共刺激分子PD—L1、PD—L2和B7—H4在宮頸癌中的表達及病理特征研究

黃慶文等

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doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2017.30.77

摘要 目的：探討共刺激分子PD-L1、PD-L2和B7-H4在宮頸癌中的表達及病理特征。方法：收治宮頸癌患者35例作為試驗組，另選擇宮頸上皮組織正常患者34例作為對照組。結(jié)果：PD-L1、B7-H4在正常宮頸中幾乎不表達，在上皮細胞瘤變組織中PD-L2和B7-H4值與對照組相比，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；患者的腫瘤浸潤度>10mm的組織中，PD-L1的表達情況明顯高于浸潤的深度，其高出的部分≤10mm（P<0.05）；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者組織中PD-L2的表達情況明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移者（P<0.05）；淋巴癌患者的宮頸癌組織中的B7-H4表達情況明顯高于淋巴轉(zhuǎn)移者（P<0.05）。結(jié)論：宮頸癌患者高表達與腫瘤的淋巴侵襲力以及轉(zhuǎn)移有關(guān)，即PD-L1、PD-L2和BT-H4發(fā)生高表達現(xiàn)象。

關(guān)鍵詞 共刺激分子；PD-L1；PD-L2；B7-H4；宮頸癌

宮頸癌是最常見的威脅女性健康的惡性腫瘤之一。大量的調(diào)查顯示，近年來宮頸癌的發(fā)生率在逐年上升，并且年輕女性的患病率也在逐漸增加。因此，做好宮頸癌的防治工作，對我國的女性健康有著重要意義。據(jù)相關(guān)文獻報告，在宮頸癌患者的局部微循環(huán)境中，往往會存在T細胞免疫水平較為低下的情況。在抑制腫瘤生長、擴散、殺傷腫瘤細胞和識別腫瘤細胞方面，T細胞發(fā)揮著重要作用。2014年1月-2017年1月收治宮頸癌患者35例，探究共刺激分子PD-L1、PD-L2和B7-H4在宮頸癌中的表達及病理特征，現(xiàn)將探究結(jié)果進行如下報告。

資料與方法

2014年1月-2017年1月收治宮頸癌患者35例作為試驗組，患者年齡35～65歲，平均（43.15±2.15）歲；其中鱗狀細胞癌29例，腺癌6例。另選擇34例宮頸上皮組織正常者作為對照組。兩組上述一般資料間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），能進行比較。

方法：儀器為DigiRetina 16；顯微鏡為光學(xué)顯微鏡；并選擇由基因公司生產(chǎn)的兔抗人PD-L1、兔抗人PD-L2以及兔抗人B7-H4，選用福州邁新公司生產(chǎn)的二抗的試劑盒。全部患者樣本均選用石蠟切片，并采用常規(guī)的方式進行脫蠟脫水，使用濃度3%過氧化氫進行孵育，時間10 min，目的是消除內(nèi)源性過氧化氫物酶的活性，并使用PBS清洗3次，先使用枸櫞酸鈉緩沖液進行PD-L1和PD-L2抗原修復(fù)，使用Tris-EDTA對B7-H4的抗原進行修復(fù)。冷卻后，使用PBS清洗3次，滴入PD-L1抗體、PD-L2抗體和B7-H4，4℃環(huán)境中靜置1夜。使用PBS洗3次，并向其中加入酶標羊抗鼠，兔IgG聚合物。在室溫環(huán)境中30 min，用PBS同樣清洗3次，并使用DAB進行顯示。再使用蘇木精進行復(fù)染，最后使用中性樹脂對其進行封片。

觀察指標：觀察PD-L1、PD-L2和B7-H4在胞膜胞質(zhì)中的染色情況。

療效評價標準：PD-L1、PD-L2和B7-H4在胞膜胞質(zhì)中的染色情況，棕黃色為陽性，無染色為陰性。

統(tǒng)計學(xué)方法：以SPSS 18.0軟件統(tǒng)計分析此次研究數(shù)據(jù)，計量資料以（x±s）表示，使用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，用X²檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

PD-L1、PD-L2和B7-H4在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌組織中的表達結(jié)果：PD-L1、B7-H4在正常的宮頸中幾乎不表達；在上皮細胞瘤變組織中，PD-L2和B7-H4值與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；在宮頸癌組織中，PD-L1、PD-L2和BT-H4與對照組相比均較高。

宮頸癌臨床病例特點與PD-L1、PD-L2和BT-H4表達的相關(guān)性：患者的腫瘤浸潤度>10 mm的組織中，PD-L1表達為明顯高浸潤的深度，其高出的部分≤10mm，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移患者組織中PD-L2的表達情況要明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移的，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；發(fā)生淋巴癌患者的患者宮頸組癌組織中的B7-H4表達情況要明顯高于淋巴轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

討論

共刺激分子在T細胞功能中能夠發(fā)揮重要作用，主要包括促進增殖化分的正調(diào)控因子以及激活T細胞等。在B7家族中，負性調(diào)控因子是一個重要的組成部分，BT-H4主要是從卵巢癌中克隆得到的，并且在除宮頸癌的乳腺癌以及肺癌等多種癌癥組織中都有表達，其在表達方面都與腫瘤的病理特征存在一定聯(lián)系。PD-L1和PD-L2也是B7家族成員的重要組成部分之一，也能夠引起T細胞凋亡和失去功能，使腫瘤細胞能夠繼續(xù)增長。

本次探究發(fā)現(xiàn)，PD-L1、PD-L2和B7-H4在正常的宮頸細胞中幾乎不表達，PD-L1、PD-L2和BT-H4在上皮細胞瘤變中表達的情況明顯好于正常宮頸組織，并且PD-L1、PD-L2和BT-H4在宮頸癌組織表達的情況明顯好于上皮細胞瘤變。說明負性調(diào)節(jié)的共刺激分子在惡性腫瘤組織中的表達比較高。在腫瘤發(fā)生的過程中，其能夠使人體正常的免疫細胞發(fā)生逃逸。

綜上所述，宮頸癌患者高表達與腫瘤的淋巴侵襲力以及轉(zhuǎn)移有關(guān)，即PD-L1、PD-L2和B7-H4發(fā)生高表達現(xiàn)象。endprint