇偉波.分光光度法快速檢測蔬菜、水果中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥總量 [J].蔬菜，2008（6）：26-27.◇