Notch和Wnt在人子宮內膜癌組織中的表達與臨床意義

王 靜，李 攀，程一葦

（1. 煙臺海港醫院婦產科，山東 煙臺 264000；2. 濱州醫學院煙臺附屬醫院婦產科，山東 煙臺 264000）

子宮內膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性常見的惡性腫瘤之一，發病率疾病，約有20%～30%的女性生殖惡性腫瘤為該腫瘤[1]。本文研究Notch和Wnt信號和其下游信號分子Hesl和Axin2在人子宮內膜癌中的表達及其相關性[2,3]。具體情況總結如下。

1 材料與方法

1.1 材料

本實驗選取來煙臺毓璜頂醫院以及煙臺海港醫院婦產科進行手術取材的良、惡性子宮內膜37例實驗標本（2009年6月～2010年6月），選取的所有標本均需要采取福爾馬林（10%）進行固定，同時采取石蠟進行包埋，本次實驗選取的所有患者在進行手術之前均未進行激素治療以及放化療等方法治療，且所有患者均需要采取常規病理確診，年齡為33～64歲（無顯著統計學差異）。實驗組選取15例子宮內膜癌標本，其組織類型為子宮內膜樣腺癌，手術病理分期標準參考世界衛生組織(WHO)/國際婦產科聯盟(F1GO)手術病理分期標準情況，在這15例標本中，I期的標本有8例，II期的標本有4例，III期的標本有3例；高分化(G1)的標本有5例，中分化(G2) 的標本有7例，低分化(G3)的標本有3例；對照組選取10例同期因子宮良性疾病切除子宮的正常子宮內膜標本，其患者的年齡30～51歲，同時選取12例不典型增生子宮內膜標本，其患者的年齡25～55歲。選取的所有標本均經過病理學進行確診，且均具有較為完全的資料。

1.2 試驗方法

1.2.1 免疫組織化學染色

對于本次實驗選取的子宮內膜標本（37例），每例蠟塊標本需要連續切片4張，注意要對其進行分別染色，前者采取HE染色，后者采取免疫組化染色。采用免疫組化SP法,要分別做陰性與陽性做對照。

陽性蛋白表達判斷標準:對于蛋白的陽性染色需要采取定位處理，定位在其細胞質/細胞核等處。隨后需要采取IMAGE-PRO PLUS圖像分析系統對其進行相應地處理，主要是測量子宮內膜陽性細胞光密度值（OD）。

1.2.2 RT-PCR

總RNA提取：首先需要選取一定量的組織標本（50～100mg），隨后向標本中添加1mlTRIzol試劑(GibocoBRL)，對總DNA的提取需要按照說明書進行操作。

RT-PCR檢測信號分子的表達：Gen Bank是Hedgehog信號通路相關基因序列的來源，且該序列(表1)是由賽百勝公司進行合成的。對于PCR產物10μl需要采取1.5%瓊脂糖凝膠電泳處理。

2 結 果

2.1 子宮內膜樣腺癌癌變過程中notch和wnt蛋白的表達

2.1.1 子宮內膜組織notch1的表達

在息肉的腺體上皮細胞低表達notch-1，基質和血管也不表達notch-1。相比而言，在增生內膜腺體組上notch-1表達增加，對其進行中等染色，其基質往往并不表達，而部分內皮細胞上低水平往往表達為notch-1。而癌組上，notch-1不在腺體中的表達十分弱，而在基質中往往表達較強。從增生組到癌組，其notch-1核染色會出現逐步的增加與提升。

2.1.2 子宮內膜組織wnt的表達

經過調查結果顯示，在正常子宮內膜組、增生組和癌組中Wnt均表達，且呈現了顯著的上升趨勢，即增生組和癌組的Wnt表達情況顯著高于正常子宮內膜組。

2.2 子宮內膜組織中HES-1和Axin-2的表達

RT-PCR擴增及電泳等處理子宮內膜組織后，會在DNA標準600bp的周圍部分顯示出HES1條帶，且在DNA標準500bp周圍部分顯示出Axin2清晰條帶（圖1）。相應的基因在增殖期子宮內膜、良性子宮內膜增生及子宮內膜樣腺癌組織均有所表達。

圖1 子宮內膜樣腺癌癌變過程中hes-1和Axin2的表達（M1，2正常組織；M3,4增生組織；M5,6,7癌；M8癌旁組織）

3 討 論

3.1 Notch和HES1

Notch是一個膜受體，屬于生長因子家族，結構和功能比較保守。在哺乳動物家族中含有四種成分（N1-N4）。研究證實，Notch受體和胚子在細胞分化、增殖和凋亡過程中具有重要作用[4,5]。

我們研究了關于不同時期子宮內膜的Notch-1的表達等相關情況，主要是為了研究在人體的子宮內膜內調控細胞命運的過程。研究結果顯示，在正常的子宮內膜中，Notch表達能力十分弱，而在分泌期的表達能力比其他時期強，bHLH樣的常見的轉錄因子為Hes1，該轉錄因子可以調節細胞增殖、分化等相關的基因的表達。許多研究顯示[6]，多種實體腫瘤的發生與Notch1受體的異常表達有著密切的關系，例如結腸癌、宮頸癌、胰腺癌以及皮膚癌等[13,14]。

3.2 Wnt和Axin2

控制胚胎生長發育的信號傳導的一條重要途徑便是Wnt信號通路，該通道具有多方面的調節作用，包括細胞增殖、黏附及機體發育等方面。調控β-catenin蛋白降解的關鍵分子包括Axin，該分子具有保持Wnt通路的低活性狀態，同時具有調節細胞的增殖和凋亡等重要作用。

本實驗結果發現，Notch、Wnt和HES1、Axin2四種信號都會具有一定程度的表達，且其效應分子也會出現一定程度的表達，這些表明兩類物質均會影響子宮內膜癌的形成發展過程。但是其具體的影響，還需要進一步進行研究與分析。