結直腸腺癌術后組織中細胞周期素A1、E與磷酸酶及張力蛋白同源蛋白的關系

祁艷娟 秦愛萍 龍啟福 陳 凡 周 毛 趙 興 丌淑君

(青海大學附屬醫院腫瘤放療科，青海 西寧 810001)

結直腸腺癌是高增殖性的腫瘤，其增殖活性與腺體分化程度有關〔1〕。細胞周期素(Cyclin)A1可以直接調節哺乳動物機體中細胞周期，是細胞周期調控的正性因子，在G1期轉入S期過程中至關重要〔2〕。CyclinE也是細胞周期調控的正性因子，其活性是在G1期末達到高峰，是細胞進入S期的關鍵性調節基因〔3〕。磷酸酶及張力蛋白同源蛋白(PTEN)是腫瘤抑制性的基因，在正常結腸黏膜中高表達，在腫瘤性進展時表達丟失〔4〕。本文關注結腸腺癌中CyclinA1、CyclinE和PTEN表達，分析其臨床意義及相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2011年1月至2015年12月青海大學附屬醫院診斷為結直腸腺癌并行手術根治的患者102例為觀察組，其中男54例，女48例，年齡49～85歲，平均(57.0±7.8)歲。納入均經病理醫師再次閱片復診，并符合WHO中的診斷標準及分型。排除標準：①術前行放、化療；②有腸道手術史；③伴有其他器官惡性腫瘤。選擇上述病例中距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性的結腸黏膜組織23例為對照組，其中男12例，女11例，年齡51～79歲，平均(56.3±6.9)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2CyclinA1、CyclinE和PTEN蛋白的檢測 均采用免疫組化SP法，3種蛋白均為濃縮液。先進行預實驗，按不同配比濃度進行觀察，選擇最理想的濃度用于正式實驗。由同一技師操作，嚴格按實驗步驟進行，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，減少人為誤差。

1.3CyclinA1和CyclinE蛋白檢測結果的判定方法 CyclinA1或CyclinE的陽性部位是細胞核，PTEN的陽性部位是細胞質，以染成棕黃色顆粒為陽性反應細胞，均選擇上皮細胞染色分布明顯且集中的區域進行觀察，每張切片選擇3個高倍視野，計算陽性率，取平均值，以陽性細胞≥10%定為陽性，以陽性細胞<10%定為陰性。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗，線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組CyclinA1、CyclinE和PTEN表達比較 兩組CyclinA1、CyclinE和PTEN表達差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 CyclinA1、CyclinE和PTEN在兩組中表達的比較〔n(%)〕

2.2CyclinA1、CyclinE和PTEN在觀察組不同病理特征中的比較 CyclinA1、CyclinE和PTEN的陽性率均與腫瘤的最大徑和增殖指數密切相關，CyclinA1、CyclinE的陽性率與腫瘤的浸潤深度和脈管累犯密切相關。見表2。

2.3CyclinA1、CyclinE和PTEN的相關性 CyclinA1和CyclinE的表達呈正相關(r=0.50，P<0.05)，其他指標間未見明顯相關性(P>0.05)。

表2 CyclinA1、CyclinE和PTEN在觀察組不同病理特征中的比較〔n(%)〕

3 討 論

結直腸腺癌無論分化程度的高低，均伴有較高的增殖活性及較強的侵襲能力。細胞周期是細胞生命活動的重要過程，正常情況下，細胞在周期時相在變遷中進行增殖、分化、衰老及死亡的一系列狀態中〔5〕。細胞周期調控異常時，細胞將進入病理狀態，如細胞分化異常及惡性腫瘤的形成等〔6〕。CyclinA1和CyclinE是細胞周期家族的重要成員，CyclinA1屬于高度保守的細胞周期蛋白家族，具有組織特異性，可以結合轉錄因子E2F-1、P21家族蛋白等，CyclinA1可以與細胞周期蛋白依賴性蛋白質激酶2形成復合物，引起E2F-1的磷酸化，調節細胞周周期〔7,8〕。CyclinE由395個氨基酸殘基組成，于G1晚期出現，其能促進G1/S時相轉換，G1期縮短，使腫瘤繁殖時對生長因子的需要量明顯減少，增強其增生的作用。CyclinE可以與CDK1、CDK3相結合發揮生物學作用〔9,10〕。PTEN是較為經典的腫瘤抑制基因，具有磷酸酶的生物學作用，可以引起細胞內第二信使磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸(PIP3)形成去磷酸化的作用，促進細胞凋亡，阻止細胞周期的進程，抑制腫瘤形成和腫瘤細胞的繁殖〔11,12〕。

本研究結果提示CyclinA1和CyclinE高表達及PTEN低表達是促進結直腸癌形成和進展的重要因素。CyclinA1和CyclinE表達升高時可以引起腫瘤細胞的繁殖。也有研究認為CyclinA1和CyclinE是P53下游的一個靶位，能有效誘導細胞多倍體的形成，減少細胞凋亡，促進腫瘤細胞的活化〔13,14〕。本文結果提示CyclinA1、CyclinE和PTEN直接促進腫瘤細胞的增殖，引起腫瘤細胞的生長，腫瘤細胞體積明顯增大，腫瘤趨于活躍狀態〔15,16〕。本文提示CyclinA1、CyclinE二者可能對腫瘤的侵襲和脈管浸潤有一定的促進作用。也有觀點認為CyclinA1、CyclinE在腫瘤進展中的調控作用是通過P27的來實現的，進而促進細胞分化、介導細胞黏附及調控細胞凋亡〔17,18〕。本文提示CyclinA1和CyclinE二者在腫瘤進展中的作用具有協同效應。PTEN在腫瘤中的作用是去磷酸化作用形成的，其在結直腸癌中與CyclinA1和CyclinE并不具有協同效應〔19〕，其具體機制有待更多實驗來證實。

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