化濁毒中藥對2型糖尿病并發急性腦梗死患者動脈彈性指數、舌上細胞凋亡指數及核因子κB的影響

史春林，陳建權，張海生，張國良，劉大永，劉冬敏，王玉超

（玉田縣醫院中醫科，河北 唐山 064100）

急性腦梗死是2型糖尿病患者最常見的血管事件之一，具有較高的病死率及致殘率[1]。常規的內科治療歷來是治療此病的主要方法，除此以外疾病早期溶栓治療、部分介入及手術治療也占據重要地位，但由于受到病情、個體化因素、經濟因素等原因的限制，使后續治療局限性加大[2]。我們選擇120例2型糖尿病并發急性腦梗死無溶栓機會的患者，觀察化濁毒中藥對此類患者動脈彈性指數、舌上細胞凋亡指數及舌苔NF-κB蛋白表達的影響。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013年7月～2017年8月挑選120名玉田縣醫院神經內科病房和中醫病房住院的失眠患者，采用隨機對照的方法進行研究，分為對照組53例，對治療組67例。兩組在性別、年齡、病程、病情程度等方面，差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 診斷標準

已確診為“ 2型糖尿病”的年齡≥60歲患者為診斷的選擇標準，經臨床、CT、MRI證實為腦梗死患者并符合在中華醫學會精神科分會編制的《中國精神疾病分類與診斷標準》[3]（CCMD-2R）中有關于失眠癥的診斷標準。

1.3 治療方法

治療組采用化濁毒中藥（黃連6g，半夏12g，瓜蔞9g，白術60～120g，天麻9g，茯苓12g，枳實12g，半枝蓮9g，半邊蓮9g，紅景天12g，三棱9g，莪術9g，焦三仙各15g日1劑早晚分服），對照組給予地西泮片5mg睡前頓服1/日治療。30d為1個療程，1個療程后統計療效。兩組患者都根據病情使用營養腦細胞、改善微循環藥物。在用藥前、后觀察心肌酶、轉氨酶情況。

1.4 動脈彈性指數的測定

所有受試者在檢測前靜息30min，在安靜環境下取仰臥位，采用美國HDI公司CVProfilorTMDO2020型動脈彈性功能測定儀系統測量血管彈性。選用合適的袖帶于右側肱動脈位置測量臥位血壓，將動脈脈沖壓力傳感器置于左側橈動脈搏動最強處，采集橈動脈搏動波形圖30s，計算機分析舒張期壓力及振蕩衰減，應用修正的Windkessel循環模型計算出大動脈彈性指數（C1）和小動脈彈性指數（C2），分別測量3次取平均值。

1.5 舌上皮細胞凋亡檢測（缺口末端標記技術，TUNEL法）

舌苔懸液經1000r/10 min離心并400目濾網過濾，PBS 洗滌3次，用沉淀做細胞涂片，晾干3h；4%多聚甲醛固定1h后PBS洗3次，1%曲拉通（4℃作用10min）再用PBS洗滌3次；加入TUNEL液37℃孵育1h后，PBS洗3次；POD37℃作用30min，DAB顯色（5min），蘇木素復染，晾干，封片，鏡檢。隨機選取1000個舌上皮細胞，細胞核中有棕黃色顆粒者為陽性細胞，觀察陽性細胞所占比例，記為細胞凋亡指數（apoptosis index，AI）。

1.6 舌苔NF-κB蛋白表達

各組細胞在37℃、體積分數為5%CO2條件下培養（舌苔懸液處理后細胞培養1h），提取總蛋白要采用細胞裂解液，BCA法測定蛋白濃度。取50μg總蛋白樣品煮沸變性后，SDS－PAGE電泳，然后將電轉移至硝酸纖維素膜上，在封閉液的容器中講用雙蒸水漂洗過的膜放入，室溫下脫色搖床上 4℃振蕩過夜。加入用TBS/T稀釋至適當濃度的一抗，4℃振蕩過夜。TBS/T洗膜。加入封閉液稀釋的二抗，4℃振蕩過夜，TBS/T洗膜。將膜與ECL反應5 min后，曝光于X光膠片上，顯影、定影、掃描后進行圖像分析。（所有標本送檢上海西唐生物科技有限公司）。

1.7 統計學方法

采用SPSS17.0軟件對數據進行統計學處理，實驗數據以表示，計量資料采用t 檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

表1 各組治療前后動脈彈性指數變化（

表1 各組治療前后動脈彈性指數變化（

與對照組治療后比較：※P＜0.05；與治療前比較△P＜0.01。

組別 n 時間 動脈彈性指數（分）C1 C2對照組 53 治療前 8.93±2.76 3.98±0.93治療后 10.75±2.91 4.32±1.09治療組 67 治療前 8.72±2.71 3.93±1.08治療后 12.09±3.07※△ 6.69±1.45※△

治療后對照組動脈彈性指數呈上升趨勢，但治療前后，差異無統計學意義（P＞0.05）。治療前與治療后對比，差異有統計學意義（P＜0.05），與對照組治療后比較，動脈彈性指數明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表2 各組治療前后舌上皮細胞凋亡指數及舌苔NF-κB蛋白表達變化s）

表2 各組治療前后舌上皮細胞凋亡指數及舌苔NF-κB蛋白表達變化s）

與對照組治療后比較：※P＜0.05；與治療前比較△P＜0.01。

舌苔NF-κB拷貝數（μlcDNA）對照組 53 治療前 6.73±5.26 260.937±261.331治療后 9.06±5.19 203.324±201.093治療組 67 治療前 6.57±5.71 261.393±259.108治療后 11.43±8.42※△ 119.690±136.145※△組別 n 時間 舌上皮細胞凋亡指數（分）

治療后對照組舌上皮細胞凋亡指數呈上升趨勢，但治療前后對比無統計學意義（P＞0.05）。治療前與治療后對比有統計學意義（P＜0.01），與對照組治療后比較，舌上皮細胞凋亡指數明顯升高，有統計學意義（P＜0.05）。

治療后對照組舌苔NF-κB拷貝數呈下降趨勢，但治療前后對比無統計學意義（P＞0.05）。治療前與治療后對比有統計學意義（P＜0.01），與對照組治療后比較，舌苔NF-κB拷貝數明顯升高，有統計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

缺血性腦卒中的患者進行早期二級預防，有利于患者通過尋找卒中事件發生的原因，糾正所有可干預的危險因素，達到預防卒中再發的目的。缺血性腦卒中的二級預防包括: 控制血壓、血糖、抗血小板、抗動脈粥樣硬化，以及血脂的管理，手術治療，必要的介入治療，以及改變生活方式等。因此，對糖尿病并發急性腦梗死且無溶栓機會的患者如何進行肢體、語言、高級腦功能的恢復，降低致殘率，提高生活質量等嚴峻的問題亟待解決。

2型缺血性腦血管病危險因素之一是糖尿病。現代研究發現：長期的高血糖狀態使一氧化氮滅活加速，從而影響血管內皮細胞合成和釋放一氧化氮減少，血管平滑肌對內皮源性一氧化氮反應性降低，血管的擴張性減弱，動脈順應性降低，最終導致動脈彈性的降低，主要表現為近端彈性大動脈順應性及遠端小動脈彈性和微循環順應性降低，即C1和C2的降低。中醫學認為人體是有機整體，糖尿病對血管的損傷涉及到全身微血管及大血管。因此，我課題組將此評價指標引入到此項研究中。

舌背黏膜為復層鱗狀上皮，舌背黏膜為復層鱗狀上皮，復層鱗狀上皮不斷從基底層經棘細胞層、顆粒層向角化層遷移，當機體處于健康狀態時，此種遷移就會處于平衡狀態，一般正常人都是薄白苔。影響這種平衡遷移可能就是機體產生病變了，舌苔就會出現厚薄不同、顏色各異的變化情況。舌苔變化是機體臟腑功能發生變化的外在表現，并且是直觀和客觀的統一，可以作為疾病的輔助診斷指標，也可以有效指導臨床用藥和判斷預后。因此，本項研究將舌苔變化作為此項研究終點評價的重點。

核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）的轉錄活性與2型糖尿病微血管內皮細胞受損密切相關，NF-κB活化后能誘導黏附分子轉錄，是糖尿病微血管內皮細胞炎性反應過程的核心因素，Haslbeck等研究證實，糖基化終末產物（advanced glycation end products，AGEs）及其受體（receptor of AGEs，RAGE）結合引起NF-κB 持續活化，可調控其下游一系列細胞因子的表達，在糖尿病周圍神經病變甚至更早期的糖耐量異常相關的周圍神經病變患者中，活檢發現活化的NF-κB可在神經束膜及神經外膜血管和部分神經內膜血管上表達[4]。因此，本項研究亦將核因子κB信號通路作為此項研究終點評價之一。

本次研究發現，化濁毒中藥化濁毒中藥能明顯升高動脈彈性指數及舌上細胞凋亡指數，同時可降低舌苔懸液中NF-κB的含量。本方法可恢復2型糖尿病并發急性腦梗死無溶栓機會的患者肢體、語言、高級腦功能，降低致殘率，提高生活質量，可能是與調節該類患者的動脈彈性指數、舌上細胞凋亡指數及舌苔NF-κB蛋白表達有關。但本結果需進一步加大樣本量進行臨床驗證。